非小细胞肺癌中CD151及uroplakin1 A表达及临床意义的研究

曾赟，王昕炜，尹必俭，沈政洁

1江苏省肿瘤医院/江苏省肿瘤防治研究所/南京医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科，南京210009

2张家港市第一人民医院肿瘤内科，江苏 张家港 2156000

肺癌是威胁人们健康的最主要的恶性肿瘤之一[1]。随着靶向治疗的推广应用，晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者的生活质量有所提高，生存时间有所延长，但5年生存率仍然较低。因此深入探讨NSCLC的转移和侵袭机制，寻找新的治疗方法对进一步提高患者的生存率至关重要。随着分子生物学和细胞生物学的发展，利用分子生物学指标评估预后，指导综合治疗已成为提高恶性肿瘤治疗效果的发展方向[2]。uroplakin 1A是尿路上皮不对称单位膜的蛋白组成之一，最先在膀胱癌中被发现且表达上调，与膀胱癌的转移密切相关[3]。抑癌基因表达不足或癌基因过度表达是肿瘤发生发展的决定因素，穿膜蛋白PETA-3/CD151基因作为新发现的癌基因，在多种肿瘤中处于高表达状态[4]。但uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的研究较少，因此本研究通过免疫组织化学法检测uroplakin 1A和CD151在NSCLC中的表达，并结合临床特征进行分析，以期为NSCLC诊疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月至2012年12月于江苏省肿瘤医院诊治的156例NSCLC患者和66例肺良性病变患者。纳入标准：①经影像学检查和/或病理检查确诊为NSCLC、肺良性病变；②均经手术切除治疗，且NSCLC组织、肺良性病变组织保存完好；③病历资料和随访资料完整。排除标准：①伴有其他恶性肿瘤；②有术前放化疗史。纳入的156例NSCLC患者（NSCLC组）中，男80例，女76例；年龄为35～86岁，平均年龄为（64.81±9.08）岁；按照世界卫生组织（WHO）肺癌病理组织分型[5]：鳞癌72例，腺癌62例，其他22例；低分化54例，中分化60例，高分化42例；根据国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC）第7版肺癌TNM分期标准[6]：Ⅰ～Ⅱ期85例，Ⅲ～Ⅳ期71例。纳入的66例肺良性病变患者（肺良性病变组）中，男36例，女30例；年龄为34～86岁，平均年龄为（64.74±9.14）岁；肺结核40例，炎性假瘤26例。

1.2 抗体和试剂

鼠抗人CD151和兔抗人uroplakin 1A单克隆抗体均购于美国Novusbio公司。氯化钠、磷酸氢二钠等试剂均购于北京博奥森生物技术有限公司。二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）试剂盒、苏木素及柠檬酸钠抗原修复液均购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫组织化学检测及结果判定

将石蜡组织进行切片，放入40%的乙醇中，40℃水浴4 min，展开，置于60℃烘箱中烤片。采用二甲苯脱蜡20 min，梯度乙醇水化。采用枸橼酸钠抗原热修复法对CD151和uroplakin 1A进行修复，加入3%的过氧化氢，室温放置10 min，阻断内源性过氧化物酶的活性。磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）冲洗，加入5%的羊血孵育30 min，除去封闭液，加入一抗，置于4℃冰箱中过夜，次日取出使用PBS冲洗，滴加DAB进行显色，然后自来水冲洗终止染色，采用苏木素复染1～2 min，使用梯度乙醇脱水，二甲苯透明，然后封片，显微镜下观察。结果判定：以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性染色。根据染色程度进行评分：未染色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。根据阳性细胞比例进行评分：0分，阳性细胞比例为0；1分，阳性细胞比例为1%～25%；2分，阳性细胞比例为26%～50%；3分，阳性细胞比例为51%～75%；4分，阳性细胞比例为76%～100%。每个切片选取5个视野，取平均值。每张切片的最后得分为两项评分之和，＞6分为阳性[3]。

1.4 随访

所有患者均有门诊复诊和电话随访资料，本研究的随访终点为随访5年或者患者死亡。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组组织中CD151和uroplakin 1 A阳性表达率的比较

NSCLC组织中的CD151、uroplakin 1A的阳性表达率分别为60.9%（95/156）、73.7%（115/156），均明显高于肺良性病变组织中的19.7%（13/66）、15.2%（10/66），差异均有统计学意义（χ2=31.514、64.660，P＜0.01）。

2.2 不同临床特征的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151及uroplakin 1 A阳性表达率的比较

