GC-MS法测定盐酸金霉素眼膏中的15种邻苯二甲酸酯

陈希 段和祥 刘绪平

(江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029)

邻苯二甲酸酯类物质(phthalate acid esters, PAEs)作为增塑剂被普遍应用于食品包装材料、塑料玩具和塑料医疗器械中[1-3]。对PAEs的安全性评估表明，其对动物明确的有致畸和致突变作用，且具有类环境激素功效，对机体显示出较强的内分泌干扰性[4-8]。卫生部公告(2011年第16号)已明确将邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)等17种PAEs规定为违法添加的非食品物质，禁止在食品中使用。但由于食品包装材料中的PAEs在使用中会迁移到食品中，卫办监督函(2011年第551号)又进一步规定食品包装材料中的PAEs应当严格执行《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》(GB9685)中规定的种类、范围和特定迁移量或残留量的要求，且不得用于油脂类食品和婴幼儿食品；同时规定食品、食品添加剂中的DEHP、DINP和DBP最大残留量分别为1.5、9.0和0.3mg/kg[9-11]。

盐酸金霉素眼膏中凡士林和液体石蜡占处方量的95%以上，上述辅料收载于中国药典2015年版，但均未对PAEs进行控制[12-13]。凡士林和液体石蜡均为弱极性化合物，易富集PAEs，如采用了不恰当的包装材料等，可能导致PAEs污染药品。本文采用气相色谱-质谱法(GC-MS)对盐酸金霉素眼膏中的PAEs进行检测，以评价产品是否有被PAEs污染的风险。

1 仪器与试药

1.1 仪器

7890B-7000C气相色谱质谱联用仪(Aglient公司)，MS205DU电子天平(Mettler Toledo公司)，N-EVAP24氮吹仪(Organomation公司)，DL-6000B离心机(上海安亭科学仪器厂)，GENIUS 3涡旋振荡器(IKA公司)。10mL具塞刻度试管，所用玻璃仪器清净后，用超纯水清洗3次，丙酮浸泡1h后再在200℃下烘烤2h，冷却后备用。

1.2 材料和试剂

正己烷、乙腈为色谱纯，邻苯二甲酸酯混合标准溶液(15种组分名称详见表1，来源：上海安谱试验科技股份有限公司，批号：312542，各组分浓度均为1000μg/mL)。混合标准储备溶液：移取邻苯二甲酸酯混合标准溶液0.5mL置于50mL量瓶中，用乙腈稀释并定容至刻度，作为混合标准储备溶液(10μg/mL)。样品为210批次盐酸金霉素眼膏(2018年国家药品计划抽验样品)。

2 方法与结果

表1 邻苯二甲酸酯定量和定性选择离子表Tab.1 Quantitative and qualitative selection of PAEs ion meter

2.1 仪器条件

色谱条件：DB-5MS毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，载气：高纯氦气。进样口温度：260℃；进样方式：直接进样(不分流)；进样体积：1μL；流速：1.0mL/min。升温程序：初始柱温60℃，保持1min；以20℃/min升温至220℃，保持1min；再以5℃/min升温至250℃，保持1min；再以20℃/min升温至290℃，保持7.5min。

质谱条件：离子源温度：230℃；电离能量：70eV，GC/MC传输线温度：280℃；溶剂延迟：7min；电离方式：电子轰击源；监测方式：选择离子监测，监测离子详见表1。

2.2 样品提取

称取混合均匀的眼膏1.0g，置于10mL具塞刻度试管中，加乙腈饱和的正己烷6mL，涡旋振荡使基质溶解，2000r/min离心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度试管中，加正己烷饱和的乙腈3mL，振荡提取1min，收集乙腈层。再用正己烷饱和的乙腈按上述步骤提取2次，合并乙腈层，涡旋混匀，氮吹尽干，再补加乙腈至1mL，涡旋混匀作为待测溶液(必要时离心)。

2.3 线性

移取混合标准储备溶液适量，加乙腈稀释成浓度为50、100、250、500、750、1000、2000和4000ng/mL的混合标准曲线系列溶液。

分别精密量取上述系列混合标准溶液各lμL，分别注入GC-MS仪，记录质谱图。以系列各组分标准溶液的浓度为横坐标，各组分峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。各组分分离效果较好，且能在30min内完成分析，各组分的总离子流图详见图1。绘制的标准曲线结果表明，各组分在相应浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.997，详见表2。

2.4 检出浓度和定量浓度

图1 邻苯二甲酸酯标准混合溶液总离子流图Fig.1 Total ion chromatogram of PAEs standard mixed solution

表2 邻苯二甲酸酯线性方程及其相关系数Tab.2 The linear equations of PAEs and their correlation coef fi cients

