γ干扰素释放分析试验在肺结核病中的实验诊断比较研究

胡冬华 ，阳福桂 ，王祖康 ，李琴 ，钟丹 ，王春

(1.萍乡市第三人民医院检验科，江西 萍乡337000；2.萍乡市湘雅萍矿合作医院输血科，江西 萍乡 337000)

肺结核病是一种临床常见、对患者健康可造成严重威胁的呼吸道慢性传染病，其感染的病原体为对一二线抗结核药物均可产生耐药性的结核分枝杆菌（MTB）。目前，全球约有三分之一的人曾感染或正感染MTB。中国是世界上22个结核病高负担国家之一。患者人数仅次于印度，居世界第二位[1]，缺乏先进的诊断工具是中国结核病预防和控制面临的挑战之一[2]。面临经常性的诊断困境，临床上一直期望能有一种特异性及敏感性更高的实验方法来帮助支持诊断结核感染。上世纪90年代科学家们通过比较基因组学发现了MTB具有卡介苗、其他分枝杆菌没有的基因区域，且位于此区域的两个蛋白早期分泌抗原-6（ESAT-6）和培养基滤过蛋白-10（CFP-10）具有较强的Th表位。在此基础上，国外学者结合T细胞免疫分析技术的进展，建立了一种新的体外检测方法，即是结核特异性T细胞免疫γ-干扰素释放试验 （interferon-γ release assays，IGRA）[3]。为进一步确认IGRA对于肺结核病尤其是肺结核病菌检测阴性患者的诊断应用价值，本研究选择了80例肺结核菌检测阳性的确诊患者，80例肺结核菌检测阴性的确诊患者进行了结核抗体实验、结核菌素皮肤试验（TST）及IGRA实验，并对其各组实验结果进行相应比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择肺结核病菌检测阳性患者80例，男性47例，女性33例，年龄分布为25~86岁，年龄中位数为45.2岁，平均年龄（46.11±2.13）岁；肺结核病菌检测阴性患者80例，男性43例，女性37例，年龄分布为21~83岁，年龄中位数为44.5岁，平均年龄（43.21±1.16）岁；结核病患者密切接触者30例，其中男性12例，女性18例，年龄分布为23~56岁，年龄中位数为36.2岁，平均年龄（33.23±3.15）岁；健康志愿者共30例，其中男性17例，女性13例，年龄分布为20~32岁，年龄中位数为 26.2 岁，平均年龄（25.11±1.16）岁。

纳入标准：①肺结核菌检测阳性患者：肺结核菌检测阳性为痰涂片找抗酸杆菌阳性和（或）结核杆菌培养阳性，并经菌型鉴定均为人型结核分枝杆菌感染者。②肺结核病菌阴患者：3次以上痰涂片找抗酸杆菌及1次结核杆菌培养均为阴性者，符合中华医学会对于肺结核病菌检测阴性诊断标准。③结核病患者密切接触者：选择与结核病患者有3年以上密切接触史的本院医护工作人员。④健康人群：经胸部X线体检检查确认无肺部疾患的健康志愿者，并经谈话问卷调查为对结核分枝杆菌感染低暴露风险人群。本研究所有纳入研究对象均获得其知情同意。

1.2 方法 血γ干扰素释放分析实验测定试剂盒由北京万泰生物公司生产，所采用的方法是体外释放酶联免疫吸附法，结果判定标准为：按照试剂说明书进行，以T管与N管含量差值即（T-N）≥14，并且≥N/4，结果判定为阳性，T管与N管含量差值即（T-N）＜14，结果判定为阴性。

1.3 统计学方法 数据统计应用SPSS 18.0统计分析软件进行，计数资料对比采用卡方检验，P＜0.05时表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血IGRA、TST及TB-Ab结果 表1中4组人群 IGRA 检测结果比较（χ2=139.886，P＜0.05），差异有显著意义。进一步行配对χ2检验比较两组结果之间的差异，结果显示，肺结核菌阳患者与结核病密切接触者及健康志愿者比较（χ2=34.263，92.206，P＜0.05），差异有显著意义；肺结核菌阴患者与结核病密切接触者及健康志愿者比较 （χ2=14.124、61.875，P＜0.05），差异具有统计学意义；结核病密切接触者与健康志愿者比较 （χ2=18.261，P＜0.05），差异有显著意义；肺结核菌阳患者与肺结核菌阴患者比较（χ2=6.26，P＞0.05），差异无统计学意义。

表1 四组不同人群血IGRA结果的比较[n（%）]

表 2 中 IGRA、TST、TB-Ab 三种方法比较（χ2=48.565，P＜0.05），差异有显著意义，IGRA 和 TST 比较（χ2=14.879，P＜0.05），差异有显著意义，IGRA 和TB-Ab 比较 （χ2=47.619，P＜0.05）， 差异有显著意义。

