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乌药、大黄对重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

2019-07-11马留学刘伟国邹忠东李龑

中外医学研究 2019年13期
关键词:重症急性胰腺炎

马留学 刘伟国 邹忠东 李龑

【摘要】 目的:研究乌药、大黄对重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响。方法:60只SD大鼠均建立重症急性胰腺炎模型,造模后随机分为四组,对照組(A组)予0.9%氯化钠注射液灌胃,大鼠于造模后死亡或第4天处死取小肠、结肠送病理,大黄组(B组)予大黄水煎液灌胃,乌药组(C组)予乌药水煎液灌胃,乌药+大黄组(D组)予乌药、大黄水煎液灌胃,干预3天(第4天)全部处死,取小肠、结肠送病理、末端回肠行肠黏膜通透性检测,处死前下腔静脉取血行内毒素、DAO、D-乳酸检测。结果:四组黏膜结构的改变、修复有显著差异,其中B组、C组、D组均优于A组,且D组优于B组及C组。四组肠黏膜通透性有显著性差异,其中B组、C组、D组均优于A组,且D组优于B组及C组(P<0.05)。各组内毒素、DAO、D-乳酸有显著性差异,其中B组、C组、D组均优于A组,且D组优于B组及C组(P<0.05)。结论:大黄水煎液对重症急性胰腺炎大肠黏膜组织损伤有修复作用,乌药水煎液对重症急性胰腺炎小肠黏膜组织损伤有修复作用,两药合用作用效果更佳。

【关键词】 重症急性胰腺炎; 肠屏障功能; 乌药; 大黄; 大鼠

doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2019.13.001 文献标识码 A 文章编号 1674-6805(2019)13-000-04

Effects of Wuyao,Dahuang on Intestinal Barrier Function in Severe Acute Pancreatitis Rats/MA Liuxue,LIU Weiguo,ZOU Zhongdong,et al.//Chinese and Foreign Medical Research,2019,17(13):-4

【Abstract】 Objective:To study the effect of Wuyao,Dahuang on intestinal barrier function in severe acute pancreatitis.Method:A total of 60 SD rat model of severe acute pancreatitis,after building randomly divided into 4 groups,control group(group A) used 0.9% Sodium Chloride Injection to fill the stomach,the rat died or 4 days after building executed in small intestine,colon pathological,Dahuang group(group B) used the Dahuang decoction lavage fluid,Wuyao group(group C) used the black liquid medicine decoction lavage,Wuyao+Dahuang group(group D) used the decoction of Wuyao,Dahuang lavage fluid.Intervention for 3 days(the fourth day),the intestinal mucosa was detected by intestinal tract,colon pathology and terminal ileum,The intravenous blood endotoxin,DAO,d-lactic acid test were taken in the inferior vena cava.Result:The changes of repair mucous membrane structure had significant differences among the four groups,and group B,C,D were superior to group A,group D was better than that of group B and group C.The intestinal mucous membrane permeability among the four groups had significant differences,and group B,C,D were superior to group A,group D was better than that of group B and group C(P<0.05).The endotoxin,DAO,D-lactic acid had significant difference among the four groups,and group B,C,D were superior to group A,group D was better than that of group B and group C(P<0.05).Conclusion:Dahuang Decoction can repair the damage of large intestinal mucosa in severe acute pancreatitis.Wuyao Decoction can repair the damage of small intestinal mucosa in severe acute pancreatitis.The combination of the two drugs has better effect.

【Key words】 Severe acute pancreatitis; Intestinal barrier dysfunction; Wuyao; Dahuang; Rats

First-authors address:Wuwei Liangzhou Hospital,Wuwei 733000,China

重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是一种发病及进展迅速,同时伴发多种并发症状、预后差的消化系统危重疾病。研究证明,肠道作为SAP所致并发症的中心器官和能动器官,能引起全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。而SAP引起级联反应,造成严重并发症的关键问题在于肠黏膜屏障功能(intestinal barrier function,IBF)的破坏,SAP预后的关键在于如何改善并维持肠屏障功能,并积极预防肠源性感染。因此,IBF成为当今SAP研究的热点[1-2]。研究发现,急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠72 h后空肠肌移动复合波周期长度较对照组明显延长[3-5]。文献[6-7]发现MSAP患者全部和部分结肠通过时间(主要是右和左半结肠)较轻症胰腺炎(MAP)患者及对照组明显延长。小鼠的体内实验表明,乌药可促进胃肠收缩,改善小肠炭末推进率[8]。结合蒽醌作为大黄的有效成分是有良好的泻下作用[9-12]。本研究利用多角度观察实验性SAP大鼠肠黏膜屏障的变化,包括结肠与小肠结构的损伤与修复,末端回肠通透性、血清内毒素、DAO、D-乳酸。进而评价大黄、乌药对重症胰腺炎肠黏膜屏障的保护作用,说明大黄及乌药在体内的作用部位为临床用药提供理论依据,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料

