血清超敏C反应蛋白、chemerin、TG、及瘦素联合检测在2型糖尿病中的临床诊断价值研究

杨志宏,张小妮,王小娟,李 芳,杨桂凤

(1.秦皇岛市第一医院 老年病科，河北 秦皇岛066004；2.秦皇岛市第一医院 麻醉科复苏室，河北 秦皇岛066004)

2型糖尿病是临床中常见的一种内分泌疾病，也是导致患者残疾甚至死亡的主要原因之一，对患者的生活及家庭带来沉重的负担[1]。而且目前还没有能够治愈2型糖尿病的有效方案，主要是通过降低患者的血糖值来最大限度的减少2型糖尿病的发生[2]。随着人们生活水平的不断提高以及生活方式的不断改变，2型糖尿病的发病率和死亡率逐年上升，对2型糖尿病相关指标的监测也成为了研究治疗2型糖尿病重要课题之一[3]。有研究指出，血清超敏C反应蛋白、TG、chemerin及瘦素均参与了2型糖尿病的发病过程，并且具有较高的特异性，能够对2型糖尿病患者的进一步治疗和诊断提供重要的价值帮助[4]。本文对2型糖尿病患者的超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)、甘油三酯(Three acyl glycerol，TG)、血清趋化素(chemerin)及瘦素(Leptin，LP)表达进行检测，旨在研究超敏C反应蛋白、TG、chemerin及LP在2型糖尿病中的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 材料

研究对象：选取2017年2月-2018年2月我院收治的2型糖尿病患者50例作为本次研究组，其中包括男性患者23例，女性患者27例，年龄45-68岁，平均年龄(50.2±3.5)岁；同时选取同期于我院进行健康体检的健康志愿者30人作为本次研究的正常组，其中男性14人，女性16人，年龄43-68岁，平均年龄(49.8±4.1)岁。两组研究对象性别比例、平均年龄等一般资料相比较均无统计学差异，具有可比性(P>0.05)。排除标准：排除高血压患者；排除病历资料不全患者；排除恶性肿瘤患者；排除长期服用抗糖尿病药物患者；排除肾脏器官、功能严重衰竭患者；排除精神疾病患者。本文研究所有研究对象及家属均知情，签署家属知情通知书，并获得我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1免疫比浊法检测hs-CRP水平 分别采集两组研究对象的清晨空腹状态下静脉血5 ml，置入抗凝试管中，使用离心机以3 000 r/min的速度进行血清分离，20 min后提取样本血清至试管，然后放入-80℃的冰箱冷藏待测。抗原抗体结合在稀释过程中反应形成可溶的免疫复合物，加入聚乙醇，自液相被析出，产生微粒，溶液产生浊度，当其浓度固定时，形成的免疫复合物随着抗原量的增加升高，溶液浊度也逐渐加重，成正比。利用比浊计测定光的密度值，分析血清hs-CRP的表达水平。

1.2.2高效液相色谱法检测血清chemerin水平 将待测的标本注入在色谱柱中，在压力下进行固定相移动，经过固定相与待测标本中不同物质相互作用，物质会依次的离开色谱柱，应用检测器捕捉物质信号，严格按照高效液相色谱仪说明书上的操作步骤进行，对比分析所测的chemerin水平。

1.2.3放射免疫测定血清LPT水平 采用氯氨T法制备125I-LPT试剂，在水浴中和LPT联合制备125I-LPT。在制待测标本中加入0.01 mol/L100 μl的PBS，加入稀释抗体100 μl以及100 μl125I-LPT试剂，充分混合后在4℃的环境下放置1 d，第2天取出加入14%100 μl PEG溶液和100 μl二抗，混合均匀离心处理并弃上清液在γ仪上观察其放射性计数。

1.2.4乙酰丙酮法检测TG水平 待测标本加入异丙醇提取血清中的甘油三酯，氧化铝吸附磷脂和游离的甘油，氢氧化钠钾皂化，过碘酸钠氧化甘油生成甲醛，和乙酰丙酮在铵离子和加热的条件下产生黄色的3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶，其显色的程度和血清中的甘油三脂的浓度水平成正比。对比分析TG水平。

