大枣果醋的镇静、催眠及抗焦虑作用

高佳琪 于泽鹏 刘 聪 朱 阔 刘佳乐 蒋维海 王春梅 孙靖辉 陈建光 李 贺

(北华大学药学院药理教研室，吉林 吉林 132013)

研究表明，老年人的失眠发病率为49.9%，有10%～27%的老年人依赖催眠药维持正常睡眠〔1，2〕。尽管应用催眠药可暂时性缓解睡眠障碍，但长期应用可导致依赖、作用丧失和药源性失眠，停药时还会产生反跳性失眠和梦魇。因此，研发促睡眠功效明确、无明显不良反应的保健食品已成为人们研究的热点。尤其是研发药食同源的保健食品更受到人们青睐。大枣，系鼠李科枣属植物枣的果实，是家喻户晓的健康食品。药王孙思邈曾在《千金方》中写道“大枣葱白汤”专治心烦失眠。日本研究报道，从大枣提取物分离到一种黄酮-双-葡萄糖甙的混合物，药理实验证明其具有镇静催眠作用〔3，4〕。果醋以其良好的风味、独特的口感及有效的保健功能已逐渐受到消费者广泛关注。本研究以大枣果醋为研究对象，观察其镇静、催眠及抗焦虑作用。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康ICR雄性小鼠，体重(20±2)g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，实验动物生产许可证号SCXK(吉)：2016-0003。小鼠采取分笼饲养，分笼后放于安静、温湿度适宜、通风良好的环境中，自由饮水，合理摄食，适应所处环境1 w后开始实验。

1.2实验材料与药品 大枣果醋由北华大学五味子开发及产业化工程研究中心提供；戊巴比妥钠(批号：090919)为北京化学试剂公司产品；小鼠γ-氨基丁酸(GABA)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、谷氨酸(Glu)ELISA试剂盒为美国GBD公司产品。

1.3仪器与设备 YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪和小动物行为学系统(成都太盟科技有限公司)；全自动酶标仪(瑞士Tecan集团)。

1.4实验方法

1.4.1动物分组及处理 将雄性ICR小鼠随机分为5组，每组10只，空白对照组(灌胃给予蒸馏水)；地西泮组(①自主活动实验给予小鼠地西泮2 ml/kg；②协同戊巴比妥钠阈/阈下剂量促睡眠实验及EMP焦虑小鼠行为学实验给予小鼠地西泮4 ml/kg)，Jv低剂量组(灌胃给予Jv 2.125 ml/kg)；Jv中剂量组(灌胃Jv 4.250 ml/kg)；Jv高剂量组(灌胃给予Jv 8.500 ml/kg)，各给药组分别每天给药灌胃1次，连续给药7 d。

1.4.2Jv对小鼠自主活动的影响 将各组小鼠于末次灌胃给药30 min后，分别置于自主活动记录仪中，适应5 min后开启自主活动仪，测定5 min内各小鼠自主活动次数和站立次数。

1.4.3Jv协同阈下剂量戊巴比妥钠对小鼠的影响 末次灌胃给药30 min后，各组小鼠腹腔注射37.5 mg/kg的戊巴比妥钠，观察并记录30 min内翻正反射消失1 min以上的实验小鼠只数。

1.4.4Jv协同阈剂量戊巴比妥钠对小鼠的影响 于末次灌胃给药30 min后，各组小鼠腹腔注射49.5 mg/kg的戊巴比妥钠，观察30 min内翻正反射消失1 min以上的实验小鼠数，观察并记录各组小鼠潜伏期及睡眠时间。

1.4.5Jv对高架十字迷宫(EPM)焦虑小鼠行为学的影响 末次给药30 min后，将小鼠从中央格面向闭合臂放入迷宫。记录并计算5 min内小鼠进入开放臂次数比例(OE%)，开放臂停留时间比例(OT%)。

