鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白表达水平及其临床意义研究

李茉莉

(开封市中心医院检验科，河南 开封 475000)

流行病学研究证实，我国2010-2017年部分地区鼻咽癌的发病率可达273~593/10万人左右[1]。临床上鼻咽癌的发生，能够导致患者高肿瘤临床负荷的出现，导致患者总体生存时间和无瘤生存时间的下降[2]。

在揭示鼻咽癌的病情进展机制的过程中发现，肿瘤调控相关蛋白的表达异常，能够通过调控信号通路的活性，影响到癌细胞内的调控因子的浓度，进而影响到恶性肿瘤的病情进展速度。结肠癌转移相关基因 （Metastasis Associated In Colon Cancer 1，MACC1）的表达，能够通过提高细胞的迁移和转移能力，进而促进癌细胞的浸润和扩散[3]；丝裂原活化蛋白激酶的激酶4（Mitogen-activated protein kinase kinase，MKK4）的表达，能够通过对于丝裂原蛋白激酶的磷酸化修饰作用，进而调控ras信号通路的激活，降低癌细胞的增殖扩增速度[4]；磷酸化的需醇激酶 （phosphorylated inisotol requiling kinase，p-IRE1）的表达能够通过对于内质网的损伤，增加内质网的折叠障碍，进而促进癌细胞的病变过程[5]。 为了揭示 MKK4、MACC1、p-IRE1的表达与鼻咽癌的关系，本次研究选取2016年2月-2018年2月在我院接受治疗的鼻咽癌患者为研究对象，探讨了MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表达情况及与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 患者一般资料 选取2016年2月-2018年2月在我院接受治疗的鼻咽癌患者为研究对象。纳入标准：⑴成年者；⑵经手术病理确诊为鼻咽癌者；⑶无其他系统严重疾病者；排除标准：⑴合并其他部位原发肿瘤者；⑵临床资料不全者。根据纳入排除标准共纳入病例数100例，男75例，女25例，年龄 40～75 岁，平均 56.13±6.18 岁；鼻息肉组纳入排除标准：年龄≥18周岁，平素体健，无其他系统严重疾病者，共纳入100例，男60例，女40例，年龄42～72岁，平均56.18±5.97岁。两组患者的年龄和性别等一般资料比较无差别。

1.2 方法 所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基联苯胺(diamionben zidene，DAB)显色。MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白通用型二抗以及SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性及阴性对照，高倍显微镜下观察MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表达情况，具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

1.3 评价指标 观察两组患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达情况，比较不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的差异，分析影响鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的因素。

1.4 统计学处理 数据录入后，采用SPSS 11.5软件进行分析。计数和计量资料分别采用例和均数±标准差表示。鼻咽癌和鼻息肉患者、不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的比较采用卡方检验进行分析，采用Logistic回归分析法分析影响鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的因素。P＜0.05：差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达情况的比较 鼻咽癌组患者的MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达率高于鼻息肉组患者，MKK4蛋白阳性表达率低于鼻息肉组患者。见表1。

表1 两组患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达情况的比较

2.2 不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的比较 临床分期为Ⅲ期、分化程度为中、低分化、有淋巴结转移的鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达率较高，不同年龄、性别患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白阳性表达率无差别。见表2。

2.3 影响鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的因素分析 将单因素分析有意义的因素作为自变量，以患者MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白表达情况作为因变量，进行回归分析。结果临床分期和淋巴结转移进入回归方程。见表3。

3 讨论

EB病毒感染能够显著促鼻粘膜上皮细胞的病变，增加鼻咽癌的发生风险，特别是在合并有放射性射线接触的患者中，鼻咽癌的发生风险可进一步的上升[6，7]。现阶段临床上主要通过手术及放疗治疗鼻咽癌，但包括手术及术后放疗治疗后，鼻咽癌患者的临床病情缓解率仍然较低，治疗后的患者无进展生存期仍然无明显的改善[8，9]。而免疫靶向性治疗，能够在恶性肿瘤患者的辅助治疗过程中发挥重要作用，本次研究对于鼻咽癌患者体内的MKK4、MACC1、p-IRE1的表达分析研究，不仅能够深入揭示鼻咽癌的发生机理，同时还能够为鼻咽癌患者的免疫靶向性治疗提高参考靶点。

MACC1能够通过对于癌细胞生物学特征的影响，提高癌细胞的变形能力，促进癌细胞对于临近正常鼻粘膜组织的浸润。MACC1的上升还能够提高细胞间质成分的分解，为癌细胞的转移提供条件[10]；MKK4主要存在于细胞质和细胞核周边，其表达浓度的上升，能够通过抑制癌细胞上游转录活性，进而降低癌细胞纺锤体的复制和分裂速度，抑制癌细胞的持续性自我扩增。MKK4还能够通过对于诱导凋亡因子的调控，提高癌细胞的分化成熟能力，提高高分化细胞的比例[11]；p-IRE1是磷酸化的需醇激酶，其能够通过对于内质网折叠错误的影响，导致癌细胞内核转录基因NF-KB的激活，促进癌细胞DNA的持续性自我增殖过程[12]。

表2 不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的比较

表3 影响鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表达的因素分析

免疫组化的结果提示，在鼻咽癌患者中，MACC1及p-IRE1的表达阳性率明显的上升，高于良性鼻粘膜病变组织，差异较为明显，而MKK4蛋白的表达阳性率明显的下降，提示MKK4、MACC1、p-IRE1的异常表达均能够影响到鼻咽癌的病情进展过程。通过汇集不同的相关文献，笔者认为这主要与MKK4、MACC1、p-IRE1的下列几个方面的机理作用有关[13，14]：⑴MACC1的表达上升能够提高癌细胞的转移能力，促进癌细胞的扩散，而p-IRE1的上升能够提高NF-KB的激活程度，促进下游核转录因子的显著激活，从而促进了肿瘤细胞的增殖；⑵MKK4的表达缺失，导致癌细胞有分裂原蛋白激酶稳定性下降，导致癌细胞周期紊乱的发生。樊建雨等[15]研究者也通过免疫组化方式探讨了MACC1蛋白的表达情况，发现在鼻咽癌患者中，MACC1蛋白的表达阳性率可平均上升30%以上，特别是在合并有明显的高肿瘤负荷或者远期病死率较高的患者中，MACC1蛋白的表达阳性率可进一步的上升。在探讨相关指标与鼻咽癌患者临床病理特征的关系过程中发现，在发生了淋巴结转移、临床分期较晚或者癌细胞分化程度较差的患者中，MKK4的表达阳性率较低，而MACC1、p-IRE1的表达阳性率较高，提示了MKK4、MACC1、p-IRE1的表达与鼻咽癌患者的临床病理特征密切相关，这主要由于MKK4的表达缺失能够提高细胞的分化成熟障碍，导致低分化和中低分化的形成，并提高了癌细胞的粘附能力；而MACC1、p-IRE1的上升，能够提高癌细胞的侵袭能力，促进癌细胞的转移，增加了临床分期，同时二者的表达还能够提高癌细胞对于锁骨部位淋巴结组织的粘附能力，促进了癌细胞的淋巴结转移。最后，危险因素分析也可见，临床分期和淋巴结转移是影响到MKK4、MACC1、p-IRE1的表达的重要风险性因素，进一步提示了相关指标与鼻咽癌患者临床病情的密切关系。

综上所述，在鼻咽癌患者中，MKK4、MACC1、p-IRE1的表达与鼻咽癌患者的病情密切相关。后续临床相关研究可以继续探讨MKK4、MACC1、p-IRE1的表达与鼻咽癌患者临床预后的关系。