Livin与STAT-5在鼻咽癌中的表达及相关性研究

李树华 邓伟 王杰

鼻咽癌（NPC）是我国华南地区的高发疾病，其发病率高达50/10万，是最常见的头颈部恶性肿瘤之一[1]。肿瘤的发生、发展过程与细胞凋亡抑制有着密切的关系，已成为肿瘤研究的热点[2]。Livin作为近年来凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs）家族中新发现的重要成员而备受关注，在细胞凋亡中有较强的抑制作用[3]。信号转导和转录激活因子（signal transducers and activators of transcription,STAT）是一类影响基因转录的因子，其异常激活可促进细胞恶性转化和肿瘤发生[4]。STAT-5是该家族中重要的成员，具有信号转导和激活转录双重功能，可以调节细胞的增殖分化，参与肿瘤的发生发展过程[5]。研究发现，STAT-5在多种肿瘤细胞中均有表达[6]。目前，关于Livin与STAT-5在鼻咽癌组织中表达的相关性研究尚未发现。本文搜集2015年1月～2017年4月我院鼻咽癌及鼻咽炎患者的样本资料，采用SP免疫组化方法检测Livin与STAT-的表达情况，并探讨与相关临床病理学特征的相关性。

资料与方法

1临床资料

收集2015年1月～2017年4月就诊于我院门诊病理确诊的鼻咽癌患者（78例）及慢性鼻咽炎患者（135例）。所有鼻咽癌患者均经病理证实为鳞癌,且未行放疗和化疗等治疗。其中鼻咽癌患者：男性57例，女性21例，年龄18～72岁，中位年龄43岁；慢性鼻咽炎患者：男性115例，女性20例，年龄10～68岁，中位年龄38岁。根据2002年AJCC对鼻咽癌诊疗指南中分期标准，详细记录患者临床分期、T分期、淋巴结转移、复发情况。

2主要实验试剂

兔抗人Livin多克隆抗体（武汉博士德生物工程公司,货号：BA1743）、兔抗人STAT-5多克隆抗体（武汉博士德生物工程公司，货号：BA1411）、SP免疫组化染色即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒（福州迈新生物技术有限公司，货号：KIT-5001）；DAB显色剂（武汉博士德生物工程公司,货号：AR1021）。

3主要步骤

所有标本均经10%甲醛固定24小时，常规石蜡包埋，4μm连续切片，脱蜡，染色前用微波炉进行抗原修复，PBS冲洗，DAB显色，苏木精复染，操作严格按照说明书进行。

4结果判断标准

采用双盲法阅片，与1位病理医师一起独立观察每张切片中随机5个不重叠的视野。评分及阳性判断标准[7，8]：①按着色强度：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分；②按阳性细胞比例：＜5%为 0分，5%～25%为 1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；两项相乘，0～1分为阴性，2～4分为弱阳性，5～8分为中度阳性，9分以上为强阳性。

5统计学处理

采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，该实验数据为定性资料，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1Livin蛋白与STAT-5蛋白均主要表达于胞质中（图 a、b、c、d）。Livin蛋白在鼻咽癌组组中阳性表达率为64.10%，在鼻咽炎组织中阳性表达率为22.22%，两组比较有显著差异（P＜0.01）；STAT-5蛋白在鼻咽癌组组中阳性表达率为66.67%，在鼻咽炎组织中阳性表达率为20.00%，两组比较有显著性差异（P＜0.01）（见表 1）。

图a Livin蛋白在鼻咽癌组组中表达（sp*400）

图b Livin蛋白在鼻咽炎组组中表达（sp*400）

图c STAT-5蛋白在鼻咽癌组组中表达（sp*400）

图d STAT-5蛋白在鼻咽炎组织中的表达（sp*400）

表1 Livin与STAT-5在鼻咽癌组织及鼻咽炎组织中的表达

2Livin与STAT-5在鼻咽癌组组中表达水平与临床病理特征的关系

Livin与STAT-5在鼻咽癌组织中的蛋白表达与年龄、性别差异无统计学意义，（P＞0.05）,而与肿瘤的临床分期、T分期、淋巴结转移、复发差异有统计学意义（P＜0.05）（见表 2）。

