Diversin在结直肠癌中表达及与临床病理因素的关系

廖鑫 曾宪东 林建飞 李楠洋 王翠芳 吴非 白阳 程新宇 栾岚

(沈阳医学院 1基础医学院研究生院，辽宁 沈阳 110034；2附属中心医院病理科)

在西方国家，结直肠癌是癌症死亡的第2大原因，最新的全球癌症统计数据显示，在亚洲地区结直肠癌的发生呈上升态势〔1～3〕。在中国，结直肠癌是癌症死亡的第5大原因，在经济较发达的城市比例更高〔4〕。目前，结直肠癌的治疗手段包括手术、化疗、放疗，其中以手术治疗为主，但仍有20%～30%的患者出现病情复发。Diversin是果蝇属Diego蛋白在哺乳动物中的同系物〔5，6〕。研究发现在新生小鼠和成鼠脑内，Diversin表达于室下区和海马区的神经母细胞和成熟神经元，并证实Diversin可促进其增殖活性〔7〕。近年来课题组发现Diversin在非小细胞肺癌中高表达，对肿瘤的发生发展起促进作用〔8〕。目前尚未见Diversin 在结直肠癌组织中表达的报道。本研究检测结直肠癌及癌旁组织中Diversin 的表达及与临床病理参数的关系。

1 材料与方法

1.1临床资料 收集沈阳医学院附属中心医院病理科2010～2011年经手术切除病理证实为结直肠癌的蜡块标本51例(结直肠癌组)，男35例，女16例，年龄33～87岁。结肠癌28例，直肠癌23例，高分化病人36例 ，中低分化病人15例，分期标准参照国际抗癌联盟(UICC)的 TNM 标准，Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期20例，淋巴结转移24例，所有患者术前未接受新辅助治疗。本研究经沈阳医学院当地机构审查委员会批准。同时收集了来自相同患者的51例相邻组织标本作为阴性对照组。

1.2主要试剂 鼠抗人Diversin 抗体(1∶400)购自美国 Santa Cruz 公司；二抗〔快捷型酶标羊抗鼠/兔免疫球蛋白(Ig)G聚合物〕，粉剂型磷酸盐缓冲液(PBS)，二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒，粉剂型抗原修复液均购于福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3EnVision两步法进行免疫组织化学染色 10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片厚度4 μm，应用苏木精-伊红染色，行病理诊断。用80℃烤箱对切片进行烘烤1 h，再用乙醇脱水，应用枸橼酸缓冲液行高温高压水化修复过程，之后 PBS 洗3次，并使内源性过氧化物酶灭活，加入一抗(1∶400)50 μl，温度控制于4℃一夜;再用PBS洗3次，加入二抗50 μl。室温下 DAB显色，PBS 洗3次，苏木精轻度复染，盐酸乙醇分化后流动清水冲洗 10 min，梯度乙醇脱水，松节油透明和树胶行封片处理，PBS 代替一抗作为阴性对照，光镜下观察。

1.4结果判读 Diversin 主要表达于细胞膜和细胞质中，阳性表达为棕黄色，由2名病理医师进行盲法评估，随机选取5个100倍视野通过评估染色强度和每个载玻片代表性区域染色的细胞百分比，对所有载玻片进行半定量评分。染色的细胞百分比评分为0(≤4%)、1(5%～24%)、2(25%～49%)、3(50%～74%)和4(≥75%)分。根据染色强度，Diversin的表达分为4个等级：0(无染色)、1(淡黄色颗粒)、2(黄色)、3(深黄色颗粒)级。将染色强度的分数和每个肿瘤样品中染色的阳性细胞的百分比评分相乘，总分为0～12分。得分<3分认为是阴性，≥3分被定义为阳性。

1.5统计学方法 采用 SPSS22.0软件行χ2检验。

2 结 果

2.1Diversin在结直肠癌组织中的表达 阴性对照组肠上皮细胞中检测到Diversin阳性表达率为98.0%(5/51)，结直肠癌患者Diversin阳性表达率为80.39%(41/51)，阳性信号主要表达于肿瘤细胞的胞质和细胞膜中，见图1。

2.2Diversin在结直肠癌组织中的表达与各临床病理参数之间的关系 Diversin的阳性表达在不同分化程度、临床分级和淋巴结转移的结直肠癌患者中差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

图1 Diversin在两组中的表达(DAB，×100)

表1 Diversin在结直肠癌组织中的表达与临床病理因素的关系(n)

3 讨 论

小鼠Diversin是由712个氨基酸编码的蛋白质，有3个功能域，分别是包含8个锚蛋白重复序列的氨基端、与酪蛋白激酶(CKI)ε相互作用的保守中心区(第287～544氨基酸)及连接Conductin或Axin的羧基端(第583～712氨基酸)〔9〕。目前已证实氨基端锚蛋白重复序列可与Dishevelled的普列克底物蛋白(DEP)区直接结合〔10〕。Luan等〔8〕研究发现Diversin在非小细胞肺癌(NSCLC)中过表达，NSCLC中过表达并预测其预后不良，Diversin可能通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)途径促进细胞增殖和侵袭；Yu 等〔11〕研究发现，在乳腺癌中存在Diversin过度表达，并与TNM分期和淋巴结转移相关，结果表明，Diversin是乳腺癌进展的重要调节因子。初瑞等〔12〕发现Diversin 在胃腺癌中的表达与淋巴结转移、浸润深度、肿瘤大小均呈正相关，与年龄、性别和分化程度不相关。Diversin 在结直肠癌中的表达及作用机制尚未见报道。本文首次研究了Diversin在人类结直肠癌中的表达情况，发现Diversin蛋白在结直肠癌中存在高表达，并与结直肠癌的中～低分化、高分期和淋巴结转移相关，在结直肠癌中发挥着促癌作用。