PCDH10在胃癌组织中的表达特点及其与患者临床特征、预后的关系

田浩，马翾，高峡

宜昌市第二人民医院（肿瘤医院）肿瘤外科，湖北 宜昌 4430000

近年胃癌的发病率明显升高，流行病学研究证实，中国部分地区胃癌的发病率可达（272～383）/10万人[1]。临床上胃癌的发生可以导致患者致残率和病死率升高，导致患者不良临床结局的发生[2]。不同的肿瘤相关蛋白均可以促进胃癌的发生，影响肿瘤细胞的生物学特征，导致肿瘤细胞的浸润、增殖及黏附能力的改变。原钙粘蛋白（protocadherin 10，PCDH10）表达水平的改变，可以影响下游肿瘤信号通路的激活，提高p53抑癌基因的活性，并可以稳定肿瘤细胞的细胞周期，进而抑制肿瘤的早期发生和中晚期病情进展。部分研究者报道了PCDH10在胰腺癌等恶性肿瘤中的表达情况，认为PCDH10表达水平的下降是促进胰腺恶性肿瘤进展的重要因素[3]，但对于PCDH10表达与胃癌关系的研究不足。为了揭示PCDH10表达与胃癌临床特征的关系，本研究收集手术后胃癌组织标本90例，分析PCDH10蛋白的表达情况及其与患者临床特征、预后的关系，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本选取

选取2013年6月至2014年12月宜昌市第二人民医院手术后胃癌组织标本和癌旁组织标本。纳入标准：①经术后病理学检查确诊为胃癌；②术前无放化疗史；③患者的临床资料完整。排除标准：转移性胃癌。根据纳入、排除标准，分别选取术后胃癌组织标本90例和癌旁组织标本45例。胃癌组织对应患者的年龄为37～73岁，平均年龄为（57.5±12.1）岁；男52例，女38例；Lauren分型[4]：肠型33例，弥漫型57例；分化程度：高分化19例，中分化28例，低分化43例；TNM分期：I期24例，Ⅱ期29例，Ⅲ期37例。癌旁组织对应患者的年龄为42～70岁，平均年龄为（55.8±10.1）岁；男25例，女20例。两组患者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫组化法及结果判定

所有组织标本均经石蜡包埋后连续切片，厚度约为4 mm，采用免疫组化链霉抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法（streptavidin-biotin-peroxidase complex method，SABC）染色，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色。PCDH10蛋白通用型二抗、SP试剂盒、DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗分别作为阳性及阴性对照，高倍显微镜下观察PCDH10蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

免疫组化的结果判定：PCDH10蛋白的阳性着色表达于细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色。根据着色强度评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为褐色、黑色。根据阳性细胞比例评分：1分为阳性细胞比例≤10%，2分为阳性细胞比例占11%～50%，3分为阳性细胞比例占51%～75%，4分为阳性细胞比例＞75%。两种评分相乘得分＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.3 蛋白质印迹法

将蛋白样品与上样缓冲液以5∶1的比例混合，80～100℃煮沸5 min。根据蛋白相对分子质量不同，配制并灌注相应的12%分离胶和5%浓缩胶，按照15 g/孔蛋白量进行组织蛋白的上样，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDSPAGE）。电泳后根据条带切胶，半湿法转移至硝酸纤维素膜，牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）封闭2 h，加入含10%的BSA一抗及二抗（1∶1000），PBS清洗3次，每次5 min，进行曝光及胶片弧度的读取。

1.4 随访

对两组患者进行随访观察，随访时间≥3年，主要通过电话、信件和患者主动到本院门诊接受随诊复查的方式完成。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16-.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PCDH10表达情况分析

胃癌组织中PCDH10阳性表达率为32.22%（29/90），明显低于癌旁组织的84.44%（38/45），差异有统计学意义（χ2=32.728，P＜0.01）。胃癌组织中PCDH10相对表达量为（0.204±0.085），明显低于癌旁组织的（0.693±0.173），差异有统计学意义（t=22.064，P＜0.01）（图1）。

