从生长年限和入药部位探讨厚朴净制的意义＊

袁金凤，朱林峰，彭诗涛，王靖越，柴冲冲，刘 娜，李 飞

（北京中医药大学中药学院 北京 102488）

中药材净制是中药炮制的第一道工序，是中药材制成饮片前必经的基础工作。几乎每种药材使用前均需进行净制处理。净制是中药材选取规定的药用部位，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，使其达到药用净度标准的炮制方法。汉代《金匮玉函经》记载：药物“或须皮去肉，或去皮须肉，或须根去茎，又须花须实，依方拣采、治削，极令净洁”[1]，表明供药用的植物的部位是有要求的，需要按照方剂的规定进行加工处理。此后历代医籍中又有不少记载，归纳起来，不外是去除杂质，去除质次的非药用部位，去除有毒副作用的部位，分离不同的药用部位等，达到药用的净度标准，利于进一步的切制和炮炙，保证临床用药的安全和有效[2]。

厚朴始载于《神农本草经》，被列为中品[3]，其药用历史悠久，是传统的芳香化湿药，为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、枝皮及根皮。厚朴苦、辛、温，具有燥湿消痰、下气除满的功效，常用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等[4]。厚朴既可除无形之湿满，又可消有形之实满，为消除胀满之要药。传统上称产于湖北、四川、陕西西南部的厚朴药材为“川朴”，凹叶厚朴主产于安徽、浙江西部、江西、福建、湖南南部等地，习称“温朴”，传统上认为“川朴”质量较好，其中湖北恩施所产厚朴，色紫、皮厚、质细、油性重、香味浓烈者、断面棕色、内表深紫色，又称“紫油厚朴”，是地道名优药材，质量最佳[5]。

厚朴中的主要化学成分为酚类、挥发油、生物碱类等成分[6-9]，现代药理研究结果表明：厚朴具有抑菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用，现已证明以厚朴酚与和厚朴酚为代表的酚类成分是其主要的药效成分。传统加工炮制要求厚朴需去除粗皮，历代本草中皆有记载，如梁代《本草经集注》载厚朴“皆削去上虚软甲错处，取里有味者秤之”，宋代《太平惠民和剂局方》记载“凡使，先刮去粗皮，令见赤心”[10]，明代《医学入门》载“……如不去皮，耗人元气”[11]。《中华人民共和国药典》2015年版一部厚朴饮片炮制项下也明确规定：厚朴刮去粗皮。有文献记载厚朴粗皮坚韧，容易损刀，刮去外皮便于切片和煎出有效成分[12]，现代研究认为厚朴粗皮中所含厚朴酚、和厚朴酚两种有效成分含量极少，去皮的目的主要是去除杂质及非药用部位，提高临床疗效。

目前厚朴净制的相关研究多集中在净制前后厚朴酚与和厚朴酚的含量变化上，如杨红兵等人对生长年限在20年以下的厚朴干皮部位去皮前后的两种酚类成分含量进行研究，认为生长年限在20年以下的厚朴干皮部位去除粗皮后并不能提高成品质量，反而会造成成分损失，加之人力成本高涨，就经济效益而言建议取消去皮工序，在实际工作中，只需将表面泥土、地衣或菌斑刮除干净即可[13]；王智鹏等人通过两种酚类成分含量、结合胃排空实验及小肠推进率实验对厚朴干皮部位带皮厚朴、去皮厚朴、厚朴粗皮进行比较研究，结果粗皮中厚朴酚、和厚朴酚的含量极少，药理作用方面厚朴粗皮与去皮厚朴之间无显著性差异，故认为厚朴去皮是一种商品规格，入药可不去皮[14]。鉴于目前关于厚朴净制的研究多集中于干皮部位，未见不同年限厚朴枝皮、根皮部位净制的研究，且市售厚朴药材多存在生长年限不明确的问题，故本实验拟通过比较已知生长年限及市售未知生长年限厚朴的干皮、枝皮、根皮等不同入药部位的厚朴酚、和厚朴酚两种酚类成分含量的差异及粗皮所占比例，探讨厚朴净制去皮的意义，为中医临床的合理用药提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters2695高效液相色谱仪（包括2695四元梯度泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，2489紫外检测器，Empower色谱工作站）；超声波清洗器（SB25-12DTDN型，宁波新芝生物科技股份有限公司）；循环多用真空泵（SHB-3型，郑州长城科工贸有限公司）；BT-25S电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；BS210S电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）。

