细胞粘附蛋白、HER-2、ZO-1和VEGF与弥漫型胃癌侵袭转移的相关性研究

刘俊骥 刘 兰 颜赞芳 张志敏

胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的消化系统常见恶性肿瘤，在世界范围内发病率和死亡率呈逐年上升趋势[1-2]。好发年龄在50岁以上，但由于饮食结构的改变、工作压力增大以及幽门螺杆菌的感染等原因，使得胃癌呈现年轻化倾向。绝大多数胃癌属于腺癌，早期无明显症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状相似，易被漏诊误诊，因此临床上确诊胃癌时多处于胃癌晚期，手术切除后胃癌的侵袭转移仍是胃癌患者死亡的重要原因，也是影响患者临床治疗和预后的主要因素[3-4]。细胞间黏附分子-1(ICAM-1) 和紧密连接蛋白 1(ZO-1)为机体重要的细胞活性分子，不仅可以参与调节机体免疫炎症反应过程，而且还可介导肿瘤细胞增殖转移和黏附作用；血管内皮生长因子(VEGF)和人表皮生长因子受体-2 (HER-2)主要用于促进内皮细胞增殖、增加血管通透性，以诱导肿瘤间的血管生成[5-6]。本研究通选取2016年1月至2017年12月本院收治的胃癌患者60例，收集患者弥漫型胃癌组织、癌旁组织(距癌2 cm)和远离胃癌的正常组织(距癌5 cm)，采用Real-Time PCR法检测患者组织中ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA水平的表达，旨在探讨ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2与胃癌侵袭转移作用的相关性，及其与肿瘤发生发展的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象及一般资料

选取2016年1月至2017年12月本院收治的胃癌患者60例，经组织病理学确诊为弥漫型胃癌。留取患者组织学标本包括患者胃癌组织60例、癌旁组织60例(距癌2 cm)和远离胃癌的正常组织60例(距癌5 cm)。本研究经本院伦理委员会批准，患者及家属自愿签署知情同意书，男性 32例，女性28例；平均发病年龄(43.29±5.76)岁。

1.2 Real-Time PCR检测方法

采用Real-time PCR法对患者胃癌组织、癌旁组织及正常组织内ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表达水平进行检测。Trizol法提取胃癌组织、癌旁组织及正常组织中的总RNA，用TaKaRa公司的Prime Script®RT试剂盒逆转录合成cDNA后，用SYBR Premix Ex TaqTMII试剂盒进行ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA 实时荧光定量操作。实验采用相对定量法，采取阈值循环数(cycle threshold,CT)值比较法，计算不同样本之问ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA相对百分比。公式:ΔΔCt=(CT.实验组的基因-CT.实验组管家基因)-(CT.对照组目的基因-CT.对照组管家基因)。目的mRNA的量=2-ΔΔCT。

1.3 免疫组织化学法检测

取胃癌患者的病理石蜡切片标本，室温封闭40 min(5%血清)，加入单克隆抗体ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2，碱性磷酸酶二抗4 ℃孵育。PBS清洗后加入SP，和DAB恒温显色封片。用10×、40×物镜显微镜进行观察。ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2的主要阳性表达表现：棕黄色颗粒在结肠癌细胞内出现。每张切片随机选取 10 个高倍视野，记录阳性细胞的百分率，着色细胞占计数细胞百分率≤10为阴性表达；>10为阳性表达。

1.4 统计学处理

本实验各组数据结果应用SPSS 22.0软件处理，对数据行正态性和方差齐性检验，符合正态分布的计量资料，计量资料结果用均数±标准差表示，组间差异采用单因素方差分析和Bonferroni's Multiple Comparison Test。两两相关性分析采用相关性直线相关分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Real-Time PCR检测结果

癌旁组织和正常组织 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表达水平没有显著改变，与对照组和癌旁组织ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表达水平相比，胃癌组患者癌组织内ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA表达水平显著升高，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 Real-Time PCR检测结果

注：*为与对照组相比，P<0.05；#为与癌旁组织相比，P<0.05。

2.2 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2表达与胃癌临床病理特征的关系

免疫组织化学法结果显示，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2阳性表达和弥漫型胃癌的淋巴结转移、浸润深度和TNM分期具有明显的相关性，差异具有统计学意义(P<0.05)。ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2阳性表达和弥漫型胃癌患者的年龄、性别和肿瘤直径没有相关性，差异不具有统计学意义(P>0.05)，见表2-3。

表2 ICAM-1、VEGF表达与胃癌临床病理特征的关系/例

表3 ZO-1和HER-2表达与胃癌临床病理特征的关系/例

3 讨论

细胞间黏附分子-1(ICAM-1) 属于黏附分子免疫球蛋白超家族(IgSF)成员，主要用于介导内皮细胞间的细胞黏附、抗原递呈功能的调节、T,B淋巴细胞的激活等免疫反应。当机体出现炎性反应、感染和免疫应激等情况时，ICAM-l可被过度激活和表达，参与调节机体细胞的免疫应答[7]。研究表明，高转移的胃癌细胞中可检测出ICAM-1高水平的表达，显示了ICAM-1的表达与胃癌的侵袭和转移存在显著的相关性，可有效用于临床监测胃癌的血源性淋巴性转移[8]。紧密连接蛋白 1(ZO-1)是第1个被发现的紧密连接相关蛋白，在乳腺癌、胰腺癌和甲状腺癌等侵袭性上皮性肿瘤细胞和组织中可检测出ZO-1的迷离表达，调控上皮细胞的分化和形态，肿瘤细胞的分化和侵袭转移，研究表明，ZO-1与肿瘤细胞的分化程度、浸润深度、是否伴有淋巴结转移及进展情况具有明显的相关性[9-10]。人表皮生长因子受体-2 (HER-2)在正常人体腔上皮、 腺上皮等组织中仅仅微弱的表达，但在肿瘤细胞组织中呈过度表达，因此，检测组织中HER-2表达对于判断肿瘤的发生和发展具有重要作用，研究表明HER-2可以作为胃癌的1个不良的预后因素和治疗靶点[11-12]。血管内皮生长因子(VEGF)是1种具有高度特异性的促血管内皮细胞分裂原的血管内皮细胞生成因子，在促进新血管的生成、维持血管壁的完整性和通透性等方面具有十分重要的作用[13-14]。

本研究结果表明，癌旁组织和正常组织 ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA含量没有显著改变，胃癌组患者癌组织内ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2 mRNA显著升高，说明在弥漫型胃癌患者肿瘤组织中，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2呈现异常高表达状态；同时，ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2阳性表达和弥漫型胃癌的淋巴结转移、浸润深度和TNM分期具有明显的相关性，说明ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2与肿瘤细胞的分化程度、浸润深度、是否伴有淋巴结转移及进展情况具有明显的相关性，在肿瘤细胞组织中呈过度表达。但ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2阳性表达和弥漫型胃癌患者的年龄、性别和肿瘤直径没有相关性。综上所述，本研究结果表明ICAM-1、VEGF、ZO-1和HER-2与弥漫型胃癌的侵袭转移存在明显的相关性，可作为判断胃癌侵袭转移能力的有效指标。