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瓜蒌薤白配伍抗凝血作用的研究

2018-12-04邹纯才吕文雅周雨婷鄢海燕

通化师范学院学报 2018年12期
关键词:抗凝血凝血酶原薤白

邹纯才,吕文雅,周雨婷,鄢海燕,陈 华,江 荟

瓜蒌为葫芦科植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)或双边栝楼(Trichosanthes rosthornii Harms)的干燥成熟果实,有宽胸散结之功效[1].现代药理研究表明,瓜蒌具有增加冠脉流量、改善心肌缺血、抗血小板聚集等药理活性,用于心血管疾病的预防与治疗[2,3].

薤白为百合科植物小根蒜(Allium macrostemon Bge)主要生长在高海拔地带,如吉林省长白山地区的薤白就比较多见.薤白(Allium chinense G.Don)的干燥鳞茎,用于胸痹心痛,脘腹痞满胀痛,泻痢后重[1].薤白具有增强免疫力、保护心肌组织、降脂、抗氧化、扩张血管、抑制凝血和抗血栓等多种药理作用[4].薤白为病症引经药,在治疗胸闷、气短、心悸等心阳不通时加入薤白能引药归心经[5].

瓜蒌薤白配伍使用源自于张仲景的《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治》篇.有关瓜蒌薤白配伍抗凝血的研究少有报道.为此,本课题通过对瓜蒌、薤白及其配伍抗小鼠凝血效果的研究,探讨薤白对瓜蒌抗凝血效果的影响,以期为瓜蒌薤白配伍抗血栓及其机制的深入研究奠定基础.

1 材料与仪器

1.1 仪器

EXTECH 365515型电子秒表(上海仪博仪器有限公司);HH-6数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司);JW-2017HR高速冷冻离心机(安徽省嘉文仪器装备有限公司);FD5-series freeze dryer(sim international group).

1.2 试药

瓜蒌、薤白(河北安国市御颜坊中药材公司,批号均为:20170501);复方丹参滴丸(天津天士力制药股份有限公司,27mg/丸,批号:20170411);水合氯醛(上海谱振生物科技有限公司,批号:20160404);活化部分凝血活酶时间测试盒(液体白陶土)(批号:20180327,南京建成生物工程研究所)、凝血酶原时间(PT)测定试剂盒(批号:20180327,南京建成生物工程研究所);其余试剂为分析纯.

1.3 实验动物

清洁级昆明小鼠,体重17~20g,雌雄各半,由南京青龙山动物养殖场提供,合格证号:SCXK(苏)2017-0001.

2 方法

2.1 溶液的制备

(1)瓜蒌溶液的制备.取瓜蒌适量,按料液比1∶10(g/mL)加水回流提取2次,每次1h,合并提取液并减压回收溶剂,得浸膏(相对密度1.20),用80%乙醇醇沉后放置36h,取上清液并减压回收溶剂得浸膏,冷冻干燥24h得瓜蒌提取物.瓜蒌提取物用水溶解,制备瓜蒌溶液备用.

(2)薤白溶液的制备.取薤白适量,按上文溶液的制备方法制备薤白溶液备用.

(3)瓜蒌薤白溶液的制备.取瓜蒌、薤白,按1.5∶1(g∶g)配伍,取配伍后的瓜蒌薤白适量,按上文溶液的制备方法制备瓜蒌薤白溶液备用.

2.2 给药剂量及实验分组

每个测定指标取小鼠110只,随机分为11组:空白组、复方丹参滴丸组(参照复方丹参滴丸说明,按成人60kg给药0.81g计,小鼠给药剂量为:0.12g/kg,阳性对照组)、瓜蒌组(参照《中国药典》2015年版,按成人60kg给予瓜蒌提取物0.9g计,小鼠低、中、高剂量组为:0.15g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg),薤白组(参照《中国药典》2015年版,按成人60kg给予薤白提取物0.6g计,小鼠低、中、高剂量组为:0.1g/kg、0.5g/kg、1.0g/kg),瓜蒌薤白组(参照《中国药典》2015年版,按成人60kg给予瓜蒌薤白提取物1.5g计,小鼠低、中、高剂量组为:0.25g/kg、1.5g/kg、3.0g/kg),每组10只,空白组给予纯水,各组每日灌胃一次,灌胃容量0.5mL/20g,连续灌胃7d.

2.3 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠出血时间(bleeding time,BT)的影响

小鼠于末次给药前12h,禁食不禁水,末次给药1h后,固定小鼠,于小鼠尾尖3mm处切断并计时,每隔30s用滤纸检一次至出血停止为BT[6].

