血清TK1在非小细胞肺癌辅助诊断中的临床意义

韩卫卫 朱 明 狄冬梅

1 苏州大学附属常州市肿瘤医院胸心外科，江苏省常州市 213000；2 苏州大学附属第三医院胸心外科

肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率也一直居高不下。手术治疗是早期肺癌首选的治疗方式，且具有良好的效果，其中Ⅰ～Ⅱ期的非小细胞肺癌患者的5年生存率可达69.9%[1-2]。但由于肺癌起病隐匿，早期缺乏典型症状和特异临床表现，大部分患者在发现时已是中晚期，从而丧失了手术根治的机会，治疗起来棘手且效果差[3]。因此，肺癌的早诊早治显得尤为重要，细胞质胸苷激酶作为一种新型的细胞增殖相关性的肿瘤标志物，在临床得到了广泛的应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年1月—2014年12月在苏州大学附属常州肿瘤医院就诊的非小细胞肺癌(NSCLC)患者共计106例作为NSCLC组，其中男69例，女37例，患者中位年龄63(43～78)岁。所有患者均行支气管镜活检、穿刺活检或手术切除以获得病理诊断，其中腺癌64例，鳞癌36例，腺鳞癌6例。参照美国癌症联合会(AJCC) 2017 年第8版NSCLC TNM分期，分为Ⅰ期16例，Ⅱ期30例，Ⅲ期54例，Ⅳ期6例。收集同期36位肺部良性病变(肺炎、肺结核、炎性假瘤、血管瘤)患者血清作为良性肺疾病组，其中男22例，女14例，中位年龄58(36～75)岁。同时选取本院50例健康体检者(无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，无肿瘤家族史)的样本作为健康对照组。上述样本均经医学伦理委员会批准后收集。

1.2 标本采集 健康对照组、良性肺疾病组以及NSCLC组于治疗前采集样本用于相关肿瘤标志物的检测。于晨起空腹采集静脉血5ml，3h内以3 800rpm/min离心8～10min分离血清，分装于2个Eppendorf管中(1管用于检测、另1管用于复检)，-20℃冰箱保存，备用。

1.3 血清TK1检测方法及阳性判断标准 采用免疫印迹增强化学发光法(ECL)进行血清TK1检测，TK1检测试剂盒和CIS-1型化学发光数字成像分析仪由深圳市华瑞同康生物技术有限公司提供；其余常规肿瘤标志物采用2010型RocheElesys自动电化学发光免疫法进行检测，试剂盒均由Roche公司提供。全过程由专人严格按照试剂盒测定说明书进行操作。各肿瘤标志物的阳性判断标准分别为：TK1>2.0pM，CEA>5.0ng/ml， NSE>17.0ng/ml，CYFRA21-1>3.3ng/ml，SCC-Ag>2.5ng/ml。

2 结果

2.1 NSCLC组与良性肺疾病组、健康对照组TK1水平比较 106例NSCLC患者中有48例(45.28%)血清TK1高于参考值(2.0pM)，平均浓度为(3.074±0.236)pM，显著高于良性肺疾病组和健康对照组(P<0.001)；而良性肺疾病组与健康对照组相比，差异无统计学意义(P=0.078)。见表1。

表1 TK1在NSCLC组、良性肺疾病组与健康对照组之间的水平比较

注：a为NSCLC组与健康对照组比较，b为良性肺疾病组与NSCLC组比较，c为良性肺疾病组与健康对照组比较。

2.2 肺癌患者TK1水平与临床病理参数的关系

TK1水平与患者的年龄、性别、是否吸烟以及淋巴结转移状态之间无显著相关性(P>0.05)；而在肿瘤病理类型、分化程度、 TNM 分期和远处转移这些分组中，TK1 水平的差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 TK1水平与肺癌临床病理参数之间的相互关系

注：*P<0.05差异具有统计学意义。

2.3 肺癌血清肿瘤标志物单项与联合检测的比较 由对肺癌患者各项血清肿瘤标志物单项检测的结果来看，TK1的敏感性和特异性都不是最高的，但是当四项联合(除TK1)检测时，敏感性可提高到66.3%；进一步联合TK1后，肺癌的诊断敏感性显著提高到了80.2%。尽管五项联合后的诊断特异性有所下降，但是从总体看，TK1联合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC诊断的准确性有所提高(78.8%)。见表3。

