温阳消饮法对早期慢性心力衰竭大鼠血清血管紧张素Ⅱ及肿瘤坏死因子-α水平的影响

杨嘉豪 徐建虎

(宁夏医科大学中医学院，宁夏 银川 750004)

慢性心力衰竭(CHF)是各种心血管病及各系统疾病的严重或终末阶段，具有发病率高、死亡率高、治疗费用高的特点。近年全国各地住院患者调查显示〔1〕：60岁以下人群心力衰竭患病率在6.7%～18.8%，60～69岁人群心力衰竭患病率达23.5%，70～79岁人群则高达30.8%。其早期的发病机制一般以瘀血阻滞为主，其治法也多以活血化瘀，益气养心为主，而忽略了水饮之邪的潜伏。前期研究〔2，3〕发现，水饮在心力衰竭早期发挥着重要作用，且《金匮要略》中亦指出：“病痰饮者，当以温药和之。”基于此，本实验选用苓桂术甘汤与葶苈大枣泻肺汤合方组成具有温阳健脾、利水蠲饮之功的温阳消饮方，观察其对CHF大鼠血清血管紧张素(Ang)Ⅱ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的影响。

1 材料和方法

1.1实验动物 6～8周龄的SPF级SD大鼠50只，全为雄性，体重(200±20)g；由宁夏医科大学动物实验中心提供〔许可证号：SCXK(宁)2015-0001〕；大鼠均在SPF级动物房饲养，温度(24±2)℃，湿度(52±8)%；常规环境适应性饲养2 w后开始实验。

1.2实验药物 苓桂术甘汤制剂(按原方比例，茯苓、桂枝、白术、生甘草4∶3∶3∶2组成)，葶苈大枣泻肺汤制剂(由葶苈子、大枣组成)购自宁夏医科大学附属回医中医院门诊部；盐酸阿霉素(ADR，100 mg，aladdin公司，批号：D107159)；血府逐瘀胶囊(0.4 g/粒，天津宏仁堂药业有限公司生产，批号：G03038)；卡托普利片(25 mg/100片，上海旭东海普药业有限公司，批号PA170416)；大鼠血清AngⅡ、TNF-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海贝基生物科技有限公司，批号：DZE30645、DZE30526)。

1.3仪器 紫外/可见分光光度计(上海天能公司，UV751GD)；正置生物显微镜(德国 Leica 仪器有限公司，DM4000B)；冷冻高速离心机(珠海黑马仪器有限公司，TGL-16R)；恒温水浴箱(天津市工兴电器厂，DFD-700)；轮转式石蜡切片机(Leica公司，RM2235)；石蜡包埋机(湖北泰维科技实业有限公司，TB-718D)；-86℃超低温保存箱(中国Haier公司，DW-86L578S)。

1.4分组及造模方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组、温阳消饮组、血府逐瘀组、卡托普利组各10只；除空白组外，其余各组参考文献〔4〕腹腔注射ADR。将ADR以2 mg/kg剂量溶于1 ml生理盐水，每周1次，共注射6次。每周称重1次，作为后期干预用药依据。

1.5药液制备及给药方法 药物剂量按照成人日用量与大鼠体表面积折算为等效剂量，1次/d，连续4 w。温阳消饮方由茯苓、桂枝、白术、生甘草、葶苈子、大枣6味药物按照苓桂术甘汤、葶苈大枣泻肺汤原方配比组成，临用前用蒸馏水配制成含生药2 g/ml的药物浓缩液，按9 g/(kg·d)等效剂量灌胃；血府逐瘀胶囊，临用前用蒸馏水配制成0.1 g/ml的药液，以0.25 g/(kg·d)等效剂量灌胃；卡托普利片，临用前用蒸馏水配制成4 mg/ml的药液，按10 mg/(kg·d)等效剂量灌胃；空白组、模型组均给予和卡托普利组同体积的生理盐水灌胃。

1.6心肌细胞形态学变化 SD大鼠取血后取其心室部分，置于生理盐水中冲洗干净，投于10%的多聚甲醛中固定1～2 d，常规石蜡包埋切片后，将切片小心贴附于载玻片上进行HE染色，光镜下观察心肌细胞形态差异。

1.7血清检测 SD大鼠末次给药后2 h，用1.5%戊巴比妥钠0.025 ml/kg腹腔注射麻醉后将大鼠仰卧固定在手术架上，采用腹主动脉取血8～10 ml，注入抗凝管中防止溶血。冷冻高速离心机3 000 r/min，分离10 min，取上清液，-20℃保存待测。ELISA测定血清中AngⅡ及TNF-α水平，具体操作严格按照试剂盒说明。

