芡实超微粉的体内降血脂功效

2019-05-09王岁岁张汆戚良号杨杰袁怀波

食品研究与开发 2019年10期

王岁岁，张汆，戚良号，杨杰，袁怀波，*

（1.合肥工业大学食品与生物工程学院，安徽合肥 230000；2.滁州学院生物与食品工程学院，安徽滁州 239000；3.淮南湖鑫水产养殖有限公司，安徽淮南 232000）

芡实是睡莲科芡属一年生水生草本植物[1]。芡实种仁和种皮中经分离得到的几种单体化合物如黄酮[2]、脑苷脂[3]、生育酚聚合物[4]、环二肽[5]通常被认为具有抗氧化[6-7]、调节血脂、降低血糖等多种药理活性[8-9]。

高血脂症俗称“高血脂”，又称血脂异常[10]。目前临床治疗高血脂症有他汀类、贝特类等药物，因其具有较好的降总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）作用，成为目前临床应用最好的降脂药物[11]。但他汀类药物本身具有副作用，尤其与贝特类药物联用时，作用更甚[12]。因此，开辟新的降脂途径是当前医药研究人员迫切需要解决的热点问题[13]，但至今尚无突破性进展。本研究以芡实壳及芡实种仁为基础材料制备芡实超微粉，考察芡实超微粉对高脂小鼠的血脂调节作用。为芡实超微粉在高血脂症患者饮食辅助治疗应用中提供重要的参考价值，对控制高血脂症的发病率及促进芡实资源的深度开发有着重要意义[14]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

SPF 级小鼠、普通饲料：常州卡文斯实验动物有限公司；芡实：淮南湖鑫水产养殖有限公司；高脂饲料：合肥工业大学食品与生物工程学院实验室制备；生理盐水、苦味酸、辛伐他汀片、冰醋酸等：上海生物工程有限公司；总胆固醇、总甘油三脂、高密度、低密度脂蛋白胆固醇、Bradford 法蛋白检测、总超氧化物歧化酶、丙二醛、肝酯酶测定试剂盒：南京建成科技有限公司。

1.2 仪器与设备

SL-150 型高速多功能粉碎机：浙江省永康市松青五金厂；罗氏血糖仪：罗氏生物股份有限公司；752 紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；SC-3614型低速离心机：安徽中科佳学仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 高脂饲料制备及高血脂症小鼠模型的建立

高脂饲料：15%蔗糖，10%猪油，3%蛋黄，72%普通饲料。

25 ℃恒温条件下，60 只 ICR 雄鼠（20±5）g，普通饲料适应性喂养1 周后将小鼠随机分为6 组，每组10 只。随机选取一组为正常组，即空白对照组，喂养普通饲料，余下5 组均给予高脂饲料喂养。

1.3.2 小鼠分组及芡实超微粉的灌胃

芡实经粉碎机粉碎后再用200 目筛过滤，使其为超微粉形态。

造模成功后分组，第一组为正常组：普通饲料，每日灌胃等量生理盐水；第二组为高脂模型对照组：高脂饲料，不进行灌胃；第三组为阳性对照组：高脂饲料，每日灌胃辛伐他丁溶液3.33 mg/（kg·d）；第四、五、六组分别为芡实超微粉低、中、高剂量组：高脂饲料，分别每日灌胃芡实超微粉溶液500、1 000、2 000 mg/（kg·d）。灌胃时间为6 周，饮水均为纯净水[15]。

1.3.3 小鼠体重及空腹血糖的测定

从适应性喂养开始，每隔一周对小鼠称重并记录。尾静脉取血测定小鼠血糖，分3个阶段收集，适应性喂养1 周后为初始血糖，灌胃3 周后为治疗中期血糖，灌胃6 周后为治疗后血糖。

1.3.4 小鼠血清和肝组织的采集

灌胃处理6 周后，用镊子对眼球进行摘除，取血0.8 mL 左右，静置 30 min，3 000 r/min 离心 15 min，吸取上清液，在-20 ℃中保存。将小鼠脱颈致死，取出小鼠肝脏，称重并记录数据。

1.3.5 小鼠血脂指标的测定

小鼠血清TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）的测定：取小鼠血清样本，在4 ℃条件下融化，按试剂盒操作步骤进行。

1.3.6 小鼠血清及肝组织样本中相关酶类的测定

组织匀浆的制备：准确称取肝组织按重量（g）∶体积（mL）=1∶9 的比例加入生理盐水，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2 500 r/min～3 000 r/min离心10 min，取上清。

