壮族和汉族多囊卵巢综合征患者脂联素基因rs1501299位点的多态性比较▲

梁雪飞 万江帆

(广西壮族自治区卫生计生委生殖中心生殖科，南宁市 530021，电子邮箱：lxf9299@163.com)

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是一种生殖内分泌紊乱性疾病，以卵巢多囊样改变、持续性无排卵、高雄激素血症为主要临床表现。目前，遗传因素、环境因素、精神和心理因素、药物因素均被认为是其致病因素[1]。我国汉族妇女的发病率为5%～8%[2]。肥胖型PCOS在育龄期妇女中的发病率可高达10%[3]，且由于其存在胰岛素抵抗、高胰岛素血症，导致其治疗难度要远高于非肥胖型。PCOS有家族遗传聚集倾向[4]，已有学者发现在正常人脂联素序列中有许多的等位基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)位点，其所在的染色体3q27区域存在与2型糖尿病[5-6]、代谢综合征[7]、肥胖[8]和PCOS[9]相关的易感位点。有研究结果显示，脂联素基因rs1501299的SNP位点与PCOS相关[10]。在我国，脂联素基因rs1501299位点的研究主要集中在汉族人群[11-12]，而针对少数民族人群的研究几乎未见报道。壮族是我国人口最多的少数民族，目前尚无相关研究报告壮族和汉族PCOS患者脂联素基因rs1501299位点是否存在差异。本研究以壮族和汉族PCOS患者为研究对象，检测其脂联素基因rs1501299位点不同基因型分布情况，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择于2012年10月至2016年12月到我院试管婴儿门诊就诊的PCOS患者为研究对象。纳入标准：(1)自我报告或其直系家属报告三代以内均为壮族血缘或汉族血缘；(2)PCOS的诊断符合 2003 年鹿特丹标准[13]，满足以下3项中的两项即可诊断：① 稀发排卵或无排卵；② 高雄激素血症的临床表现和(或)高雄激素血症；③ 卵巢多囊性改变，包括一侧或双侧卵巢中直径 2～9 mm的卵泡≥12 个，和(或)卵巢体积≥10 ml。排除标准：(1)合并其他致雄激素水平升高的病因如先天性肾上腺皮质增生、Cushing综合征、分泌雄激素的肿瘤等；(2)合并其他引起排卵障碍的疾病，如高泌乳素血症、卵巢早衰和垂体或下丘脑性闭经、甲状腺功能异常等。共纳入439例患者，根据民族分为壮族组198例及汉族组241例。两组年龄及卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone，LH)、雌激素、泌乳素及睾酮水平比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性，见表1。本研究纳入的研究对象均知情同意且签署知情同意书；本研究获得医院医学伦理委员会的批准。

表1 两组一般情况资料对比(x±s)

1.2 性激素的测定 抽取所有患者清晨空腹静脉血5 ml，12 000 r/min离心10 min，分离血清，测定FSH、LH、雌激素、泌乳素及睾酮，以上指标均由专人采用贝克曼DXI800型化学免疫发光分析仪进行测定，并进行质控。

1.3 基因多态性检测 采集所有患者外周静脉血5 ml，置于含有乙二胺四乙酸抗凝剂的真空采血管中，混匀，4℃送至广西医科大学实验室。红细胞裂解液裂解红细胞后，使用细胞核裂解液裂解细胞核，应用异丙醇沉淀法提取全基因组DNA，置于-80℃保存，用于基因分析。采用中高通量SNPscan技术进行基因分型，检测工作主要由上海天昊生物科技有限公司完成。在所有样品中随机抽取5%的样本进行重复检测，检测结果一致率为100%。采用SHEsis在线软件[11]计算该位点在两组中的等位基因分布是否符合哈温平衡定律。

1.4 统计学分析 应用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料以(x±s)表示，组间比较采用t检验或方差分析；计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用χ2检验分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

汉族组脂联素基因rs1501299位点等位基因G、T频率分别为73.74%、26.26%，壮族组分别为76.14%、23.86%，两组患者的基因分布均符合哈温平衡(χ2=0.240，P=0.620；χ2=3.510，P=0.060)。壮族组与汉族组患者脂联素基因rs1501299位点基因型分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 两组脂联素基因rs1501299位点基因型分布情况[n(%)]

3 讨 论

PCOS于1935年被首次报道，但至今其发病机制仍未能阐明[14]。过去PCOS被认为具有家族遗传性，因此大部分学者针对基因开展研究以寻找其病因，如胰岛素受体相关基因(rs2252673、rs17253937、rs3786681等)[15]、肥胖相关基因(MC4R rs17782313、FTO rs9939609等)[16]、脂联素基因(rs1501299、rs17300539等)[17]等，但国内外学者的研究结果不尽相同，且至今仍未发现任何一个直接导致PCOS的候选基因。

脂联素基因由3个外显子和2个内含子组成，rs1501299位点位于第2内含子上[18]，其基因多态性并不影响蛋白质转录及翻译过程中氨基酸序列顺序，因此可能并不影响脂联素蛋白构象及功能，也可能不会参与PCOS的发病。Ranjzad等[19]也发现在伊朗人群中，rs1501299位点的基因型与PCOS的发生并无相关性。本研究结果显示，壮族与汉族PCOS患者的脂联素基因rs1501299位点基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)，提示脂联素基因rs1501299位点的多态性可能不受民族的影响。Norman等[20]发现PCOS患者的一级直系家属发病率明显高于普通人群，但不遵循孟德尔遗传规律，其遗传规律较为复杂，提示PCOS更可能是遗传因素与环境因素共同作用的结果。影响PCOS发病的可能因素为：(1)环境因素。环境内分泌干扰物如双酚A通过干扰雌激素或抗雌激素合成扰乱内分泌系统的正常运转[21]。(2)心理因素。长期焦虑、抑郁、悲伤等负性情绪及长期紧张使得机体处于长期慢性应激状态，这些不良心理情绪均会增加肾上腺皮质激素分泌量，进而导致胰高血糖素血症或胰岛素抵抗发生，导致PCOS的发生[22]。(3)精神因素。妇女精神紧张、压抑等精神问题可对下丘脑-垂体-卵巢轴产生直接抑制作用，扰乱下丘脑-垂体-卵巢轴的正常节律及卵巢功能。(4)药物因素也可以诱导PCOS发生[23]。

综上所述，PCOS患者的脂联素基因rs1501299位点的多态性分布可能不受民族影响，PCOS的发生应是多种因素共同作用结果，但仍需要更大样本量、更为严谨的实验研究来进一步证实。