表2 肺结核菌阳患者三种方法阳性率的比较[n（%）]

表3中菌阴肺结核患者的IGRA、TST及TBAb 三种方法结果比较（χ2=41.376，P＜0.05），差异具有统计学意义，IGRA和TST结果比较 （χ2=5.542，P＜0.05），差异具有统计学意义，IGRA和TB-Ab比较（χ2=39.056，P＜0.05），差异具有统计学意义。

表3 肺结核菌阴患者三种方法阳性率的比较[n（%）]

2.2 γ-干扰素释放试验结果显示，其敏感性对肺结核病菌阳患者为95%（76/80），对肺结核病菌阴患者为82.5%（66/80），γ干扰素释放试验在诊断肺结核病的统计分析中，其总敏感性为88.8%（142/160）；对结核病患者密切接触的特异性为46.7%（14/30），对健康志愿者的特异性为 100%（40/40），诊断结核病的总特异性为76.7%（46/60）。相比较结核抗体实验及结核菌素皮肤试验结果在肺结核病菌检测阳性及阴性患者中的阳性率，γ干扰素释放试验结果阳性率均显著高于前两项实验。

3 讨论

由结核杆菌感染导致的肺结核病是一种常见的慢性传染病，但在对该病的实验诊断工作，除典型的排菌者外，结核杆菌病原体却常常难以被及时准确检测到。而在临床诊断工作中，只有利用各种实验方法，间接或直接地找到结核杆菌，才是对结核病有价值的诊断和治疗重要依据。但在当前大部分基层医院中，痰涂片找抗酸杆菌，结核抗体检测，结核菌素皮肤实验这三项实验室辅助诊断肺结核病的主要常规实验，结核分枝杆菌培养、结核分枝杆菌基因扩增等方法因受仪器设备等诸多实验开展条件限制而普及率不高。有鉴于此，期待一种有更高灵敏度和特异性的实验诊断方法就成了临床及时辅助诊断结核感染的迫切需要。在此背景之下，经过多年的研究，γ干扰素释放试验（IGRA）才被成熟应用于临床结核杆菌感染辅助鉴别诊断。

越来越多的临床实践证实了IGRA在结核病诊断中的作用。根据国内相关文献报道，肺结核病菌检测阳性患者IGRA阳性率为88.89%～94.44%，肺结核病菌检测阴性患者阳性率为78.57～90.32%[4-6]。最新的系统评价和meta分析显示，活动性肺结核患者IGRA的总体敏感性为88%（95%CI：85%～90%）；在低危健康人群中，IGRA的整体特异性为86%（95%CI：81%～90%）[7]。 本研究中 γ-干扰素释放试验对结核病诊断的总敏感性为88.8%，对结核病诊断的总特异性为76.7%，与国内外相关研究结论基本一致[8，9]。

国外研究证实，γ干扰素释放试验对潜伏性结核感染的诊断具有较高的敏感性和特异性[10]。为了更好地了解密切接触者的潜在结核感染风险，本研究经对密切接触者进行血IGRA检测后发现其阳性率高达46.7%。密切接触人员IGRA结果呈阳性提示其极可能是结核病的潜伏感染者，并且发展成结核病的可能性较普通人群明显更高[11，12]。对密切接触者进行密切关注并跟踪调查其结核病的患病可能性及发生发展，将更有助于做好结核病的防控工作。

IGRA试验中使用的结核分枝杆菌特异性抗原是编码结核分枝杆菌RD1区基因的抗原多肽。由于结合件RD1基因在BCG和绝大多数非结核分支杆菌的基因组中是缺失的，理论上可以避免上述在结核菌素试验中影响特异性的TST交叉抗原反应，能够较好地区分真性结核感染和BCG接种诱导的反应[13]。本研究IGRA试验在肺结核病菌阳性患者中的检测阳性率为95%，与国内部分学者研究结果一致[14，15]，明显高于 TST72.5%及 TB-AB45%的阳性率，IGRA在肺结核病菌阴性患者中的检测阳性率为82.5%，亦明显高于TST66.3及TB-AB33.8%的检测阳性率。综合本研究实验检测数据可见，IGRA确实可作为一项高敏感性且有极大价值的诊断实验，有效帮助临床提高对肺结核病尤其是菌阴肺结核病的诊断能力。因IGRA相较结核抗体，结核菌素试验而具有的更高敏感性及特异性，本文作者认为，当临床为排除结核感染，亦或为进一步支持鉴别诊断肺结核病，尤其是菌阴的肺结核病患者，该实验检测项目具有较大临床诊断参考意义，值得在临床推广应用，其实验结果可为结核病的防控治疗提供更详实精准的实验诊断支持。