小鼠血清及肝组织中总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、肝酯酶含量的测定及小鼠肝组织中蛋白浓度的检测：按试剂盒操作步骤，以血清和匀浆为样本测定。

2 结果与分析

2.1 芡实超微粉对小鼠体重的影响

芡实超微粉对小鼠体重的影响见表1。

表1 芡实超微粉对小鼠体重的影响（±s，n=10）Table 1 The effect of ultrafine powder on body weight of mice（±s，n=10）

注：a 与正常组比较，差异显著（p＜0.05）；A 与正常组比较，差异极显著（p＜0.01）；b 与高脂模型比较，差异显著（p＜0.05）。

体重/g灌胃前灌胃后正常组 29.85±1.62 43.20±1.51b高脂模型组 29.37±2.46 48.37±1.76a阳性对照组 3.33 30.04±1.94 40.53±0.42ab低剂量组 500 28.32±1.17 39.64±2.79ab中剂量组 1 000 29.37±1.52 38.16±1.73ab高剂量组 2 000 29.61±1.93 36.34±1.41Ab组别灌胃剂量/[mg/（kg·d）]

由表1可知，灌胃前各组小鼠体重无显著性差异（p＞0.05），灌胃6 周后，高脂模型组小鼠体重显著高于正常组（p＜0.05），阳性对照组和低、中、高剂量组小鼠体重均显著低于高脂模型组（p＜0.05），且灌胃剂量越高，体重减轻效果越显著，说明芡实超微粉有降低高脂小鼠体重的作用，并且呈现一定程度的剂量依赖关系。

2.2 芡实超微粉对小鼠肝脏指数的影响

芡实超微粉对小鼠肝脏指数的影响见表2，肝脏指数/%=肝脏质量/小鼠体重×100。

表2 芡实超微粉对小鼠肝脏指数的影响（n=10）Table 2 Effect of superfine powder on liver index in mice（n=10）

由表2所示，高脂模型组小鼠肝脏指数极显著高于空白组（p＜0.01），与高脂模型组相比，阳性对照组、中、高剂量灌胃组小鼠肝脏指数显著降低，说明灌胃辛伐他丁起到了一定的保护高血脂症小鼠肝组织正常脂肪代谢的作用，灌胃一定剂量的芡实超微粉也起到了延缓高血脂症小鼠的肝指数增高的作用，并且灌胃芡实超微粉的剂量越高，肝指数降低越显著，呈现了一定程度的剂量依赖关系。

2.3 芡实超微粉对小鼠血糖水平的影响

芡实超微粉对小鼠血糖的影响见表3。

表3 芡实超微粉对小鼠血糖的影响（n=10）Table 3 Effect of superfine powder on blood glucose in mice（n=10）

由表3可知，各组小鼠灌胃前的初始血糖水平无明显差异（p＞0.05）；灌胃3 周后，高脂模型组小鼠血糖水平极显著高于空白组（p＜0.01），并且阳性对照组、低、中、高剂量灌胃组小鼠血糖水平也极显著低于高脂模型组（p＜0.01）；灌胃6 周后，高脂模型组小鼠血糖水平显著上升且显著高于其余各组血糖水平，阳性对照组、低、中、高剂量组小鼠血糖水平极显著低于高脂模型组（p＜0.01）。由此可知，连续给予小鼠饲喂高脂饲料会显著提高小鼠体内血糖水平，给高血脂症小鼠连续灌胃芡实超微粉会显著降低其体内血糖水平，且灌胃剂量越大，血糖降低效果越显著，呈现了一定的剂量依赖性。

2.4 芡实超微粉对小鼠血脂水平的影响

芡实超微粉对小鼠血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影响见表4。

表4 芡实超微粉对小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的影响（±s，n=10）Table 4 Effect of superfine powder on levels of serum TC，TG，HDL-C and LDL-C in mice（±s，n=10）

注：a 与正常组比较，差异显著（p＜0.05）；b 与高脂模型比较，差异显著（p＜0.05）。

组别 TC 含量 TG 含量 HDL-C 含量 LDL-C 含量正常组 4.42±0.35b 1.92±0.84b 5.43±0.32 1.12±0.35b高脂模型组 4.85±0.24a 2.75±0.53a 3.98±0.47a 1.98±0.69a阳性对照组 4.07±0.31b 1.69±0.41b 5.21±0.17b 1.77±0.28b低剂量组 4.33±0.22 2.20±0.79b 4.87±0.28b 1.83±0.71中剂量组 3.75±0.73b 1.87±0.23b 5.18±0.91b 1.76±0.41b高剂量组 3.46±0.57b 1.73±0.45b 5.82±0.34b 1.50±0.18b