2.4 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠凝血时间(clotting time,CT)的影响

小鼠于末次给药前12h,禁食不禁水,末次给药后1h,用玻璃毛细管插入小鼠内眦静脉丛至血柱达5cm后计时,每隔30s折断一小段至出现血凝丝的时间即为 CT[6].

2.5 凝血酶原时间(prothrombin time,PT)的测定

小鼠于末次给药前12h,禁食不禁水,末次灌胃1h后,摘眼球取血,枸橼酸钠抗凝,摇匀,1000r/min离心15min制备血浆,按试剂盒的方法测定.

2.6 活化部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time,APTT)的测定[6]

血浆制备同“2.5”,按试剂盒方法测定.

2.7 统计学方法

实验数据以均值±标准差(xˉ±s)表示,用SPSS 11.5软件进行统计学处理.组间数据比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为差异有显著性.

3 结果

3.1 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠BT、CT的影响

按“2.3”的方法分别测定瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠凝血及出血时间、凝血酶原时间和活化部分凝血酶原时间的影响.结果见表1.

与空白组比较,复方丹参滴丸组及各给药组均可延长小鼠BT时间(P<0.01);除薤白组外,复方丹参滴丸组及各给药组均可延长小鼠CT时间(P<0.01).与同剂量的瓜蒌薤白组比较,瓜蒌组及薤白组在延长小鼠BT时间上无统计学意义.瓜蒌薤白组在延长小鼠CT时间上明显优于同剂量薤白组,且中、低剂量组有显著性差异(P<0.01).

表1 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠BT、CT的影响(xˉ±s,n=10)

3.2 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠PT、APTT的影响

按“2.4”“2.5”和“2.6”的方法,分别测定瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠凝血及出血时间的影响、凝血酶原时间和活化部分凝血酶原时间.结果见表2.与空白组比较,复方丹参滴丸组及各给药组均可延长小鼠PT时间(P<0.01);复方丹参滴丸组及各给药组均可延长小鼠APTT时间(P<0.01).与同剂量的瓜蒌薤白组比较,瓜蒌组在延长小鼠PT及APTT时间上无统计学意义.瓜蒌薤白组在延长小鼠PT时间上明显优于同剂量薤白组,且中、低剂量组有显著性差异(P<0.01);瓜蒌薤白组在延长小鼠APTT时间上明显优于同剂量薤白组,且高、低剂量组有统计学意义(P<0.01或P<0.05).

表2 瓜蒌、薤白及瓜蒌薤白配伍对小鼠PT、APTT的影响(xˉ±s,n=10)

4 讨论

目前,临床常用的抗血小板药物主要有:阿司匹林、氯吡格雷、阿昔单抗等[6],但不良反应较多[7],作用机制单一,部分人群对阿司匹林和氯吡格雷抵抗或反应性低.为此,寻找高效安全的抗血小板药物仍为各国研究者关注的重点.

刘岱琳等利用体外抗血小板聚集的活性测试体系对从瓜蒌中分离出的化合物进行了测定,证实了瓜蒌中存在抗血小板聚集物质,如腺苷等[3].本实验结果也证明了瓜蒌的抗凝血作用.本实验结果表明,瓜蒌由低剂量到中剂量呈现一定的量效关系,但当达到高剂量后,BT、CT、PT、APTT四项指标均未延长.

现有文献表明,薤白具有抑制凝血和抗血栓等多种药理作用.本实验结果证实,薤白由低剂量到高剂量呈现量效关系.

本实验在探讨瓜蒌、薤白两味药单独使用抗凝血作用的基础上,进一步研究了瓜蒌薤白配伍的抗凝血作用.瓜蒌薤白按1.5∶1配伍后其抗凝效果低剂量到中剂量呈现一定的量效关系,但当达到高剂量后,BT、CT、PT、APTT四项指标均未延长.与同剂量瓜蒌薤白组比较,瓜蒌组无统计学意义;瓜蒌薤白组在延长小鼠CT时间上明显优于同剂量薤白组,且中、低剂量组有显著性差异(P<0.01).瓜蒌薤白组在延长小鼠APTT时间上明显优于同剂量薤白组,且高、低剂量组有统计学意义(P<0.01或P<0.05).

综上所述,瓜蒌、薤白均具有抗凝血作用,瓜蒌薤白配伍的抗凝血作用以瓜蒌为主,薤白为辅.

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