基因芯片检测载脂蛋白E多态性与阿托伐他汀调脂关系

黄健中 陈冬萍 石艳 肖建民

在脂质代谢中，载脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）作为配体与LDL受体（ApoE受体）结合，可影响血脂水平，尤其是LDL-C的重要遗传因素之一[1]。但不同人群和个体，在控制血脂水平方面，存在着明显的差异[2]。这种差异可能与不同个体间药物受体基因多态性、药物转运蛋白基因多态性、药物代谢酶基因多态性有关[3]。近年来，关于ApoE不同基因亚型对调脂药物相关性研究有很多，特别针对他汀类药物[4]。本研究拟观察不同ApoE基因型高脂血症患者，在应用阿托伐他汀前后的血脂水平的变化程度，以探讨ApoE基因多态性对阿托伐他汀调脂作用的影响，为未来个体化治疗方案建立供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

入选标准：入选对象选自2017年3月—2018年3月在东莞市第五人民医院心血管内科门诊或住院患者301例，符合《中国成人血脂异常防治指南（2016年修订版）》[5]中的诊断标准，并符合以下条件之一：空腹血清检查总胆固醇（TC）≥5.18 mmol/L或低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）≥3.37 mmol/L。

1.2 排除标准

（1）近3月内服用过降脂药物；（2）家族性高胆固醇血症者或药物引起的高脂血症者；（3）存在内分泌相关疾病；（4）严重的肝、肾功能损害；（5）严重高血压不能控制和/或未控制的糖尿病；（6）妊娠或准备怀孕、哺乳期妇女；（7）过敏体质及急性炎症期患者；（8）有严重烟、酒嗜好者。

1.3 研究对象一般资料

所有研究对象采集个人信息如：年龄、性别、体质量、身高、家庭住址、联系方式等，对患者病史资料进行问询如：高血压病史、冠心病病史、糖尿病病史、吸烟史等资料。

1.4 药物治疗

首次抽采外周血后开始服用阿托伐他汀钙片，每次20 mg，每晚1次，饭后服。治疗期间维持低脂饮食。

1.5 血液样本采集与测定

所有研究对象均在空腹8 h后次日早晨抽采外周静脉血6 mL。3 mL立即送化验室应用全自动生化分析仪测定总胆固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）低密度脂蛋白-胆固醇（Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C），并于第12周末空腹8 h抽采外周静脉血3 mL复查上述指标。3 mL置于乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）管中，送中心实验室于低温冰箱中保存，3天内分离血清后用基因分型芯片法测定ApoE基因并分型。主要仪器及试剂：ApoE基因分型芯片法检测试剂盒（珠海赛乐奇生物）；聚合酶链锁反应（Polymerase chain reaction，PCR）扩增仪（ABI2720）；基因芯片阅读仪（Sinochips-PGA，珠海赛乐奇生物技术）。根据ApoE基因表型分型的结果进行分组。

1.6 基因分型

基因芯片可检测出6种ApoE基因表型，本研究依据各基因表型的碱基对应位点将各基因表型分三组做比较，即为ε2（E2/2+E2/3）、ε3（E2/4+E3/3）和ε4（E3/4+E4/4）。

1.7 统计学分析

采用SPSS 23.0软件进行统计分析，所有计量资料采用（s）表示，两组间计量资料比较采用t检验，三组间计量资料采用ANVOA法分析比较，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基因频率的分布

301名高脂血症患者中ApoE基因型分布如下：E2/2型2例，E2/3型50例，E3/3型205例，E2/4型8例，E3/4型34例，E4/4型2例。各基因表型基因频率分布如下：E2/2型为0.66%，E2/3型为16.61%，E3/3型为68.11%，E2/4型为2.66%，E3/4型为11.30%，E4/4型为0.66%，见表1。通过计算，ApoE各等位基因ε2、ε3、ε4样本数分别是52、213、36；等位基因频率分别是：17.3%、70.8%、11.9%，见表2。ApoE基因表型E3/3占总数的68.11%，等位基因ε3比例为70.8%，分别为最常见的基因表型及等位基因型。