由表4可知，正常组小鼠TC、TG 都处于正常水平；模型组小鼠TC、TG 水平显著高于正常组（p＜0.05），阳性对照组、低、中、高剂量组小鼠 TC、TG 水平显著低于模型组（p＜0.05）。模型组小鼠HDL-C 含量显著低于正常组（p＜0.05），阳性对照组、低、中、高剂量组小鼠HDL-C 含量显著高于模型组。与空白组相比，模型组小鼠体内 LDL-C 显著提高（p＜0.05），而中、高剂量组小鼠LDL-C 含量显著低于模型组。以上表明，连续给予小鼠高脂饲料会显著提高小鼠体内血脂水平，辛伐他汀药物能显著改善小鼠高血脂症状，给予高血脂症小鼠灌胃一定量的芡实超微粉会显著降低其体内血脂水平，且灌胃量越大，效果越明显，呈现出一定的剂量正相关性。

2.5 芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影响

芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中T-SOD 活力的影响见表5。

表5 芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中T-SOD活力的影响（±s，n=10）Table 5 Effect of superfine powder on T-SOD activity in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 与正常组比较，差异显著（p＜0.05）；b 与高脂模型比较，差异显著（p＜0.05）。

组别血清/（U/mL）肝脏/（U/mgprot）正常组 238.89±6.34b 101.44±5.27b高脂模型组 219.45±4.17a 83.93±2.62a阳性对照组 232.24±5.87b 98.71±4.64b低剂量组 218.23±8.21 96.18±5.82中剂量组 235.47±4.75b 105.88±4.39b高剂量组 244.72±6.18b 107.91±8.14b

由表5可知，模型组小鼠T-SOD 活力显著低于正常组（p＜0.05），中、高剂量组小鼠 T-SOD 活力显著高于模型组（p＜0.05），说明芡实超微粉对高血脂症引起的T-SOD 活力下降具有明显缓解作用。且灌胃芡实超微粉剂量越高，小鼠T-SOD 活力提升越显著，以高剂量组最优。

2.6 芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中丙二醛（MDA）含量的影响

芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中MDA 含量的影响见表6。

表6 芡实超微粉对小鼠血清及肝脏中MDA含量的影响（±s，n=10）Table 6 Effect of superfine powder on MDA content in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 与正常组比较，差异显著（p＜0.05）；b 与高脂模型比较，差异显著（p＜0.05）。

组别血清/（mmol/mL）肝组织/（mmol/mgprot）正常组 44.15±1.36b 1.17±0.21b高脂模型组 57.73±2.41a 2.83±0.19a阳性对照组 50.18±1.84b 1.49±0.34b低剂量组 55.09±1.72 2.64±0.16中剂量组 53.47±2.08b 2.05±0.12b高剂量组 52.83±1.49b 1.68±0.42b

由表6可知，高脂模型组小鼠MDA 含量显著高于正常组（p＜0.05），中、高剂量组小鼠 MDA 含量显著低于高脂模型组（p＜0.05），说明芡实超微粉对于高血脂症引起MDA 含量升高具有明显的缓解作用。且灌胃芡实超微粉剂量越高，小鼠MDA 含量降低效果，以高剂量组最优。

2.7 芡实超微粉对小鼠血清及肝组织中肝酯酶（HL）浓度的影响

芡实超微粉对小鼠血清及肝组织中肝酯酶（HL）浓度的影响见表7。

表7 芡实超微粉对小鼠血清及肝组织中肝酯酶（HL）浓度的影响（±s，n=10）Table 7 Effect of superfine powder on hepatic esterase（HL）concentration in serum and liver of mice（±s，n=10）

注：a 与正常组比较，差异显著（p＜0.05）；b 与高脂模型比较，差异显著（p＜0.05）；B 与高脂模型组相比，差异极显著（p＜0.01）。

组别血清/（mmol/mL）肝组织/（mmol/mgprot）正常组 218.41±4.32b 232.01±5.36b高脂模型组 174.54±5.21a 201.32±4.29a阳性对照组 214.54±2.84b 223.34±3.48b低剂量组 195.67±4.61 211.03±3.31中剂量组 202.48±5.37b 230.95±5.16b高剂量组 218.39±4.69B 231.86±5.11B

由表7可知，模型组肝酯酶浓度显著低于正常组（p＜0.05），阳性对照组、中剂量组小鼠肝酯酶含量显著高于模型组（p＜0.05），高剂量组小鼠肝酯酶含量极显著高于模型组（p＜0.01）。说明一定剂量的芡实超微粉能改善高血脂症小鼠肝酯酶衰减的症状，且剂量越高，效果越显著。