地仙壮骨汤对去卵巢大鼠骨密度的实验研究∗

邹平鸿 刘国泰 刘 平 史晓林

1 江西省九江市濂溪区血吸虫病防治站 332008； 2 抚州市第一人民医院； 3 江西农业大学； 4 浙江中医药大学

绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis, PMOP)是指绝经后妇女卵巢功能衰退,雌激素水平降低,以低骨量和骨组织的显微结构退变为主要改变,临床表现为骨脆性增加和易骨折的疾病。骨质疏松症(Osteoporosis,OP)属于骨代谢性疾病，在中老年人中十分常见，尤其是绝经后妇女，有关研究显示，60岁以上绝经妇女发生PMOP的概率在 40% 以上[1]，这种高发风险要远远超过同龄男性，可见绝经后妇女是OP的高危人群。尽管OP不会直接造成患者死亡，但骨折的危害却时刻威胁着人们的健康，同时致残率高，医疗费用较高，均会给患者带来较大的负担。目前雌激素疗法是防治PMOP的主要方法之一，但是雌激素的大量使用会增加心脑血管等疾病的风险，在临床应用中受到制约[2]。因此开发出安全可靠的防治PMOP的药物是目前研究的重要课题。中医药在防治PMOP有明显优势，尤其是在安全用药方面。基于此，本实验采用中药方自拟地仙壮骨汤治疗去卵巢骨质疏松模型大鼠，观察其对大鼠骨密度(Bone mineral density,BMD)的影响，探讨其对OP的干预作用，旨在从中医药角度为临床治疗OP提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取6个月龄SD雌性健康大鼠40只，未孕,体重250～300g(江西农业大学实验动物中心提供)。按清洁级标准饲养管理,自由饮消毒自来水,饲料为标准颗粒饲料,光照为12h/d。 将40只实验大鼠共分为4组，每组10只。其中假手术大鼠10只为假手术组；30只去势大鼠随机分为如下3组：模型组、自拟地仙壮骨汤组、仙灵骨葆组，

1.2 实验药品 (1) 自拟地仙壮骨汤：由熟地黄15g、淫羊藿9g、龟板胶12g、菟丝子9g、丹参12g、当归9g、黄柏6g、黄芪15g、牛膝9g共九味中药组成。将上述中药水煎液浓缩至100ml,每毫升浓缩液约含生药1.0g。(2)仙灵骨葆胶囊：0.5g/片(成分主要为淫羊藿、续断、补骨脂等)，由贵州仙灵制药有限公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 去卵巢大鼠骨质疏松模型：大鼠用氯胺酮(100mg/kg)腹腔麻醉，脊柱两侧各刮毛2cm×2cm左右，侧卧位于手术台，局部消毒后无脱毛处皮肤用手术刀做1cm左右切口，用有齿镊垂直夹住并提起肌肉，用手术剪将肌肉及腹膜剪开1cm左右，用止血钳夹住一侧腹膜固定，用圆头无齿镊伸入腹腔，找出卵巢(为粉红色，直径0.5cm左右，与子宫相连)并连子宫一起轻提出切口，夹住子宫末端，切除卵巢，结扎游离子宫末端，松开止血钳，将子宫送回腹腔，缝合肌肉与腹膜，关腹并缝合皮肤。对侧同。

1.3.2 假手术大鼠模型：给大鼠行手术切开进腹后仅切除卵巢周围少量脂肪组织即可。术后大鼠腹腔均注射青霉素10万U/(只·d)，共3d，以预防术后感染。

1.4 给药方案 假手术组和模型组喂服饮用水，每周喂6d，休息1d，1次/d，每次每只喂2ml；自拟地仙壮骨汤组喂服自拟地仙壮骨汤，每周喂6d，休息1d，1次/d，每次每只喂2ml；仙灵骨葆组喂服仙灵骨葆胶囊，每次剂量为0.1g/kg，溶于2ml消毒饮用水，每周喂6d，休息1d，1次/d，每次每只喂2ml。均术后35d起开始喂服，共13周。

1.5 动物处死与取材 于第13周后用颈椎脱臼法处死各组大鼠。取左侧后肢股骨，仔细剥除股骨周围肌肉、结缔组织，放入液氮速冻，然后转移至超低温冰箱-20℃保存待测。

1.6 观察指标 使用天平仪测量大鼠用药前后的体质量；采用美国LUNAR公司DPX-L型双能X线骨密度测量仪测定大鼠左侧股骨BMD。

2 结果

2.1 各组大鼠用药前、后体质量比较 用药前，4组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05)。用药13周后，模型组大鼠的体质量与假手术组比较，差异有统计学意义(t=6.823,P<0.05)；与自拟地仙壮骨汤组比较，差异有统计学意义(t=5.394,P<0.05)；与仙灵骨葆组比较，差异有统计学意义(t=4.111,P<0.05)。自拟地仙壮骨汤组与仙灵骨葆组比较,差异无统计学意义(t=0.474，P>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠用药前、后体质量比较