不同年龄、性别的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151和uroplakin 1A的阳性表达率比较，不同肿瘤直径的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同组织分化程度、病理学分型的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151和uroplakin 1A的阳性表达率比较，差异均有统计学意义（χ2=38.765、32.756，P＜0.01；χ2=19.284、21.972，P＜0.01）；有吸烟史、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151阳性表达率均明显高于无吸烟史、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=52.096、15.020、46.167，P＜0.01）；有吸烟史、肿瘤直径＞2 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的NSCLC患者的NSCLC组织中uroplakin 1A阳性表达率均明显高于无吸烟史、肿瘤直径≤2 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（χ2=65.123、27.702、15.162，52.244，P＜0.01）。（表1）

表1 不同临床特征的NSCLC患者的NSCLC组织中CD151和uroplakin 1 A的阳性表达情况（ n=156）

2.3 CD151和uroplakin 1 A表达的相关性及其与NSCLC患者生存情况的关系

CD151阳性表达和uroplakin 1A阳性表达呈正相关（r=0.297，P＜0.01）（表 2）。CD151和 uroplakin 1A同时阳性表达、同时阴性表达的NSCLC患者的 5年生存率分别为 0（0/80）、19.2%（5/26），CD151阴性、uroplakin 1A阳性或者CD151阳性、uroplakin 1A阴性的NSCLC患者的5年生存率为12.0%（6/50）。CD151和uroplakin 1A同时阳性表达的NSCLC患者的5年生存率低于CD151和uroplakin 1A同时阴性表达的患者及CD151阴性、uroplakin 1A阳性或者CD151阳性、uroplakin 1A阴性的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）；CD151和uroplakin 1A同时阴性表达的NSCLC患者的5年生存率与CD151阴性、uroplakin 1A阳性或者CD151阳性、uroplakin 1A阴性患者的5年生存率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（图1）。

表2 CD151和uroplakin 1 A表达情况的对照

图1 不同CD151及uroplakin1 A表达患者的 5年生存曲线

3 结论

肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，每年约130万人死于肺癌[7]。目前NSCLC的主要治疗方法为手术、放疗、化疗和免疫治疗，但患者5年生存率较低，深入研究NSCLC发病机制，寻求新的靶点成为目前研究的热点。

uroplakin 1A最先被发现于尿路上皮组织中，与膀胱癌的分化程度高度相关，即膀胱癌分化程度越高uroplakin 1A表达越高[3]，可能是与其异常高表达后通过某种特定信号通路或靶基因参与膀胱癌的增殖分化有关。而Kong等[8]发现，食管癌组织中uroplakin 1A表达下调会促进肿瘤的转移和发展，其认为uroplakin 1A在食管癌中的作用可能与淋巴结浸润存在一定的关系。而uroplakin 1A在NSCLC中的表达尚无报道。本研究结果显示，NSCLC组织中的CD151、uroplakin 1A的阳性表达率均明显高于肺良性病变组织（P＜0.01），且均与吸烟情况、TNM分期、组织分化程度、病理学分型及淋巴结转移情况有关（P＜0.01），提示CD151、uroplakin 1A参与NSCLC的发生发展。研究发现，CD151在多种肿瘤中表达上调，与肿瘤的发生发展以及转移有着密切的关系，其可以作为肿瘤预后的新指标[9-10]。杨纯等[11]发现，CD151在NSCLC组织中的表达水平明显高于肺良性病变组织，与本研究结果一致。周维[12]发现，CD151阳性表达和肿瘤的临床分期及病理学分级密切相关。同时，本研究结果显示，CD151及uroplakin 1A同时阳性表达的患者80例，同时阴性表达的患者26例，CD151阳性表达和uroplakin 1A阳性表达呈正相关（r=0.297，P＜0.01）。CD151和uroplakin 1A同时阳性表达的NSCLC患者的5年生存率为0，同时阴性表达患者的5年生存率为19.2%，CD151阴性、uroplakin 1A阳性或者CD151阳性、uroplakin 1A阴性的NSCLC患者的5年生存率为12.0%；CD151和uroplakin 1A同时阳性表达的NSCLC患者的5年生存率低于上述另两种情况（P＜0.05），提示CD151及uroplakin 1A可能是影响NSCLC患者预后的重要指标。

综上所述，CD151及uroplakin 1A可能成为评估NSCLC患者预后的指标，CD151及uroplakin 1A联合检测对NSCLC患者的淋巴结转移情况及病理分期等的评估具有重要的意义，有利于指导多学科综合治疗。