高效液相色谱法测定食品中5种非法添加物

2019-08-07陈芩郝帅张艳芳

现代农业科技 2019年12期

陈芩郝帅张艳芳

摘要本文建立了高效液相色谱法测定食品中罂粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因等5种非法添加物的检测方法，色谱柱ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm 5-Micron），流动相为0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸铵溶液-乙腈（10∶90），流速0.3 mL/min，检测波长280 nm，进样量10 μL，柱温30 ℃，进行定量分析。结果表明，在浓度为0.01～10.00 μg/mL范围内，标准曲线线性关系良好（相关系数R2>0.999 0），罂粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因的检出限分别是0.05、0.03、0.10、0.10、0.05 μg/mL。5种生物碱加标水平在1.2、1.5 mg/kg时，回收率为88%～93%，相对偏差为1.4%～3.2%。该方法方便快捷、成本较低、操作简便、分析快速，可用于食品中5种非法添加物的检测。

关键词罂粟碱;那可丁;吗啡;可待因;蒂巴因;高效液相色谱法

中图分类号 TS207.3;O657.63 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2019）12-0221-02

Abstract The detection method of papaverine hydrochloride，noscapine hydrochloride，morphine，codeine and thebaine in foods by HPLC was established.The chromatogram conditions included ZORBAX SB-C18（4.6×150 mm 5-Micron），10 mmol/L ammonium acetate solution of 0.1% formic acid and acetonitrile（volume ratio 10∶90）as the mobile phase，isocratic elution（speed：0.3 mL/min），ultraviolet detector（UVD，280 nm），10 μL injection volume and 30 ℃ column temperature.The results showed that，under the concentration range of 0.01-10.00 μg/mL，the standard curve had a good linear relationship（correlation coefficient R2>0.999 0），the detection limits of papaverine hydrochloride noscapine hydrochloride，morphine，codeine and thebaine was 0.05 μg/mL，0.03 μg/mL，0.10 μg/mL，0.10 μg/mL，0.05 μg/mL，respectively.The recoveries of five alkaloids were 88%-93% and the relative deviations were 1.4%-3.2% at the standard addition levels of 1.2 mg/kg and 1.5 mg/kg.The method is convenient，quick，low in cost，simple in operation，fast in analysis，and can be used for detecting five illegal additives in food.

Key words papaverine hydrochloride;noscapine hydrochloride;morphine;codeine;thebaine;HPLC

罂粟壳中含有吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等生物碱类物质，其中吗啡、可待因和罂粟碱在罂粟壳中含量较高，比较有代表性[1]。我国于2009年发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中就有罂粟壳，并标注了可能添加的主要食品类别为火锅、火锅底料及小吃类，另外还有可能用于卤味制品、饮料中[2]。罂粟壳中的生物碱虽然含量较少，但长期食用会对人体神经系统造成损害，并可能造成慢性中毒[3]。目前，同时检测吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等生物碱类物质的方法主要是液质联用法，但该方法成本较高、前处理较为复杂，很难得到普及[4-5]。因此，建立一种方便快捷、定量准确、线性关系良好的高效液相色谱法非常具有实际意义[6]。

1 材料与方法

1.1 试剂与儀器

1.1.1 试剂。5种药品的纯度分别为罂粟碱99.9%、那可丁98.0%、蒂巴因99.9%、可待因99.9%、吗啡99.6%，美国A ChemTek公司生产;其他试剂有乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯）、无水硫酸镁（研磨后在500 ℃马弗炉内烘5 h，200 ℃时取出装瓶，贮存于干燥器中，冷却后备用）、无水乙酸钠（分析纯）、盐酸（0.1 mol/L）、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）填料（粒度40～70 μm）、C18填料（粒度40～50 μm）。

1.1.2 仪器。高效液相色谱仪：Agilent 1200，美国安捷伦科技有限公司（配有DAD检测器）生产。电子分析天平：AUY-220，日本岛津生产。涡旋混合器：WH-2，金坛市新航仪器厂生产。高速冷冻离心机：TGL-16M，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司生产。超声波清洗仪：AS10200T-10L，天津奥特赛恩斯仪器有限公司生产。滤膜（0.22 μm）。

1.2 试验方法

1.2.1 样品前处理。①试样提取：称取2 g试样（精确到0.01 g）于50 mL聚四氟乙烯离心管中，液体样品、半固体样品加入5 mL水，固体样品加入5 mL盐酸溶液，分别涡旋振荡30 s，加入15 mL乙腈，涡旋振荡1 min，超声30 min，加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠的混合粉末，迅速振摇，涡旋振荡1 min，5 000 r/min离心5 min，取上清液待净化。②试样净化：称取150 mg PSA、300 mg无水硫酸镁、300 mg C18粉末置于10 mL聚四氟乙烯離心管中，移取5 mL上清液至此离心管中，涡旋振荡1 min，10 000 r/min离心5 min，取上清液，经0.22 μm滤膜过滤，待检测。

1.2.2 仪器条件。检测器为二极管阵列检测器;色谱柱为ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm 5-Micron）;流动相为0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸铵溶液∶乙腈（10∶90）;柱温30 ℃;进样量10 μL;检测波长280 nm。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

按照试验方法进行检测，建立标准曲线，曲线类型为线性回归，横坐标为标准使用液浓度，纵坐标为目标物峰面积，得到5种生物碱的相关系数均在0.999 0以上，线性关系良好，结果见表1、图1～5。

2.2 5种生物碱标准使用液HPLC色谱图

本方法分离效果明显，峰型理想，出峰时间较早，为食品中5种非法添加物的检测提供了一种快速有效的方法（图6）。

2.3 方法的回收率和精密度

在不含目标的样品中添加标准物质后，按试验方法进行提取、净化和测定，其回收率和精密度结果见表2。可以看出，5种生物碱加标水平在1.2、1.5 mg/kg时，回收率为88%～93%，相对偏差为1.4%～3.2%。表明本方法的回收率稳定，可满足实际样品检测要求。

3 结论

本文建立的方法操作简单、选择性强、灵敏度高，简化了食品中非法添加罂粟壳的检测流程，提高了工作效率，节省了检测成本，为打击食品中非法添加罂粟壳的行为提供了一种行之有效的有力依据，保证了消费者的合法利益和人身安全。

4 参考文献

[1] 戴萌娜，张建华，井淇，等.食品添加罂粟壳根源分析与对策研究[J].食品工业，2018，39（1）：243-245.