VEGF-C、Bcl-xl蛋白在前列腺癌患者癌组织内表达水平变化及意义研究

刘慧娟，杜斌，刘瑞强

(濮阳市人民医院泌尿外科，河南 濮阳 457000)

近年来前列腺癌的发生率明显的上升，流行病学研究证实，前列腺癌的发病率可达272～382/10万人左右[1]。临床上前列腺癌的发生能够导致患者病死率或者致残率的上升，影响到患者远期生存预后[2]。在揭示前列腺癌的发病机制的过程中，可以发现肿瘤相关生物学蛋白的波动，能够影响癌细胞的生物学特性，导致前列腺移行上皮细胞的异常病变。血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）的表达，能够促进新生血管的形成，为肿瘤细胞的持续性增殖提供前 提[3，4]；抗凋亡蛋白（anti apoptotic protei，Bclxl）的表达浓度的上升，能够抑制癌细胞的凋亡，促进癌细胞DNA的持续性扩增过程[5]。部分研究者报道了VEGF-C、Bcl-xl在乳腺癌或者甲状腺癌等恶性肿瘤患者病灶组织中的表达情况，发现VEGF-C等的表达阳性率明显上升，同时认为VEGF-C、Bcl-xl等的表达与恶性肿瘤患者的临床分期或者远期生存预后密切相关[6]，但对于VEGFC、Bcl-xl的表达与前列腺癌的关系研究不足。为了揭示相关肿瘤生物学因子的表达与前列腺癌的关系，本次研究选取我院2016年1月-2017年6月收集的80例前列腺癌组织，探讨了VEGF-C、Bcl-xl的表达及其与患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2016年1月-2017年6月收集的80例前列腺癌组织（癌组织）、40例前列腺增生组织（BPH组）。癌组织，年龄60～83岁，平均为 70.5±9.0 岁，TNM 分期：T1期 14 例、T2期 27例、T3期26例、T4期13例；发生淋巴结转移 38例。癌组织，年龄60～80岁，平均为69.8±8.4岁。两组患者的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：⑴前列腺癌、前列腺增生的诊断标准均以手术后病理学结果为准；⑵患者年龄≥60岁；⑶前列腺癌患者术前未接受放化疗、免疫治疗；⑷本研究获得医学伦理委员会的批准。排除标准：⑴既往具有泌尿系统手术病史；⑵伴有膀胱及其他部位恶性肿瘤；⑶未经病理学证实。

1.2 免疫组化染色方法 所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法 (strep avidin-biotin complex，SABC 法)染色，二氨基联苯胺(diamionben zidene，DAB)显色。 VEGF-C 蛋白、Bcl-xl蛋白通用型二抗以及SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性及阴性对照，高倍显微镜下观察VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

1.3 判断标准 免疫组化结果判定：VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白的阳性着色表达于细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色表达，⑴根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；⑵根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例＞75%为4分，两种积分相乘总分＜3分为阴性、≥3分为阳性。

2 结果

2.1 两组标本中的VEGF-C、Bcl-xl蛋白阳性表达率比较 癌组织中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白阳性率分别为 76.25%、72.50%，BPH组织中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白阳性率分别为12.50%、20.00%，两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；见表 1、图 1。

表1 两组标本中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白阳性表达率比较[n（%）]

2.2 前列腺癌组织中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白阳性表达与病理特征的关系 癌组织中的VEGFC蛋白在TNM分期（T3～T4期）、发生淋巴结转移的组织中阳性表达率高于TNM分期（T1～T2期）、未发生淋巴结转移的组织（P＜0.05）；见表 2。

癌组织中的Bcl-xl蛋白在TNM分期 （T3～T4期）、发生淋巴结转移的组织中阳性表达率高于TNM分期 （T1～T2期）、未发生淋巴结转移的组织（P＜0.05）；见表 3。

