结直肠腺癌组织中CYR61和血管内皮生长因子的表达及相关性研究*

史 璇，张 鑫，朱金朋，邸 巍,田 蕾

锦州医科大学附属第一医院消化内科三病区( 锦州 121000)

结直肠腺癌临床最为常见，是肠粘膜上皮来源的肿瘤，由腺上皮的异型增生演变而来，伴有肌层的侵袭。病变形成中伴有间质的血管新生，可以为肿瘤细胞的增殖提高必要的营养和氧[1]。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor ，VEGF)是血管生成的经典蛋白，可以促进间质中血管内皮细胞的繁殖，促进管腔形成，使血管具有功能[2]。目前研究其影响因素较多。高半胱氨酸蛋白61(Homocysteine protein 61，CYR61)是结缔组织生长因子家族的成员，是早期促癌基因，对肿瘤形成起的作用更加直接，尤其是对血管生成的调控是其重要功能之一[3-4]。本文关注结直肠腺癌中CYR61和VEGF的表达，探讨二者的关系，分析其临床意义。

资料和方法

1 一般资料 收集近两年在我院确诊为结直肠腺癌，并行手术治疗的患者作为观察组，收集病人的完整资料，留取术后新鲜组织，共77例，其中男性40例，女性37例，年龄45～89岁，平均(59.7±9.3)岁。纳入均由病理医师复审切片，并按WHO的诊断标准分型。排除标准：①术前行放、化疗的患者；②有肠道手术史的患者；③多原发癌的患者。选择上述患者中距肿瘤边缘大于5 cm的正常结肠黏膜新鲜组织12例作为对照组，其中男性6例，女性6例，年龄49～80岁，平均年龄(58.6±7.8)岁。两组在性别、年龄构成等常规因素比较无统计学差异。

2 CYR61和VEGF蛋白的检测 CYR61和VEGF的检测应用流式细胞术(两组蛋白的半定量表达)。术后新鲜样本均应用70%酒精固定后，用眼科剪刀剪碎组织，在铜网上过滤后，制备单细胞悬液(1×106/ml)，取1 ml单细胞悬液，按实验步骤加入一抗、PBS及FITC-IgG二抗。应用BC公司生产的Epics-XLII型流式细胞仪，应用数据软件进行分析。

3 结果判定 以荧光指数(FI)表示蛋白表达的半定量。FI值计算公式为：

结果

1 CYR61和VEGF在两组中表达的比较 CYR61和VEGF在两组中表达的差别有统计学意义，见表1。

2 CYR61和VEGF在观察组不同病理特征中的比较 观察组中CYR61和VEGF的表达与肿瘤的最大径、肿瘤的浸润深度密切相关，CYR61与肿瘤的分化程度和增殖指数密切相关，VEGF的表达与肿瘤的淋巴结转移密切相关,见表2。

3 观察组中CYR61和VEGF的相关性 应用线性相关分析，结果显示观察组中CYR61和VEGF的表达具有正相关性(r=0.55，P<0.05)。

表1 CYR61和VEGF在两组中表达的比较

表2 CYR61和VEGF在观察组不同病理特征中的比较

讨论

结直肠腺癌肿瘤具有侵袭性，其侵袭程度与分化和细胞增殖程度相关。血管生成不仅在癌前病变及异型增生到较大病灶形成中起重要作用，同时在肿瘤向周围或远处侵犯和转移过程中发挥了重要作用，并参与了肿瘤量变的过程[5-6]。CYR61基因定位于1p22-p31，相对分子量为42kDa，含有5个外显子和4个内含子，编码381个氨基酸的开放阅读框架，其中38个为保守的半胱氨酸[7]。CYR61的表达是通过RhoA激酶和P38途径调节的，P38通过调节环磷酸腺苷反应结合蛋白，并使蛋白发生磷酸化后调节CYR61启动子活性，其表达产物被分泌到细胞表面，具有明显的促有丝分裂活性，同时具有明显的趋化性[8-9]。在功能上CYR61通过不同途径诱导细胞增殖、粘附、转移、细胞外基质的调节和血管的新生[10]。CYR61在结直肠癌中的作用属于早期应答基因，因此其在肿瘤中是全程参与的，其在不同阶段促肿瘤生成的程度可能不同[11-12]。

本实验应用的流式细胞术可以半定量检测蛋白的表达，结果客观，无主观判断产生的偏差，重复性好。本研究结果显示肿瘤中CYR61和VEGF高表达是促进肿瘤形成的重要因素，使肿瘤细胞具有一定的异型性，同时肿瘤细胞具有明显的侵袭性，此时细胞的形态发生变化，核染色深，组织结构形成筛状和迷路状，肿瘤趋于幼稚。结果显示观察组中CYR61和VEGF的表达与肿瘤的最大径、肿瘤的浸润深度密切相关，提示CYR61和VEGF高表达可以促进肿瘤的生长和直接蔓延。CYR61与肿瘤的分化程度和增殖指数密切相关，提示CYR61可以促进肿瘤细胞的失分化过程和细胞的繁殖，肿瘤细胞生长旺盛，肿瘤细胞数量明显增加，肿瘤体积增大，对肌层和周围组织的破坏能力增强，肿瘤的恶性程度明显提高[13]。结果显示VEGF的表达与肿瘤的淋巴结转移密切相关，提示VEGF高表达可能对肿瘤的淋巴道播散有一定的促进作用。相关性分析显示观察组中CYR61和VEGF的表达具有正相关性，提示二者具有明显的正向协同作用。CYR61参与肿瘤新生血管生成的可能机制为：①Cyr61与整合素受体结合后通过激活αvβ3以旁分泌形式调节血管生成的活动，包括促进细胞间的黏附、增殖、增加生长因子诱导的DNA的合成及介导内皮微管的形成等[14]。②CYR61可增加促血管生成调节因子[15]，如血管内皮生长因子的表达，本实验的相关性直接证实了此观点。③CYR61可诱导ECM降解蛋白酶和基质金属蛋白酶的生成，抑制组织金属蛋白酶抑制剂表达，改变ECM的结构或稳定性，间接促进血管生成[16-17]。但是由于CYR61是多向调控基因，关于CYR61的具体作用和影响因素有待更多基础实验证实。

总之，结直肠腺癌组织中CYR61和VEGF高表达对促进肿瘤性病变的形成和进展有重要作用。CYR61和VEGF之间具有正向协同作用。