高效液相荧光法测定养殖水产中四种氟喹诺酮类药物残留

2019-04-15邬玲玲

山西化工 2019年6期

冯涛，邬玲玲

(杭州职业技术学院，浙江杭州 310018)

引言

氟喹诺酮(Fluoroquinolones,FQs)是一种人工合成的抗菌类药物，具有抗菌作用强、抗菌性广等特点，目前被养殖户广泛应用。我国于20世纪70年代开始将环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星等喹诺酮类药物应用于水产病害防治。随着FQs的广泛应用，在水产品体内药物残留情况越来越严重，也将对人类造成极大的危害。因此，人们对FQs的药物残留检测研究越来越重视。世界各国已将氟喹诺酮列为动物性食品中残留检测的重点监控药物，对水产品体内的氟喹诺酮残留有严格的标准和要求[1-3]。

目前测定氟喹诺酮药物残留方法包括毛细管电泳法、薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法等。本研究采用固相萃取技术进行水产品富集等前处理，用荧光检测器的液相色谱仪梯度洗脱检测，测定人工养殖水产品中氟喹诺酮残留[4-5]。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters e2695高效液相色谱仪，美国Waters公司；Waters2475荧光检测器，美国Waters公司；明澈-D型超纯水器，美国Millipore公司；YGC-6A固相萃取仪，郑州宝晶电子科技有限公司；KQ3200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；HLB固相萃取柱，6 cc/500 mg，美国waters公司；HSC-24B氮吹仪，恒奥科技有限公司；离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；涡旋振荡器，ABSON Vortex Mixer。

甲醇、乙腈，色谱级，美国TEDIA公司；氟喹诺酮类标准品：环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星，美国CATO公司。

1.2 样品前处理

称取5.00(±0.01)g对虾肉、大闸蟹肉、黑鱼肉置于50 mL离心管中，加入甲酸(1%甲酸)-乙腈溶液10 mL，涡旋振荡1 min，超声提取20 min后，4 000 r/min离心10 min，取上清液于另一干净离心管中。残留组织重复操作提取，合并上清液。将HLB固相萃取柱用3 mL甲醇、3 mL水活化，取10 mL提取液上清样后，用3 mL甲醇洗脱，氮吹至净干，用乙腈定容至1 mL，用0.22 μm滤膜过滤，取0.5 mL加入1 mL 20×10-9的混合标准液。

1.3 HPLC分析

采用C18(5 μm，4.6×250 nm)色谱柱，流速：0.6 mL/min，柱温为35 ℃，进样量为10 μL，荧光检测器检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm，以乙腈和0.02%的甲酸水溶液(pH=3.0)作为流动相进行梯度洗脱，洗脱方法见第34页表1。

表1 流动相洗脱方法

由图1可见，4种分析物的保留时间分别为：环丙沙星26.304 min；达氟沙星28.228 min；恩诺沙星29.822 min；沙拉沙星35.054 min。

图1 4种FQs的FLD检测HPLC色谱图

2 结果及讨论

2.1 分析条件的选择与优化

环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星等氟喹诺酮类药物结构式中含有羧基和哌嗪基，故运用反相色谱分析时，选择酸性溶液为流动相。流动相中pH值对检测氟喹诺酮类药物的分离度影响很大。在不同pH的条件下进行测试，实验表明，流动相的pH值越低，FQs的保留时间越长。本方法采用pH=3.0的甲酸水溶液(0.02%)和乙腈作为流动相，不仅能使4种氟喹诺酮类药物有很好的分离度，而且灵敏度高。4种氟喹诺酮环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星荧光检测波长较为接近，采用280 nm的激发波长和450 nm的发射波长。