表3 肺癌血清肿瘤标志物单一与联合检测的敏感性、特异性、准确性比较

3 讨论

肺癌是目前中国乃至全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居首位[4]，手术依然是治疗NSCLC最有效的方法之一，但由于NSCLC起病隐匿，大部分患者在发现时已是中晚期，从而丧失了手术根治的机会。尽管随着新型化疗药物、免疫治疗及分子靶向治疗等综合治疗模式的出现，肺癌的治疗手段不断增多，然而肺癌患者5年生存率仍仅有15%左右，总体疗效仍不理想[5-6]。因此，肺癌的早期诊断和正确的预后评估，对肺癌个体化治疗方案的制定、肺癌疗效和整体生存率的提高具有重要意义。

近年来，血清学肿瘤标志物(TM)作为一种非侵入性诊断肿瘤的手段，相比影像学和病理学检查，具有操作简便、成本低、创伤小的优势，目前被广泛应用于肿瘤的早期筛查、诊断、预测疗效及患者预后随访[7]。TK1是一种新型的细胞增殖特异性标志物，它是细胞周期合成期(S期)的关键酶之一，参与DNA合成的嘧啶补救途径。在正常细胞中，TK1在细胞分裂前已被降解，所以正常人血清中的TK1浓度极低或几乎检测不到。然而在肿瘤患者体内，由于恶性肿瘤细胞的异常增殖，肿瘤细胞中DNA合成也随之剧增，大量TK1被释放入血，研究表明肿瘤患者血清中的TK1水平含量可达正常人的2～100倍[8]。

本研究检测发现NSCLC组患者TK1水平明显高于良性肺疾病组及健康对照组(P<0.05)，这表明TK1升高与非小细胞肺癌具有一定的相关性，提示TK1可作为肺癌筛查的一个重要指标。而良性肺疾病组TK1水平虽然高于健康对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，部分良性肺疾病患者TK1水平升高可能与增生性疾病相关[9]。TK1水平与患者的年龄、性别、是否吸烟以及淋巴结转移状态之间无显著相关性；而与肿瘤病理类型、分化程度、TNM分期、远处转移情况显著相关(P<0.05)，在肺腺癌、肿瘤低分化、 TNM 分期较晚、存在远处转移的患者中，TK1水平明显升高。这些结果与现有的研究基本一致，然而在肿瘤病理类型、淋巴结转移状态、TNM分期等因素上还存在一定的争议。比如，Li等[10]的研究显示，TK1水平与NSCLC的分期、淋巴结转移状态和肿瘤大小密切相关。但是Brockenbrough等[11]研究了110名NSCLC患者，发现TK1浓度与肿瘤细胞增殖及血管增生程度呈正相关，而与肿块大小无关。 Li等[12]通过研究250名NSCLC患者的TK1，发现NSCLC患者的TK1水平远高于健康人群，出现远处转移的患者TK1明显高于未转移者，而在无远处转移的患者中，临床Ⅲ期TK1水平明显高于Ⅰ期、Ⅱ期，但与病理类型无关。不同研究中存在差异的原因可能是由于样本量的差异所导致的误差，也有可能是处理血清样本的方法不同或使用的检测抗体不同，这些都有可能会影响分析结果。虽然TK1的表达情况与NSCLC临床病理特征的关系还有待进一步探讨，但总体来看，TK1的表达水平与NSCLC的恶性程度呈正相关。

TK1作为一种新的肿瘤标志物，因其反映的是体内异常增殖细胞的存在，故在多种肿瘤的临床诊治中，起到越来越重要的作用。刘京生等[13]对TK1在中国人群中对多种肿瘤的诊断性meta分析结果显示，血清TK1对正常人群的特异性较高，对肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、食管癌、妇科恶性肿瘤等的诊断仅有中度敏感性，但在实际临床应用中，TK1结合传统肿瘤标记物联合检测可显著提高综合诊断的敏感性与准确性[14-15]。在本次研究中，由对肺癌患者各项血清肿瘤标志物单项检测的结果来看，TK1的敏感性和特异性都不是最高的，但是当四项联合(除TK1)检测时，敏感性可提高到66.3%；进一步联合TK1后，肺癌的诊断敏感性显著提高到了80.2%。尽管五项联合后的诊断特异性有所下降，但是从总体看，TK1联合CEA、NSE、CYFRA21-1和SCC-Ag可使NSCLC诊断的准确性有所提高(78.8%)。

综上所述，TK1水平与NSCLC的恶性程度密切相关，但单独检测 TK1 无法作为主要的肺癌筛查手段，而将TK1与传统肿瘤标志物进行联合检测，则可以明显提高NSCLC筛查的敏感性及准确性，具有一定的辅助诊断作用。