1.4.6Jv对小鼠脑组织GABA和Glu含量的影响 各组小鼠连续灌胃给药7 d，于末次给药后30 min，处死小鼠，取出脑组织，应用生物素双抗体夹心ELISA测定脑组织GABA和Glu含量并计算二者比值。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析及t检验。

2 结 果

2.1Jv对小鼠自主活动的影响 与空白对照组相比较，地西泮和Jv高剂量组小鼠自主活动和站立次数明显减少(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2Jv协同阈下剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠只数的影响 与空白对照组(1只)相比较，地西泮(9只)和Jv低、中、高剂量组(4只，5只，5只)均能明显增加睡眠小鼠只数。

2.3Jv协同阈剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠时间和睡眠潜伏期的影响 与空白对照组相比较，地西泮和Jv高剂量组小鼠睡眠潜伏期明显缩短，睡眠时间明显延长(P<0.05，P<0.01)，Jv低、中、剂量组差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.4Jv对EPM焦虑小鼠行为学的影响 与空白对照组比较，Jv中剂量组小鼠OE%明显升高(P<0.05)；地西泮和Jv高剂量组小鼠OE%、OT%明显升高(P<0.05或P<0.01)，见表3。

2.5Jv对小鼠脑组织中GABA和Glu含量的影响 与空白对照组比较，Jv高剂量组小鼠脑组织中Glu含量明显下降，GABA含量和GABA/Glu明显升高(P<0.05，P<0.01)，Jv中剂量组GABA/Glu明显升高(P<0.05)，见表4。

表1 大枣果醋对小鼠自主活动的影响次)

与空白对照组比较：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表2 Jv协同阈剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠时间和睡眠潜伏期的影响

表3 Jv对EPM焦虑小鼠OE%和OT%影响

表4 Jv对小鼠脑组织GABA和Glu含量的影响

3 讨 论

大枣在现代安神方剂中被广泛应用，如酸枣仁汤、甘麦大枣汤、黄连阿胶汤、镇惊定志汤〔5～7〕，但未见大枣果醋镇静催眠方向的相关报道，本实验所用大枣果醋由北华大学五味子开发及产业化工程研究中心经醋酸菌发酵制得，色泽清澈、透明、有光泽，无刺激性气味，口感协调，甜酸适度。小鼠自主活动实验是评价中枢神经系统兴奋状态的一项重要指标。大脑皮层兴奋性与小鼠自主活动次数呈正相关〔8～10〕。本实验结果显示大枣果醋可减少小鼠自主活动次数，提示大枣果醋具有一定的镇静作用。

通过观察受试药对巴比妥类药物诱导睡眠的影响，是观察药物催眠作用的经典方法〔11，12〕。本实验结果表明，大枣果醋能有效增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠只数，缩短阈剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期、延长睡眠时间，提示Jv具有明显的催眠作用。

高架十字迷宫是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧心理，形成动物的矛盾行为，是国际通用的抗焦虑实验方法〔13〕，实验以OE%及OT%为指标来反映动物的焦虑程度，OT和OE增大则表明药物具有抗焦虑效应〔14〕。本研究结果表明，大枣果醋可增加小鼠的OT%和OE%，提示其具有一定的抗焦虑作用。GABA作为抑制性神经递质能结合抗焦虑的脑受体并使之激活，阻止焦虑相关信息抵达大脑中枢，从而达到抗焦虑及镇静催眠的效果〔15～17〕。Glu作为兴奋性神经递质的作用是与膜后受体结合，产生兴奋性突触后电位〔18〕。兴奋性突触后电位加大到一定程度时，就导致突触后神经元产生扩布性兴奋，传到整个突触后神经元，使机体处于兴奋状态〔19，20〕。本实验结果表明，大枣果醋可增加小鼠脑组织GABA含量，增加GABA/Glu比值，提示大枣果醋的镇静催眠作用与其调节GABA和Glu含量有关。综上，大枣果醋对小鼠具有镇静催眠及抗焦虑作用，该作用可能与其提高脑内GABA含量，降低Glu含量有关。