紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影响

姜 静，孔晨飞，王晓峰*，王 伟，王欢欢，张殿文，王 清

(1.吉林大学中日联谊医院 a.口腔科;b.科学研究中心，吉林 长春130033；2.吉林省中医药科学院)

牙周炎是口腔临床多发病，是导致牙缺失的主要原因之一，严重影响咀嚼功能，牙周炎病因尚未完全明确，但国内外学者较公认免疫因素与牙周炎发生有重要的关系[1]。IFN-γ是Th1型细胞因子，由CD4+T淋巴细胞分泌，Th1参与牙周炎的免疫应答[2,3]。本研究通过应用紫景天黄酮治疗大鼠实验性牙周炎，探讨紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级Wistar大鼠28只,购买于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，雌雄各半，体重：180-220 g，年龄：6-8周，序号：201800020338。

1.2 实验试剂与仪器

牙龈卟啉单胞菌(吉林大学基础医学院病原生物学系提供)，浓度1.0%紫景天黄酮凝胶(基质为16%泊洛沙姆)由吉林省中医药科学院制剂室提供，大鼠血清IFN-γ的ELISA试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)，离心机(德国Eppendorf)，微量移液仪(德国Eppendorf),多功能酶标仪(加拿大BioTek公司)

1.3 建立实验性牙周炎大鼠模型及分组

8只健康的大鼠作为正常对照组。20只健康Wistar大鼠按参考文献方法[4，5]采用带菌丝线结扎的方法建立大鼠实验性牙周炎模型。4周后有2只大鼠因结扎线脱落被淘汰，任选2只处死，取牙周炎患牙牙周组织进行组织病理学检查，镜下牙周组织内大量炎细胞浸润，可见微小脓肿形成；牙龈深层组织内形成水肿与纤维组织增生，可见牙槽骨吸收，表明牙周炎模型建立成功。剩余建模成功大鼠共16只，随机分为紫景天黄酮治疗组和模型对照组，每组各8只。

1.4 药物干预

治疗组大鼠在牙周炎患牙龈沟注入1.0%紫景天黄酮凝胶，模型组注入基质，均为每日2次，0.5 ml/次/只，次间隔为8 h，连续涂药14天。

1.5 血样采集

将3组大鼠用3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，将血液离心(1 500 r/min,15 min)后取上清，-80℃保存。最终每组大鼠取合格血清样本为6份。

1.6 实验室检测

严格按照ELISA试剂盒的使用方法对各组大鼠血清中的IFN-γ进行检测，使用酶标仪测量得到光密度值(OD值)。

1.7 统计学分析

2 结果

正常组、模型组和治疗组大鼠血清中IFN-γ的表达量分别为0.171±0.023 pg/mL，0.373±0.026 pg/mL，0.216±0.027 pg/mL。模型组大鼠血清中IFN-γ的含量明显高于正常大鼠(P<0.001),紫景天治疗组血清中IFN-γ含量明显低于模型对照组(P<0.001)。三组大鼠血清中IFN-γ含量的比较见图1。

图1 紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的影响

3 讨论

牙周炎是以牙菌斑为始动因子引起的感染性疾病，伴有牙周支持组织的破坏，牙周袋形成、附着丧失和牙槽骨吸收。牙周炎病情的进展是由菌斑和宿主反应共同引起的，宿主的防御细胞既能抵御外界病源微生物,又能释放大量的细胞因子和炎症介质，导致牙周组织的继发性损伤[5]。IFN-γ在慢性牙周炎的发病机制中发挥作用，并与疾病状态有很大的关联，且牙周炎患者唾液中IFN-γ的水平较正常人有明显增高[6]。随着牙周袋深度和附着丧失的增加，龈沟液中IFN-γ的表达也明显上升[7]。本研究结果表明实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的含量明显高于正常大鼠，可以推论IFN-γ确与牙周炎具有一定的相关性。

牙周炎病因尚不清楚，治疗方法有限，其中最主要的治疗方法是牙周袋内用药。牙周袋内用药多为抗生素类药物，易导致菌群失调等副作用，用抗菌药物辅助治疗牙周炎成为牙周病药物治疗的主要用药方法[8]。牙周袋局部用药多为抗生素类药物，长期使用易引起局部菌丛失调[9]。

紫景天为长白山野生药材，前期药理实验中[10]通过鼠耳肿胀法、腹腔通透性法、热板法、醋酸扭体法等证明，紫景天可明显抑制药物导致的小鼠耳肿胀和小鼠腹腔通透性，显著延长热刺激所致小鼠疼痛反应时间，减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，表明该药兼有抗炎和镇痛作用。紫景天含有槲皮素和山柰素等黄酮类成分，对牙龈卟啉菌、放线共生放线杆菌、产黑色素拟杆菌均有较好的抑菌疗效,即对牙周炎易感菌有明显的抑制作用[9]。

本研究采用紫景天提取黄酮制作出凝胶剂治疗大鼠实验性牙周炎，明显降低了实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ的表达水平，对大鼠免疫功能可能具有一定的调节作用，从而起到减轻大鼠牙周炎症的作用。紫景天黄酮对大鼠全身及牙周局部免疫因子的调节机理还有待于进一步的研究。