手工微柱凝胶免疫检验法在ABO、RhD血型抗原鉴定中的应用

杨径闲

（吉林省松原市中心医院，吉林 松原 138000）

0 引言

人体遗传性状之一就是血型，血型是指血液中红细胞、白细胞、血小板表面的抗原类型。血型通常是指红细胞膜上特异性抗原类型，临床运用最多的包括ABO、Rh两大血型系统。ABO血型分型是根据红细胞膜上是否存在抗原A与抗原B而进行鉴别的，A型仅有抗原A，B型只有抗原B，AB型则同时存在A和B抗原，O型则无这两种抗原。血型不同血清中抗体不同，但不含有对抗自身红细胞抗原的抗体。人的红细胞上具有与恒河猴同样的抗原称为Rh阳性血型，不含有此种抗原则称为Rh阴性血型。在我国Rh阴性率仅为1%左右。最复杂的红细胞血型就是Rh系统，已发现40余种Rh抗原，其中D抗原抗原性最强，所以也将含有D抗原的红细胞血液称为Rh阳性，而缺乏D抗原的红细胞血液称为Rh阴性[1]。血型系统是在独立遗传基因控制下经若干相互关联抗原抗体组成的[2]。鉴定ABO血型主要是检测红细胞中A、B抗原及抗A和抗B抗体。血液中除ABO血型以外还存在特殊血型，如Rh型，因此在血型鉴定中要高度注意[3]。现就我院采用手工微柱凝胶免疫检验法鉴定ABO、RhD血型抗原的临床效果进行归纳，详细报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月至12月来我院体检的1200例体检者为研究对象，其中男性610例，女性590例；年龄12～52岁，平均（34.8±0.2）岁。所有研究对象未应用影响血型检测结果的药物、也不存在影响检测结果的相关疾病，自愿参与本次研究，签署知情同意书。排除哺乳期、妊娠期者以及精神病患者。

1.2 研究方法

①常规试管检测：用一支试管滴入1滴抗D试剂，加入1滴2%～5%被检红细胞悬液，摇匀后1000 r/min条件离心1min，在试管凝集完全、液体清亮后以肉眼观察试管底是否存在红细胞凝块、管底细胞是否出现花边状，再用手指轻轻弹一下试管后，观察凝块分散情况，不凝的液面清亮，试管底部血红细胞均匀沉积，边缘整齐，轻弹试管后红细胞上升而呈均匀悬液。轻微凝集试管则将液体转至载玻片实施镜检，得出结果。若凝集结果显示存在D抗原则为RhD阳性，否则为RhD阴性。鉴定ABO血型判断依据为IgM类特异性血型抗体和红细胞膜上特异性抗原结合的凝集反应。②手工微柱凝胶免疫检验法：采集血液标本5mL，分成3份，分离血清及红细胞，制备红细胞悬液（1%），取50μL标本加入抗A、抗B、抗O微柱凝胶检测试管，离心，观察红细胞凝集于微柱表面的血液样本为阳性，沉在底部的是阴性。

2 结果

手工微柱凝胶免疫检验法与常规试管法鉴别ABO、RhD血型抗原的结果完全一致，1200例体检者ABO阳性率96.58%、RhD阳性率0.25%，检测结果无统计学差异性（P＞0.05），见表1。

表1 两种检测方法的判断结果[n(%)]

3 讨论

血型检验具有非常重要的临床意义，只有准确的血型配型才能保证不会发生输血凝集现象[4]。血型检验在产前检查中也非常重要，二者ABO血型不和或Rh血型不和都会诱发胎儿及新生儿溶血，继而出现死产、死胎等严重性不良结局[5]。对所有需要输血抢救的患者在输血之前都要完善血型鉴别。ABO血型是器官移植、输血等过程中必须使用的一种血型系统，只有完善血型鉴别之后才能确保临床输血治疗的安全[6]。受血者、供血者中任何一方ABO血型鉴定错误都可能导致输注异型血，溶血性输血反应风险明显增加，患者则有生命危险。在ABO正反定型不符时，准确及时找出原因、正确鉴定血型对临床意义重大[7]。常规试管法测定血型在初次血型鉴定中应用广泛，所需的仪器要求不高。操作过程中试管清洁度要求较高是为了避免假凝集，先加血清、后加红细胞悬液是为了核实血清是否漏加，离心时间、速度都必须控制得当，在光线背景重组下观察凝集程度，快速记录结果[8-10]。常规试管法是临床输血检验中的传统手段，是输血检验的金标准，但该检验需要耗时较多，还需对红细胞进行洗涤3次、恒温培养1 h后才能获得检测结果，这对于急危重症患者则会延误最佳治疗时机而加重病情[11]。临床上实际检测过程中经常发生试剂不标准或污染、失效等情况，实际添加错误或离心控制不佳、细胞和血清比例不适合、结果判断误差等都会造成最终鉴定效果偏差。还有部分血型抗原减弱类疾病患者的血型抗原含量降低而难以被检出，部分抗体效价低者也不容易被检出[9]。近些年大家推崇使用手工微柱凝胶免疫检验法，在血型鉴定中具有极其重要的地位[12]。手工微柱凝胶免疫法的原理：以凝胶为填充物，充分结合离心技术、凝胶分子筛过滤技术以及血型血清学抗原体反应特异性技术等，在反应后红细胞凝集，离心不能通过凝胶间隙，滞留在凝胶上层和分散凝胶中，此时为阳性，反之则为阴性[13]。目前，微柱凝胶法在国内外输血领域应用广泛，主要用于交叉配血、血型鉴定、抗体筛检、以及IgG抗A、IgG抗B滴度检测等在分子排阻层析原理下经过微小凝胶颗粒构成的滤网在离心下实现与抗体反应的红细胞悬浮在胶中或胶表面、与抗体不反应的红细胞沉到微柱凝胶尖底部，最后通过自动化仪器或肉眼来判读结果[14]。国内外越来越多的医疗机构采用微柱凝胶法鉴定ABO、RhD血型抗原，且分为自动化、手工两种，手工微柱凝胶免疫检测ABO、RhD血型抗原专用鉴定卡是ABO、RhD血型抗原常规鉴定所用，具有与试管法一致的灵敏性和准确性，但其反应强度更高[15]，特别是进行抗D鉴定时的反应强度明显增高，所以更适合抗D鉴定。微柱凝胶法检测血型抗原快速、简单、省时省力，能得到稳定的检测结果图谱，便于事后追查。但微柱凝胶法鉴定陈旧血液标本时假阳性率偏高，因此采用此法鉴定血型抗原时要注意使用新鲜血液标本。另外，血清中纤维蛋白也会引起微柱凝胶法鉴定结果假阳性，所有红细胞悬液制定时要避免带有纤维蛋白细胞凝块[16]。本组选择1200例体检对象先后分别运用常规试管法、手工微柱凝胶免疫检验法鉴别ABO、RhD血型抗原，结果表明两种检测方法的血型抗原鉴定结果一致。所以说，手工微柱凝胶免疫检验法鉴别ABO、RhD血型抗原的临床效果与常规试管法的检测效果相当，且操作简单、结果判断准确、灵敏性高，临床应用前景广阔，值得推广使用。