1.2.5空腹血糖检测 抽取两组研究对象空腹静脉血2 ml，加入肝素抗凝试管中，使用高效液相色谱法对两组研究对象空腹血糖进行检测，将待测的标本注入在色谱柱中，在压力下进行固定相移动，经过固定相与待测标本中不同物质相互作用，物质会依次的离开色谱柱，应用检测器捕捉物质信号，严格按照高效液相色谱仪说明书上的操作步骤进行，比对分析所测的空腹血糖水平。

1.2.6双抗体夹心法检测血清尿酸和胆固醇水平 取已提取的两组研究对象血清样本，使用双抗体夹心法对其血清尿酸及胆固醇水平进行检测。将待测血清吸附在微量滴板的小孔里进行洗涤，加入待测抗原，如过两者是特异的，则会产生结合反应，把多出来的抗体洗除，然后加入与待测抗原中呈现出特异反应的酶联抗体，使其形成“夹心”现象，接着加入该酶的底物，如果能看到有色的酶解产物产生，则说明在孔壁上存在着相对应的抗原，从而通过显色后读取浓度的具体数据来计算出血清尿酸和胆固醇的表达水平。

1.3 统计学处理

采用SPSS19.0统计软件进行分析处理。计量资料采用均数±标准差(mean±SD)描述，两组间比较采用配对t检验，相关性采用Pearson相关性分析，P值<0.05为具有统计学意义的标准。采用SAS9.4软件对单独检测和联合检测的特异性、敏感度和准确度进行计算分析。

2 结果

2.1 两组研究对象临床常规指标比较

如表1所示，对两组研究对象临床常规指标进行统计比较，2型糖尿病组患者体重指数、空腹血糖、血清尿酸以及胆固醇指标水平均高于正常组对象，差异均具有统计学意义(P<0.05)。

表1 两组研究对象临床常规指标比较

2.2 两组研究对象血清hs-CRP、chemerin表达水平对比

如表2所示，对两组研究对象血清hs-CRP、chemerin表达水平进行对比，2型糖尿病组患者hs-CRP、chemerin表达水平均明显高于正常组研究对象，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2 两组研究对象血清hs-CRP、chemerin表达水平对比

2.3 两组研究对象血清TG、LP表达水平对比

如表3所示，对两组研究对象TG、LP表达水平进行对比，2型糖尿病组患者TG、LP表达水平均显著高于正常组研究对象，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表3 两组研究对象血清TG、LP表达水平对比

2.4 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP与2型糖尿病患者临床特征的关系

如表4所示，不同性别和年龄的2型糖尿病患者hs-CRP、TG、chemerin及LP表达水平比较不具有统计学差异(P>0.05)，体重指数、空腹血糖、血清尿酸以及胆固醇高水平表达的2型糖尿病与低水平表达的2型糖尿病患者hs-CRP、TG、chemerin及LP表达水平比较具有统计学差异(P<0.05)。

2.5 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP单独检测与联合检测的诊断效能对比

如表5所示，血清hs-CRP、TG、chemerin及LP联合检测的特异性、敏感度、准确度均显著高于单独检测。

3 讨论

2型糖尿病是一种与生活方式密切相关的疾病，而且2型糖尿病还伴有多种并发症，已经成为世界第三大疾病，严重影响着患者的生活质量[5]。在2型糖尿病的发病过程中，患者体内的特异性指标会发生改变，参与疾病的发生和发展，所以对这些生物指标的检测成为了观察患者病变程度的主要依据[6]。