分别移取混合标准储备溶液适量，加乙腈稀释成浓度为15和50ng/mL的混合标准溶液，精密吸取上述两种标准混合溶液各1μL，注入GC-MS仪，记录质谱图。15和50ng/mL的混合标准溶液各组分在定量离子图谱中信噪比分别满足1:3和1:10，可以分别作为15种邻苯二甲酸酯类物质检测仪器的检出限和定量限。按“2.2”项步骤制备样品时，15种邻苯二甲酸酯类物质检测检出浓度可定为0.03mg/kg，定量浓度可定为0.1mg/kg。

2.5 精密度

精密量取浓度约为500ng/mL的混合标准溶液1μL，连续进针6次，记录质谱图，计算各组分峰面积的相对标准偏差(RSD)，结果15种邻苯二甲酸酯的RSD均小于5%，结果表明仪器精密度良好。

2.6 准确度和重复性

取混合均匀的空白试样1.0g，置于10mL具塞刻度试管中，加乙腈饱和的正己烷6mL，涡旋振荡使基质溶解，2000r/min离心5min，取上清液3mL至另一具塞刻度试管中，加浓度为1000ng/mL的混合标准溶液1mL后再加正己烷饱和的乙腈2mL，振荡提取1min，收集乙腈层。再用正己烷饱和的乙腈按上述步骤提取2次，合并乙腈层，涡旋混匀，氮吹尽干，再补加乙腈至1mL，涡旋混匀作为待测溶液平行制备6份。15种邻苯二甲酸酯类化合物的平均回收率为71%～117%，回收率的RSD为0.8%～5.2%，表明本方法准确度和重复性结果良好，结果详见表3。

2.7 样品测定

对210批盐酸金霉素眼膏进行检测，仅27批次未检出邻苯二甲酸酯类物质，其余183批次样品均检测出一定浓度的的DIBP、DBP和DEHP。样品中DBP含量大于10mg/kg的共有9批次(最高为48mg/kg)，均为C企业样品，涉及6个批号；样品中DEHP含量大于50mg/kg的共有5批次(最高为80mg/kg)，均为F企业样品，涉及2个批号。统计数据详见表4～5。

3 讨论

3.1 测定方法的优化

本文采用GC-MS测定了盐酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP等15种PAEs，具有前处理简单、分析时间快、检出浓度低、回收率高、重复性好等特点。基于样品中盐酸金霉素不能溶于正己烷的特点，样液制备时先用乙腈饱和正己烷溶解眼膏基质，再通过离心沉淀去除盐酸金霉素。由于正己烷在乙腈中具有一定的溶解性，如果样液制备时采用乙腈萃取，可导致正己烷层体积逐渐减少，乙腈层最终提取体积超过9mL，经氮吹液体更加浑浊，基质干扰更强烈；本研究采用正己烷和乙腈相互饱和的溶液溶解基质并萃取，能一定程度解决上述问题。

表3 邻苯二甲酸酯类物质测定准确度和重复性结果表Tab.3 Determination of accuracy and repeatability of PAEs

表4 盐酸金霉素眼膏测定数据(1)Tab.4 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (1)

表5 盐酸金霉素眼膏测定数据(2)Tab.5 Chlortetracycline hydrochloride eye ointment measurement data (2)

3.2 DBP、DEHP、DIBP安全性问题

经调研，盐酸金霉素眼膏的生产工艺中均未涉及到PAEs。此次210批盐酸金霉素眼膏中，DEHP和DBP含量最高值分别为80和48mg/kg，DEHP和DBP检出平均值为7.8和2.5mg/kg，远高于上述成分在我国食品批准中的限值和包装材料所允许的迁移值。C企业个别批次的DBP和F企业个别批次的DEHP含量异常高，且这两家企业DBP和DEHP检出平均浓度也为7家企业中最大。此外，产品中DIBP的检出率高达55%，检出浓度平均为0.12mg/kg。鉴于GB 9685-2016已将DIBP从邻苯二甲酸酯类物质的使用范围中删除，提示其可能存在一定的安全风险。上述结果提示，盐酸金霉素眼膏生产企业尚未意识到产品已被PAEs污染及可能带来的安全风险。鉴于PAEs存在的致突变、致癌作用和生殖毒性等危害，企业有必要对上述现象进行自查，确定盐酸金霉素眼膏中DIBP、DBP、DEHP的来源，进而控制产品被PAEs污染的风险。