3 讨论

前列腺癌的病情进展相对较为隐匿，临床上多数患者无特异性的症状，病情的早期诊断水平较低[7]。同时前列腺癌的手术治疗或者放化疗治疗后，患者的病死率或者生存时间等指标均无明显改善[8]。一项包含了334例样本量的多中心的前列腺癌临床诊疗分析研究显示，前列腺癌的早期诊断水平不足55%，治疗后的病情缓解率不足50%，无瘤生存时间不足36个月[9]。本次研究通过对于相关分子生物学水平的相关研究，不仅能够为前列腺癌的发病机制研究提供参考，同时可以为疾病的诊断提供潜在的临床指标。

图1两组标本中的VEGF-C、Bcl-xl蛋白阳性表达

表3 前列腺癌组织中的Bcl-xl蛋白阳性表达与病理特征的关系

VEGF-C蛋白水平的改变对于肿瘤信号通路的激活，能够交错式激活患者体内的癌细胞转录调控因子，提高癌细胞DNA的扩增速度[4]。VEGFC的表达上升不仅可以影响新生血管的形成，提高肿瘤病灶组织的血流灌注，同时还能够促进癌细胞细胞周期调控依赖性蛋白激活的转录及翻译，增加G1/S期比例[3]；Bcl-xl LT4是重要的抗凋亡因子，其能够通过抑制癌细胞程序性凋亡，促进癌细胞的持续性增殖，进而参与到恶性肿瘤的病情进展过程[10]。相关基础方面的研究还认为，Bcl-xl表达浓度的上升还能够促进癌细胞内的转录基因的结合，提高肿瘤干细胞对于癌细胞增殖活性的维持[11]。部分研究者报道了VEGF-C的表达与前列腺癌的关系，认为VEGF-C的表达阳性率的上升与前列腺癌的临床病理特征密切相关，但对于Bcl-xl的分析研究不足。

在本次研究中，免疫组化的分析研究发现，VEGF-C、Bcl-xl蛋白的表达阳性率明显的上升，高于前列腺良性增生组，差异较为明显，提示了VEGF-C、Bcl-xl二者均可能影响了前列腺癌的发生过程，通过荟萃国内外相关文献，笔者认为VEGF-C、Bcl-xl的高表达与前列腺癌的发生关系可能与下列几个方面的因素有关[12，13]：⑴VEGF-C的表达浓度的上升能够促进肿瘤微血管的形成，通过肿瘤病灶组织的灌注水平，为肿瘤细胞的增殖和转移提供了基础；⑵Bcl-xl不仅能够影响肿瘤细胞的凋亡过程，同时还能够促进癌细胞的过度增殖效应，降低癌细胞的坏死吸收速度。史玉爽等[14]研究者也通过免疫组化分析研究发现，在前列腺癌病灶组织中，VEGF-C的表达阳性率可平均上升40%以上，同时在治疗敏感性较差或者远期病死率较高的前列腺癌患者中，VEGF-C的表达阳性率上升更为明显。在探讨VEGF-C、Bcl-xl的表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系过程中发现，在发生了淋巴结转移或者临床分期较晚的前列腺癌患者中，VEGF-C、Bcl-xl的表达阳性率均明显的上升，提示了VEGF-C、Bcl-xl均能够促进前列腺癌患者临床病理特征的进展，这主要考虑与VEGF-C的表达浓度的上升，能够提高前列腺移行上皮细胞对于淋巴结的粘附能力，提高了癌细胞对于临近正常组织的浸润能力，导致了前列腺癌淋巴结转移或者临床分期的进展。特别是Bcl-xl的表达浓度的上升，还能够抑制癌细胞的凋亡，持续性提高癌细胞对于淋巴结内皮细胞的粘附过程。但部分研究者还认为VEGF-C或者Bcl-xl的表达与前列腺癌患者的Gleason评分具有一定的关系，本次研究并未相关结论，不同的研究存在不同的结论，考虑可能与VEGF-C或者Bcl-xl的检测灵敏程度的差别等有关[15]。