超敏C反应蛋白(hs-CRP)是一种敏感的生理标志物，与胰岛素抵抗、高血糖以及2型糖尿病有着明确的相关性。对机体内注射hs-CRP能够引发致糖异生，从而导致代偿性超胰岛素血症和高血糖症的并发，说明在糖尿病的发病机制中，炎症因素起到了一定的作用[7,8]。糖尿病可能是由于自身免疫系统启动的进行性细胞因子介导出现的急性反应表现，而hs-CRP具有自然宿主防御的特征，hs-CRP的免疫功能主要包括调节血小板活性。增加白细胞的反应性、补体结合以及炎症部位清除细胞碎屑等[9,10]。在本研究中发现，2型糖尿病患者的hs-CRP表达水平较高，说明hs-CRP参与了2型糖尿病的发病过程，在2型糖尿病的发生和发展中起到了重要作用，对hs-CRP的监测能够对患者疾病的病变程度进行了解，同时hs-CRP也是2型糖尿病患者在接受治疗过程的一个受控稳定性指标。有相关研究表明，脂肪组织是一个重要的内分泌器官，能够分泌出与机体能量代谢相关的激素和细胞因子，而且这些因子在2型糖尿病的发病机制中都具有重要的作用，并且越来越受到人们的重视[11]。Chemerin是近些年发现的脂肪细胞因子新成员，也是一种脂肪细胞分泌出来具有趋化作用的膜结合蛋白，在人体的多种组织中广泛表达，包括肾上腺、肝脏、胰腺、卵巢、胎盘、皮肤、肺等，主要表达于肝脏和肺[12,13]。Chemerin在组织损伤部位以及炎症部位具有激活、募集免疫细胞的提点，所以被认为可能参与了脂肪组织的炎性反应。由专家学者指出，Chemerin能够对脂肪细胞的分化、代谢起到调节作用，还会促进脂肪分解效应的产生，增强胰岛素刺激引起的葡萄糖摄取[14]。在本文研究中，2型糖尿病血清中Chemerin的表达水平很高，说明Chemerin在2型糖尿病的发病过程中发挥了重要作用，对脂肪细胞的分化、脂肪代谢以及糖代谢都造成了一定的影响。

表4 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP与2型糖尿病患者临床特征的关系

表5 血清hs-CRP、TG、chemerin及LP单独检测与联合检测的诊断效能对比

有研究指出，甘油三酯(TG)表达水平偏高的患者患有2型糖尿病的几率更高，其发病机制可能是由于TG的高表达导致内皮受损以及氧化应激反应的发生，从而激活NF-κB通路，引起炎症介质的高表达，致使血糖升高[15,16]。TG升高在2型糖尿病的形成过程中发挥着重要的作用，而且高水平的TG还能够引起胰腺炎，使胰岛素分泌障碍，导致1型糖尿病的发生，甚至还会引起不可逆性胰腺炎的发生，形成永久性的1型糖尿病。虽然可以通过药物将TG的高表达控制在正常水平范围内，但是仍会表达为高血糖[17]。在本文研究中，2型糖尿病患者TG水平有着更高的表达，说明TG的升高诱导炎症介质的高表达，导致患者血糖升高，促使了2型糖尿病的发生。血清瘦素(LP)是一种慢性因子，也属于一种激素，主要的分泌场所是机体的脂肪组织，对患者的食欲有抑制作用，而且还会减轻患者的体重，避免肥胖情况的发生，同时还会对胰岛素的分泌有一定的抑制效果，使胰岛素在外周的敏感性提高，血清瘦素在人体中高水平表达，能够增强机体的氧化应激反应，加快炎症反应的速度，也会使体内的炎症因子聚集增多，导致胰岛素出现抵抗现象[18]。瘦素进入血液循环后，通过与定位于外周组织、中枢组织以及其它多种形式存在的受体瘦素相结合，发挥多种生物学效应，对机体中许多生理系统及代谢通路造成影响。有相关研究表明，瘦素参加了胰岛素抵抗的形成，在2型糖尿病的发病过程中发挥着一定作用[19]。在生理状态下，瘦素能够通过多种机制对胰岛素分泌造成抑制作用，使胰岛素分泌能力下降，导致胰岛素抵抗的出现。本文2型糖尿病患者血清中瘦素含量明显增高，说明瘦素的升高加快了机体炎症反映的速度，同时对胰岛素产生的抑制作用，在2型糖尿病的发展中起到了重要作用，与王立坤[20]在其研究中的结论一致。

综上诉述，血清超敏C反应蛋白、TG、chemerin及瘦素均参与了2型糖尿病的发病过程，且4项指标联合检测的特异度、敏感度和准确度较高，为型糖尿病的诊断及治疗提供重要的价值帮助。