两版食品中维生素A测定的国标方法比较

许迪明，刘忠义，王春芳

（宁波海关，浙江 宁波，315012）

0 引 言

维生素A又称视黄醇或抗干眼病因子，是一类脂溶性维生素。维生素A具有促进生长发育，延长寿命，保护视觉与上皮细胞的作用。维生素A缺乏，产生夜盲症、干眼病等疾病，维生素A过量也会引发中毒症状[1]。

目前测定维生素A的方法有比色法，紫外分光光度法和高效液相色谱法等[2]。其中高效液相色谱法较为常用，现行有效的测定食品中维生素A的国标GB 5009.82-2016《食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》采用该方法测定[3]。

测定食品中维生素A的国标[3-5]，先后有三版，分别是GB/T 12388-1990《食物中维生素A和维生素E的测定方法》、GB 5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》和GB 5009.82-2016《食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》。上述三个国标方法测定维生素A的原理基本相同，即样品经皂化、提取、净化后，用液相色谱进行分析。但具体测定步骤略有不同，皂化时采用的抗氧化剂、皂化装置、提取溶剂，以及液相定量方法有区别。本文采用奶粉为样品，对上述GB 5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》和GB 5009.82-2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》方法的采用的抗氧化剂、提取溶剂以及液相定量方法进行比较，评价各因素对实验回收率的影响。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

安捷伦1100高效液相色谱仪，配紫外检测器；梅特勒PL203电子天平；上海左乐SHA-B水浴恒温振荡器；Heidolph Hei-VAP Advantage旋转蒸发仪；美国OrganomationN-EVAPTM112氮吹仪。

1.1.2 试剂

氢氧化钾（分析纯）；乙醚（分析纯）；石油醚（30℃～60℃）（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；无水乙醇（分析纯）；抗坏血酸（分析纯）；2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）（分析纯）；甲醇（色谱纯）；维生素A标准品（纯度≥95.0%）；苯并[e]芘（纯度≥98.0%）。苯并[e]芘标准溶液100 ug/m L。实验用水为去离子水。

1.2 色谱条件

色谱柱：资生堂MGⅡC18柱，250mm×4.6mm，5um；流动相：乙腈+甲醇(8+2)；流速：1.0 mL/min；检测波长：325 nm；柱温：35℃；进样量：20 uL。

1.3 样品处理

1.3.1 GB 5009.82-2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》

称取5 g奶粉试样于平底烧瓶，加入20 m L温水后摇匀，再加入1.0 g抗坏血酸和0.1 g BHT后摇匀，加入30 mL无水乙醇，加入20 mL氢氧化钾（1+1）水溶液，混匀后于80℃恒温水浴震荡皂化30 min，皂化后冷却至室温。皂化液转入分液漏斗，加入50 mL乙醚—石油醚混合液（1+1），振荡萃取5 min，将下层溶液转移至另一分液漏斗，再加入50 mL乙醚—石油醚混合液（1+1）再次萃取，合并醚层。用约100 mL水洗涤醚层，重复3次，直至将醚层洗至中性，去除下层水相。醚层经无水硫酸钠（约3 g）滤入鸡心瓶中，用15 m L石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次，并入鸡心瓶，于40℃蒸馏至约2 mL时，用氮气吹至近干。用甲醇定容至刻度10 mL。溶液过0.22μm有机系滤膜后供高效液相色谱测定。外标法定量。

1.3.2 GB 5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》

称取5 g奶粉试样于皂化瓶中，加入20 mL50℃水溶解，加30 mL无水乙醇，搅拌均匀。加10 mL10%抗坏血酸溶液，苯并[e]芘标准液100 ug/mL 200 uL，混匀。加入10 mL氢氧化钾（1+1）水溶液，混匀，于沸水浴回流30 min使皂化完全。皂化后立即冷却。将皂化后的试样移入分液漏斗，用约100 mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，合并乙醚液于分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗2 min，静置分层，弃去水层。用约50 mL水洗分液漏斗中的乙醚层直至水层不显碱性。将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约5 g）滤入于鸡心瓶内，用约100 mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入鸡心瓶，于55℃水浴中减压蒸馏至剩下约2 mL乙醚时，取下蒸发瓶，用氮气吹掉乙醚。立即加入2.00 mL乙醇，充分混合，溶解提取物。溶液过0.22μm有机系滤膜后供高效液相色谱测定。内标法定量。

2 结果与讨论

2.1 两版国标方法比较

以奶粉为样品，采用GB 5009.82-2003和GB 5009.82-2016两版国标方法测定其维生素A含量的回收率，见表1。

表1 GB 5009.82两版国标测定结果的比较 %

结果表明，GB 5009.82-2003测定结果回收率高，在100%左右；GB 5009.82-2016测定回收率较低，在80%左右。

2.2 液相色谱定量方法

两版国标中，液相色谱定量方法有区别，GB 5009.82-2003采用内标法定量，而GB 5009.82—2016采用外标法定量。为考察内外标法对测定结果的影响，分别采用两个国标的前处理方法，分别内标法和外标法进行定量，结果见表2、表3。

表2 GB5009.82-2003维生素A测定内标法与外标法的比较%

表3 GB5009.82-2016维生素A测定内标法与外标法的比较%

表2、表3结果显示，采用任意一版国标的前处理方法，液相定量方法采用内标法，其回收率在100%左右；而采用外标法定量，回收率在70%～80%。

2.3 抗氧化剂的选择

抗氧化剂的使用，两版国标有差别，GB 5009.82-2003采用10%抗坏血酸溶液，而GB 5009.82-2016则直接加入1.0 g抗坏血酸和0.1 g BHT固体。为考察两者区别，采用GB 5009.82-2003的前处理方法，比较两者的抗氧化效果，结果见表4。

表4 GB5009.82两版国标抗氧化剂效果比较 %

采用10%抗坏血酸溶液和1.0 g抗坏血酸和0.1 g BHT固体，测定维生素A的回收率相差不大，因此10%抗坏血酸溶液和1.0 g抗坏血酸和0.1 g BHT固体的抗氧化效果相差不大。

2.4 提取溶剂的选择

提取溶剂的选择，两版国标有差别，GB 5009.82-2003采用乙醚提取，而GB 5009.82-2016采用乙醚-石油醚混合液（1+1）提取。为考察两者区别，采用GB 5009.82-2003的前处理方法，比较两者的实验效果，结果见表5。

表5 GB 5009.82两版国标提取试剂效果比较 %

提取试剂采用乙醚与乙醚—石油醚混合液（1+1），测定维生素A的回收率相差不大，乙醚、乙醚—石油醚的提取效果相差不大。

3 结 论

两版测定食品中维生素A的国标，其原理相同，操作大致相同，只是在抗氧化剂、皂化温度提取试剂和定量方法有所区别。GB 5009.82-2003实验回收率较GB 5009.82-2016实验回收率高，原因是GB 5009.82-2003采用内标法，而GB 5009.82-2016采用外标法。其他两个因素，抗氧化剂和提取试剂的区别对实验回收率影响不大。