注:＊与模型组比较，P<0.05。

2.2 各组大鼠骨密度值比较 用药13周后，自拟地仙壮骨汤组与仙灵骨葆组BMD值比较， 差异无统计学意义(t=1.205,P>0.05)。自拟地仙壮骨汤组与假手术组比较，差异有统计学意义(t=5.059,P<0.05)；与模型组比较，差异有统计学意义(t=6.874,P<0.05)。仙灵骨葆组与假手术组比较，差异有统计学意义(t=6.746,P<0.05)；与模型组比较，差异有统计学意义(t=7.973,P<0.05)。假手术组与模型组比较，差异有统计学意义(t=3.849,P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠左侧股骨BMD值比较

注：△与模型组比较，P<0.05。

3 讨论

PMOP是最常见的原发性骨质疏松症,其发病率较高,对中、老年女性健康造成严重威胁。随着人口老龄化的迅速到来，OP已成为世界性关注的严重社会问题。OP的治疗和康复需要耗费大量的经济资源，给家庭和社会造成极大负担，因此如何防治OP近年来成为是医学界主要研究课题[3]。

祖国医学对OP的认识渊远流长。《内经》最早提出的“骨痿”的说法，当属现代医学上的OP。中医药治疗OP着重于整体调节，并作用于多个环节，最终达到机体激素失衡和负钙平衡的效果，治疗骨质疏松有较大的优势。中医药不仅能提高临床治疗效果，还可有效降低不良反应的发生率[4]。依据“肾主骨”理论,中医学认为OP多与肾虚有关。近年来的研究表明,补肾疗法对雌激素缺乏诱发的骨代谢紊乱具有多靶点的调节作用,通过调节成骨细胞和破骨细胞的平衡以提高BMD,改善骨质量等作用。因此,补肾壮骨是治疗PMOP的基本治疗方法。本实验的自拟地仙壮骨汤由熟地黄、淫羊藿、龟板胶、菟丝子、丹参、当归、黄柏、黄芪、牛膝共九味中药组成，以补肾壮骨、养血活血为治疗原则。方中熟地黄味甘性温，归肝肾经，是补肾益血的良药，可生精填髓、滋补肝肾，从而达到强壮筋骨的目的，肾精充沛则可养骨充髓。淫羊藿补肾阳强骨，共为君药。龟板胶甘咸寒,长于填精补髓、滋阴养血，当归温润养血、调理冲任，丹参活血止痛，菟丝子温补肾阳，为臣药，黄芪补气升阳，牛膝引血下行，黄柏泻相火，以引诸药入肾经，使阴阳平衡，共为佐使。

邓君等[5]通过检测钙磷乘积水平及ALP发现淫羊藿苷可以改善骨质疏松性骨折模型老年大鼠的骨折愈合过程，这可能是通过提升软骨内成骨，提高矿化速度，增加骨痂及BMD，促进 OPG 的表达，从而加快老年大鼠骨质疏松性骨折的愈合过程。任辉等[6]认为龟板可能通过降低高转换率从而有效提高BMD，改善损害的骨微细结构和骨组织形态结构，增强压缩强度，治疗OP。

目前，骨质疏松模型大鼠的制作方法主要有维甲酸灌胃、切除卵巢和灌服糖皮质激素造模3 种。去卵巢大鼠模型是使用最普遍且研究最广泛的实验用骨质疏松症动物模型[7],是研究PMOP的经典模型[8]。目前,临床主要依据BMD来诊断OP，BMD是目前最好的骨折危险预测指标[9],因此选择BMD作为判断OP改善程度的主要指标。双能X线吸收测定法(Dual energy X-ray absorptiometry，DXA)是目前国际学术界公认的诊断OP的金标准[10]。本实验证实自拟地仙壮骨汤能够提高去卵巢骨质疏松大鼠的BMD，且自拟地仙壮骨汤组BMD与模型组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05)。

中药治疗OP且药物有效成分较明确的中成药主要包括淫羊藿苷、骨碎补总黄酮和人工虎骨粉制剂[10]。而仙灵骨葆胶囊就是以淫羊藿苷为主要成分的中药制剂，由骨伤专家时光达教授对苗族验方进行研究后将淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、丹参、知母等九味中药配伍而成，主要用于治疗OP。并作为防治OP的首选药物入选2012年版《国家基本药物目录》[11]。王桂倩等[12]通过Meta分析认为仙灵骨葆胶囊单用或与西药联用，在治疗OP方面的疗效优于单用西药治疗，并能有效提高BMD。本实验自拟地仙壮骨汤组大鼠体质量及BMD与仙灵骨葆组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明自拟地仙壮骨汤具有同仙灵骨葆胶囊同样的临床疗效。

综上所述，自拟地仙壮骨汤可提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的BMD，是治疗PMOP的有效药物，值得进一步研究。