1.2 试药

厚朴酚（上海源叶生物科技有限公司，批号：B20511，纯度≥98%）、和厚朴酚（上海源叶生物科技有限公司，批号：B20498，纯度≥98%）；已知生长年限的厚朴原药材2017年5月采自湖北省恩施市新塘乡双河委员会，选取不同树龄（10，15，20，25，30，40年）厚朴树的干皮、枝皮及根皮进行采集，未知生长年限的市售厚朴原药材由湖北金贵中药饮片有限公司提供，经北京中医药大学中药学院杨瑶珺教授鉴定均为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.的干皮、枝皮及根皮；甲醇为色谱纯（美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯（北京化工厂）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。

2 方法与结果

2.1 样品的制备

取上述已知不同生长年限及未知生长年限的干皮、枝皮、根皮等不同部位的厚朴原药材，分别称重，刮去粗皮，得到不同部位的粗皮和去粗皮厚朴，称重，计算粗皮比例。观察干皮、枝皮、根皮去皮前后的性状。将粗皮、去粗皮厚朴及带粗皮厚朴分别粉碎，过筛备用。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（78:22）；检测波长294 nm；柱温30℃；流速1 mL·min-1；进样量10 μL；理论塔板数按厚朴酚峰计算不低于3800。

2.2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品8.31 mg、6.11 mg置于5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得厚朴酚与和厚朴酚的混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

分别取干皮、枝皮、根皮等不同部位的带粗皮厚朴、去粗皮厚朴、厚朴粗皮粉末（过三号筛）约0.2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，摇匀，密塞，称定重量，超声处理30min（100W，50Hz），放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.4 线性关系考察

分别精密吸取2.2.2项下厚朴酚、和厚朴酚混合对照品溶液0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2 mL置25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得不同浓度的对照品溶液，分别精密吸取混合对照品溶液及上述稀释后不同浓度的混合对照品溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标（Y），厚朴酚、和厚朴酚浓度为横坐标（X）进行线性回归并绘制标准曲线。厚朴酚回归方程Y=13 624.80X+7919.38，r=1.000 0，和厚朴酚回归方程Y=14 692.58X+12 970.14，r=1.000 0，结果表明厚朴酚在2.444 μg-1222 μg，和厚朴酚在3.32 μg-1660 μg进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度实验

精密吸取同一厚朴供试品溶液（按2.2.3项下制备），按2.2.1项下色谱条件进行测定，重复进样6次，每次10 μL，记录两种酚类成分的峰面积，计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为0.4%和0.2%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性实验

精密吸取同一厚朴供试品溶液（按2.2.3项下制备），按2.2.1项下色谱条件进行测定，分别在0，2，4，8，12，24 h各进样一次，每次10 μL，记录两种酚类成分峰面积，计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为1.7%和1.1%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性实验

取同一厚朴供试品粉末，精密称定6份，按2.2.3项下方法平行制备6份供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件进行测定，记录两种酚类成分峰面积，计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为1.3%和1.5%，表明本方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率实验

取已知含量的厚朴净药材粉末5份，每份约0.1 g（厚朴酚含量2.05 mg·g-1，和厚朴酚含量1.326 mg·g-1），精密称定，分别精密加入对照品适量，照2.2.3项下供试品溶液制备方法制备，按2.2.1项下色谱条件测定厚朴酚与和厚朴酚的峰面积，厚朴酚平均回收率为98.52%，RSD为2.7%，和厚朴酚平均回收率为100.63%，RSD为2.9%（表1，2）。