表1 ApoE基因表型分布

表2 ApoE等位基因分布

表3 各基因组合临床资料比较

表4 各组治疗前后血脂水平比较（mmol/L，

表4 各组治疗前后血脂水平比较（mmol/L，

组别 TC TG LDL-C HDL-C 0周 12周 0周 12周 0周 12周 0周 12周ε2（52）ε3（213）ε4（36）F值P值5.52±0.38 5.21±0.43 5.37±0.35 3.08 0.214 9 4.03±0.21 5.12±0.25 4.29±0.23 529.76 0.000 0 2.26±0.17 2.42±0.19 2.33±0.19 0.99 0.610 3 1.97±0.14 2.11±0.13 2.08±0.14 303.11 0.000 0 3.20±0.22 4.22±0.25 3.57±0.23 1.48 0.476 0 2.32±0.17 3.95±0.21 2.65±0.18 33.40 0.000 0 1.59±0.11 1.55±0.10 1.48±0.10 0.79 0.672 4 1.91±0.13 1.65±0.11 1.68±0.12 107.62 0.000 0

2.2 不同基因组合间的一般资料比较

入选的高胆固醇血症患者共301例，其中男性136例，女性165例，平均年龄（65.31±12.56）岁。各基因组合间的年龄、性别、BMI、高血压、糖尿病等，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表3。

2.3 不同基因组合治疗后血脂水平比较

所有研究对象治疗前血脂水平差异均无意义（P＞0.05）。经12周阿托伐他汀治疗后：（1）TC：ε2组优于ε3组、ε4组优于ε3组，数据对比差异存在统计学意义（P＜0.05），ε2组与ε4组间对比差异无统计学意义（P＞0.05）；（2）LDL-C：ε2组优于ε3组、ε4组优于ε3组，数据对比差异存在统计学意义（P＜0.05），ε2组与ε4组间对比差异无统计学意义（P＞0.05）；（3）HDL-C：ε2组优于ε3组、ε2组优于ε4组，数据对比差异存在统计学意义（P＜0.05），ε3组与ε4组对比差异无统计学差异（P＞0.05）；（4）TG治疗后各组间数据比较均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

3 讨论

高脂血症为临床常见疾病，任意原因引起的胆固醇含量增高或甘油三酯含量增高，都称之为高脂血症[6]。高脂血症可发展为动脉粥样硬化，动脉粥样硬化可引发心脑血管疾病。载脂蛋白E（ApoE）为一种主要在肝脏与大脑中合成的富含精氨酸的碱性蛋白，其主要参与人体脂质代谢、神经元重塑/修复、神经元突触生长[7-8]。其在机体内分布较广，外周血浆中ApoE由肝脏、肾脏、骨骼、卵巢、巨噬细胞合成，中枢神经系统中则由星形胶质细胞合成[9]。ApoE基因多态性与心脑血管疾病的可能发病机制为ε4基因携带组增加了脑淀粉样病理改变，继而引发心脑血管疾病[10]。

本研究结果提示ApoE3/3及ε3为最常见的基因表型和等位基因，这与目前其他研究显示的基因频率是相符合的[11]。本研究结果还发现，治疗前各基因型组合间血脂水平差异无统计学意义。经12周阿托伐他汀治疗后，ε3组TC均值水平高于其他2组；ε3组LDL-C均值水平同样高于ε2组和ε4组；ε2组HDL-C均值水平高于其余2组。提示治疗后携带ε3等位基因的患者血脂水平高于非携带ε3等位基因的患者，尤其表现在TC和LDL-C的血脂水平上。并通过对治疗前后血脂变化程度的观察中，我们可以发现治疗前后TC、HDL-C、LDL-C的变化程度存在差异，ε2在降低TC、LDL-C的水平以及升高HDL-C方面，均优于ε3组。Gar cí a-o tí n AL等[12]发现，携带ε2等位基因的欧洲人群，服用阿托伐他汀后LDL-C下降较明显，提示ApoE基因ε2与阿托伐他汀降脂效果有关。

综上所述，他汀具有良好的调脂作用，其效果在一定程度上受到ApoE基因多态性的影响。若能明确这些基因与药物疗效差异的关联性，对今后临床用药将具有指导意义，更好地为动脉粥样硬化患者，尤其心脑血管疾病患者，起到早期针对性用药，取得更好地疾病预防及治疗作用。