表2 Livin与STAT-5在鼻咽癌组织中表达与临床病理参数间的关系

3Livin与STAT-5在鼻咽癌组织中表达呈正相关（χ2=41.302，r=0.552）。（见表 3）

表3 Livin与STAT-5蛋白在鼻咽癌组组中表达的相关性分析

讨论

鼻咽癌（NPC）在我国恶性肿瘤死亡疾病谱中位于14位[9]。目前国内外对鼻咽癌的治疗手段主要包括放疗、化疗、分子靶向治疗、挽救性手术治疗等[10]。其中放射性治疗被公认为鼻咽癌的首选治疗，5年生存率达80%以上[11]。局部未控或远处转移是鼻咽癌患者死亡的主要原因，困扰着医务人员及患者[12]。因此,探索精准的靶向治疗，提高NPC患者的治愈率，增加预后效果，延长远期生存期已经成为一种趋势。

Livin是凋亡抑制蛋白 (Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族中新发现的重要成员之一，具有较强的凋亡抑制作用。在胚胎组织中存在高表达，而在正常成年人的大部分组织中呈现低表达或不表达[13]。研究发现，在多种恶性肿瘤细胞中呈现高表达，与胃癌、食管癌等发生、发展密切相关[14，15]。目前认为,Livin主要依赖两个途径：一是通过与天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）蛋白结合，阻断Caspase途径介导的级联反应，从而抑制细胞凋亡[16]；二是Livin通过激活Janus激酶1和Janus激酶2（JNK1和JNK2），进一步激活 TAKI/JNK1信号传导途径，从而起到凋亡抑制的作用[17]。

STAT-5是信号转导和转录激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT）家族中重要的成员之一，被认为是细胞增殖促进因子和凋亡抑制因子。研究发现，STAT-5包含两个蛋白结构基本相同的亚型：STAT-5a和 STAT-5b[4]。STAT-5的激活主要经JAK2途径，它的异常激活和过度表达均可诱导细胞恶性转化和肿瘤的发生[18]。在肿瘤微环境中，许多恶性肿瘤细胞都发现STAT-5的异常表达，如：白血病、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌等[8，19]。

通过查阅文献，尚无关于Livin与STAT-5在鼻咽癌中的表达研究报道。本文从蛋白水平研究Livin与STAT-5在鼻咽癌组织表达及与临床病理学参数的关系，现分析如下：①Livin蛋白与STAT-5蛋白在鼻咽癌组组中呈高表达，在鼻咽炎组织中呈低表达；②Livin与STAT-5在鼻咽癌组织中的蛋白表达与年龄、性别无明显相关性，与肿瘤临床分期、T分期、颈部淋巴结转移、远处转移、复发等特征有相关性；③Livin与STAT-5在鼻咽癌组中表达呈正相关。综上说明，Livin与STAT-5共同参与鼻咽癌的发生、发展过程，这可能是通过Livin激活JNK2，导致STAT-5异常活化，促进肿瘤的发生、发展、浸润、转移等。

综上所述，肿瘤细胞的凋亡与鼻咽癌发生、发展等密切相关，而肿瘤细胞的凋亡抑制，是导致放化疗不敏感或耐受的原因之一。研究表明，Livin与STAT-5有望作为鼻咽癌新的治疗靶点。此后可通过研发新型药物抑制Livin与STAT-5蛋白表达，达到促进肿瘤细胞凋亡目的，提高鼻咽癌的治愈率，为鼻咽癌治疗的提供新思路。此后我们将继续扩大研究样本数量以及患者远期生存率研究，以便更好的评估Livin与STAT-5表达对鼻咽癌发生、发展及预后的意义和应用价值，为临床和科研工作提供更为精确的理论依据。