1.8统计方法 采用SPSS23.0软件，正态分布且方差齐性的计量资料采用单因素方差分析；多个样本均数间的多重比较采用SNK-q检验；不符合正态分布且方差不齐的资料采用秩转换的非参数检验；计数资料采用χ2检验。

2 结 果

2.1心肌组织切片染色结果 空白组心肌细胞形态规则，肌纤维完整，排列规整。横纹清晰，胞质均匀且间质间未见血管扩张；模型组心肌细胞受损严重，形态不规则，肌纤维排列紊乱，大范围肿胀且出现断裂缺损，胞质浓染，间质血管扩张并伴随炎性细胞浸润。温阳消饮组与模型组相比，心肌纤维肿胀减轻且排列整齐无断裂，胞质均匀；卡托普利组、血府逐瘀组与模型组相比，心肌纤维亦有肿胀，空隙略增宽，偶有浸润的炎性细胞。见图1。

图1 光镜下各组心肌病理形态学(HE，×200)

2.2血清中AngⅡ、TNF-α水平 与空白组比较，模型组、卡托普利组AngⅡ、TNF-α含量显著升高(P<0.01)；与模型组比较，温阳消饮组与血府逐瘀组及卡托普利组AngⅡ、TNF-α含量均显著降低(P<0.01)；与血府逐瘀组比较，温阳消饮组AngⅡ含量差异无统计学意义(P>0.05)，卡托普利组AngⅡ含量较高(P<0.01)。温阳消饮组、血府逐瘀组、卡托普利组TNF-α含量两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组血清AngⅡ、TNF-α水平比较

与空白组比较:1)P<0.01；与模型组比较：2)P<0.01；与血府逐瘀组比较：3)P<0.01

3 讨 论

ADR具有严重的心脏毒性，能够抑制心肌收缩功能，从而导致心力衰竭，是临床理想的CHF大鼠模型〔5〕。本实验CHF大鼠心肌病理变化符合早期CHF病理特征，提示造模成功。

现代医家对CHF认识主要有两方面〔6〕，其一是早期的水钠过度潴留致使血流动力学改变，继而引起神经内分泌失调，刺激肾素-Ang-醛固酮系统(RAAS)激活，导致外周阻力增加，促发水钠潴留。其二是众多细胞因子对CHF病理及发病机制的影响，认为细胞因子在CHF的发病进程中，通过介导左室重构，降低心肌收缩力，致使β-肾上腺受体失耦联而引发或加重心力衰竭。而在影响心力衰竭的众多内分泌因子及炎症递质中，AngⅡ及TNF-α是重要的影响因子。

研究发现〔7〕，RAAS与炎性细胞因子是CHF病理和发病机制的重要影响因素，RAAS是人体调节血压，维持体液平衡的重要激素系统，在心力衰竭早期便激活。AngⅡ是RAAS中最为重要的效应分子，通过多种机制在心力衰竭进程中发挥重要作用，其升高稳定，能准确反映RAAS功能状态且其增高幅度与CHF的严重程度相关〔8〕。本研究结果说明在CHF发展过程中，AngⅡ发挥着重要作用，这与上述研究结果相同，也验证了实验CHF模型造模成功。温阳消饮方、血府逐瘀汤在降低AngⅡ水平上优于卡托普利，提示温阳消饮法可以拮抗心力衰竭引起的RAAS激活，并改善大鼠水钠潴留及心功能。

TNF-α是一种由激活的巨噬细胞产生的能抑制成骨细胞和刺激破骨细胞的细胞因子，其在调控细胞增殖、分化、生长及代谢等活动中发挥着十分重要的作用〔8〕。研究发现〔9〕，心肌细胞本身不能产生TNF-α，而CHF时，可表达TNF-α，提示TNF-α可能作为心力衰竭治疗的靶点。本实验研究结果验证了TNF-α的升高可诱导心室重塑、促发心肌细胞凋亡、介导CHF发生。温阳消饮法可能通过降低TNF-α浓度，抑制心室重构，起到治疗CHF的作用。

综上，早期采用温阳消饮法治疗可以降低CHF大鼠血清AngⅡ、TNF-α含量，说明了早期CHF“从饮论治”的科学性，亦说明心力衰竭早期可能是痰饮、瘀血共同作用的结果。