实验动物:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只(福州总医院比较医学科提供),体重250~300 g。试剂:牛磺胆酸钠,由Sigma公司提供(纯度95%)。

1.2 方法

1.2.1 SAP大鼠动物模型的建立 实验大鼠禁食12 h,自由饮水,自胰尾部开始,利用1 ml注射器注入3.8%牛磺胆酸钠1 ml于被膜下,多点缓慢均匀,使胰腺整个均匀隆起。短时间内,可见胰腺组织充血、水肿,包膜下胰腺组织成点状或小片状出血。

1.2.2 中药汤剂制备方法 大黃、乌药均由福州总医院中药房鉴定、提供。分别取乌药12 g,大黄24 g,蒸馏水浸泡1 h,利用自动煎药机分别将大黄煎煮15 min,乌药煎煮30 min,冷却至37 ℃~38 ℃后,密封包装,备用。

1.2.3 分组及给药方法 按1.2.1的方法将全部动物造模,利用全自动血液生化分析仪检测淀粉酶含量,均高于2 000 U/L提示造模成功。随机将其平均分为对照组(A组)、大黄组(B组)、乌药组(C组)、乌药+大黄组(D组),每组15只大鼠。自第2天开始,连续3 d每组分别给药,按1.5 ml/100 g灌胃。其中A组予0.9%氯化钠注射液,连续3 d,大鼠于造模后死亡或第4天处死取小肠、结肠送病理检查;B组第2天予大黄水煎液,C组第2天予乌药水煎液,D组第2天予乌药、大黄水煎液。治疗3 d后,取前下腔静脉血检测血清中DAO、D-乳酸浓及内毒素浓度(ELISA法),B、C、D组大鼠全部处死,取小肠和结肠组织送病理检查,取末端空肠予肠黏膜通透性检测(测FITC-Dextran量)。

1.2.4 标本采集方法 下腔静脉取血以3 000 r/min离心15 min,ELISA检测血清DAO、D-乳酸浓及内毒素浓度。处死后即刻剪取小肠(回盲部5 cm处空肠)、结肠,以生理盐水轻柔冲洗肠腔内容物后,无菌滤纸吸干水分,经福尔马林固定液固定,

24 h后,常规脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,4 μm连续切片,福州总医院病理科行染色检查,另取末端回肠生理盐水轻柔冲洗,将一端结扎封闭,另一端灌入200 μl浓度为40 mg/ml的FITC-Dextran溶液后结扎,将肠段放入装有20 ml生理盐水的小杯中,37 ℃摇60 min,将荧光强度的标准曲线设定为0、10、20、30、40、50 μg/ml梯度,检测取肠囊外溶液FITC-Dextran荧光强度,换算为μg/ml,计算出20 ml生理盐水内总的FITC-Dextran量,即反映肠黏膜通透性的变化[13]。

1.3 观察指标

观察各组肠黏膜结构损伤及修复情况、肠黏膜通透性变化情况、血清内毒素、DAO及D-乳酸浓度变化情况。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件包对所有数据进行统计学处理,正态分布的计量资料以(x±s)表示,多组比较采用单因素方差分析F检验,均为双侧检测,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SAP大鼠大体观察

术后第4天可见大片胰腺坏死,血性腹水少量,可见胰周脂肪皂化、出血,胃膨胀,小肠肠腔扩张、淤血,蠕动减慢或消失,颜色变暗,肠壁偶有炎性黏液,剖检可见肠黏膜充血、肿胀、糜烂,偶有坏死,证明肠损伤严重,部分结肠扩张,说明重症胰腺炎造模成功,见图1。

2.2 小肠组织病理学改变

HE染色观察:结果显示,A组肠黏膜损伤严重,肠黏膜各层(下层、肌层、浆膜层)坏死,绒毛脱落,炎细胞浸润;B组肠黏膜破坏,绒毛坏死脱落,炎细胞浸润、水肿,固有层残存少量腺体;C组肠黏膜有大量炎细胞浸润,绒毛血管扩张充血,偶有上皮细胞坏死,脱落;D组肠绒毛形态基本完整,部分绒毛变钝,固有层腺体丰富,间质少量炎细胞浸润,见图2。

2.3 结肠病理学改变

HE染色观察:A组肠损伤严重,肠黏膜层、肌层及浆膜层坏死;B组肠黏膜可见较多炎细胞浸润,部分腺体破坏,黏膜及黏膜下血管轻度扩张充血;C组肠黏膜可见较多炎细胞浸润,部分腺体破坏;D组肠黏膜完整,腺体结构完好,间质少量炎细胞浸润,见图3。

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