2.3 样品测定

2.3.1 样品外观性状（表3）

2.3.2 含量测定结果

取2.2.3项下制备的供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件进行测定，外标法计算各供试品中厚朴酚、和厚朴酚的含量以及这两种酚类成分的总量，厚朴酚与和厚朴酚对照品色谱图、样品色谱图（图1），已知生长年限的厚朴含量测定结果（表4），未知生长年限的厚朴含量测定结果（表5）。

表2 和厚朴酚的加样回收率

表3 不同入药部位样品净制去皮前后外观性状比较

3 结果与讨论

在净制过程中对不同入药部位净制去皮的难易程度及去皮前后的外观性状进行比较，样品外观性状结果（表3），去皮难易程度方面：厚朴干皮部位和枝皮部位的粗皮较易去除，根皮部位的粗皮较难去除。气味方面：厚朴各部位的样品去除粗皮后有大量浓郁的香气逸出，尤以根皮部位的香气最为明显。由表4实验结果得，同一生长年限的厚朴，其不同药用部位的厚朴酚、和厚朴酚的含量差异较大，根皮部位中厚朴酚、和厚朴酚的含量显著高于干皮和枝皮部位，约为干皮、枝皮部位含量的2-15倍。张丹等[15]对重庆产厚朴不同部位厚朴酚与和厚朴酚的成分分布规律进行研究，结果厚朴不同部位的两种酚类成分含量差异较大，与本实验结果基本一致，因此建议临床用药时厚朴应按入药部位不同区分等级，以保证临床疗效。

图1 厚朴高效液相色谱图

根皮部位厚朴酚与和厚朴酚含量最高，而干皮与枝皮部位中两种酚类成分的含量高低则与其生长年限有关，生长年限在10-15年的厚朴，不同部位两种酚类成分的含量分布规律为：根皮＞枝皮＞干皮；生长年限在20-40年的厚朴，不同部位两种酚类成分的含量分布规律为：根皮＞干皮＞枝皮。厚朴药材中粗皮所占的比例与生长年限和入药部位有关，不同生长年限厚朴枝皮部位的粗皮所占比例均在5.09%-6.66%之间；厚朴根皮部位粗皮所占比例呈现随生长年限增长而增加的趋势，粗皮所占比例4.42%-10.84%；厚朴干皮部位中，生长年限在10-25年的厚朴，其粗皮所占比例在10%以下，生长年限在30-40年者粗皮所占比例增加为20%左右（表4）。

市售厚朴药材生长年限多不明确，故收集了市售未知生长年限的厚朴药材与已知生长年限的厚朴药材进行比较，探讨厚朴净制去皮的科学性，已知生长年限、不同药用部位的厚朴药材净制前后两种酚类成分含量均存在明显差异，两种酚类成分含量变化规律均为：去皮厚朴＞带皮厚朴＞厚朴粗皮，市售未知年限、不同药用部位的厚朴药材净制后两种酚类成分含量变化规律与已知年限的变化规律一致（表4、表5）。且带皮厚朴、去皮厚朴中两种酚类成分含量均明显高于厚朴粗皮，净制去皮后两种酚类成分含量较净制前明显增加，证明厚朴净制去粗皮具有一定的科学道理。

表4 已知生长年限、不同部位样品两种酚类成分含量mg·g-1及粗皮比例%（n=3）

《本草衍义》中记载：“厚朴不以姜制，则棘人喉舌”[16]，厚朴生品辛辣峻烈，对咽喉有强烈的刺激性，一般不生用，炮制后不仅能降低对咽喉的刺激性，还能增强宽中和胃的作用。目前厚朴中刺激性成分尚不明确，净制过程对后续姜炙过程是否有影响还有待于进一步研究。再者厚朴是传统的芳香化湿药，净制去皮过程中香气逸散可能会造成芳香性成分的损失，鉴于中药在临床上的疗效是多种成分综合的作用，厚朴净制是否需要去皮仅以其对厚朴酚与和厚朴酚的含量影响及粗皮所占的比例来确定似有不足，尚需考虑净制对厚朴中其他成分的影响，并结合药效研究综合评价厚朴传统净制去皮的意义。

表5 未知生长年限、不同部位样品两种酚类成分含量mg·g-1及粗皮比例%（n=3）