图1 胃癌组织与癌旁组织中PCDH10蛋白质印迹检测结果

2.2 不同临床特征的胃癌患者胃癌组织的PCDH10表达情况

TNM分期为I～Ⅱ期、无淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织的PCDH10阳性表达率高于TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移的胃癌患者，差异均有统计学意义（χ2=7.370、6.420，P=0.007、0.011）；不同年龄、性别、肿瘤直径、Lauren分型、分化程度的胃癌患者胃癌组织的PCDH10阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

2.3 胃癌组织中PCDH10表达与患者预后的关系

随访3年，PCDH10阳性表达患者失访1例，死亡10例；PCDH10阴性表达患者失访3例，死亡36例。PCDH10阳性表达患者的3年生存率为62.1%（18/29），高于PCDH10阴性表达患者的36.1%（22/61），差异有统计学意义（χ2=5.272，P=0.022）。

3 讨论

胃癌的病情进展较隐匿，虽然早期可能有上腹不适的临床症状，但疾病的总体早期诊断水平较低[4-8]。胃癌的治疗效果仍不能令人满意。因此，关于胃癌患者的临床病理特点及诊疗一直是研究的热点[9-12]。本研究分析胃癌组织中PCDH10的表达情况及其与胃癌临床特征、预后的关系，不仅可以为胃癌发病机制的研究提供参考，也可以为胃癌的诊断提供潜在的临床指标。

表1 不同临床特征的胃癌患者胃癌组织的PCDH10表达情况（n=90）

PCDH10蛋白的表达在恶性肿瘤的发生过程中发挥了重要的作用，其参与肿瘤细胞代谢、细胞周期调控及细胞凋亡等过程。PCDH10表达水平的改变可以阻断肿瘤信号通路，抑制下游肿瘤细胞转录调控因子的活性，降低肿瘤细胞DNA的扩增速度。PCDH10蛋白可以促进肿瘤细胞膜表面糖蛋白配体的激活，影响细胞周期调控依赖性蛋白激活的转录活性，降低上皮细胞持续性扩增的风险[13]。近年相关基础方面的研究显示，PCDH10蛋白对肿瘤上皮细胞形态有维持作用，可以降低肿瘤细胞的变形能力，使肿瘤细胞浸润和转移的能力下降[14]。部分研究者报道了PCDH10蛋白在消化系统恶性肿瘤中的异常表达情况，认为PCDH10蛋白的表达水平下降与肝癌或者胰腺癌的发生有一定的关联[14]，但对于PCDH10蛋白的表达与胃癌患者临床特征关系的研究不多。

本研究免疫组化的结果分析可见，PCDH10蛋白在胃癌组织中的相对表达量和阳性表达率均明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01），提示PCDH10蛋白的表达缺失可能是促进胃癌发生发展的重要因素。胃癌组织中PCDH10蛋白表达水平下降主要与下列两个因素有关：①PCDH10蛋白的表达缺失导致肿瘤细胞浸润能力提高，使肿瘤细胞更易突破基底膜组织；②PCDH10蛋白的表达水平下降，导致其对肿瘤细胞周期的调控作用减弱，肿瘤细胞增殖速度明显加快。本研究在分析不同临床特征的胃癌患者PCDH10蛋白表达变化时发现，临床分期较晚或者有淋巴结转移的患者PCDH10蛋白的阳性表达率下降，提示PCDH10蛋白的表达与胃癌患者的临床分期及淋巴结转移情况有关，这主要是由于PCDH10蛋白的表达缺失可以影响胃黏膜上皮细胞对邻近正常组织的浸润能力，导致疾病进展，而PCDH10蛋白的表达缺失还可以影响淋巴结的黏附分子的波动。部分研究者认为Lauren分型与胃癌组织中PCDH10蛋白相关，本研究并未得出相同结论，考虑可能与PCDH10蛋白检测灵敏度的差别有关。生存预后的分析可见，PCDH10蛋白阳性表达的胃癌患者3年生存率高于PCDH10蛋白阴性表达的患者，差异有统计学意义（P＜0.05），提示PCDH10蛋白对胃癌患者的生存预后有影响。本研究的创新性亦在于探讨了PCDH10蛋白与胃癌患者临床预后的关系。

综上所述，PCDH10表达水平下降可能在促进胃癌的发生过程中发挥了重要的作用，同时PCDH10表达水平下降可以增加患者生存预后恶化的风险。