环指蛋白181在乳腺浸润性导管癌中表达及其临床意义

王 磊 张 珉 王旭光 王翠芳 张 玲

(沈阳医学院基础医学院病理教研室，辽宁 沈阳 110034)

环指蛋白(RN)181又称HSPC238，属于RN超家族成员，具有RING型结构域及E3泛素链接酶活性。在肝癌、弥漫大B细胞淋巴瘤等多种肿瘤中，RN181可分别通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路或泛素化途径调控肿瘤的进展。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤〔1，2〕，其中以浸润性导管癌为最常见病理类型，RN181在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床病理意义目前尚无报道。本研究探讨RN81在浸润性导管癌发生、发展过程中发挥的作用及其临床诊断意义。

1 材料与方法

1.1临床资料 2015年1月至2015年12月经病理确诊的女性乳腺浸润性导管癌标本79例，另选取36例经病理确诊的乳腺增生组织为对照。浸润性导管癌术前均未行放疗、化疗及内分泌治疗。79例乳腺癌标本中，年龄25～82岁，平均52.8岁，组织学分级参考诺丁汉联合组织学分级；分子分型：luminalA型〔雌激素受体(ER)+和(或)孕激素受体(PR)+和人表皮生长因子受体(HER)2-〕28例，luminalB型〔ER+和(或)PR+和HER2+〕30例，HER2过表达型(ER-，PR-和HER2+)10例，三阴型(ER-，PR-和HER2-)11例。

1.2试剂 鼠抗人RN181单克隆抗体(购自美国Santa cruz公司)，ElivisionTM Plus即用型免疫组化试剂盒(鼠/兔)、磷酸盐缓冲液(PBS)、内源性过氧化物酶阻断剂、动物非免疫血清(羊)等均购自福州迈新生物开发有限公司。

1.3方法 标本均经包埋，制成4 μm厚切片。标本均在同一条件下进行免疫组织化学染色，具体步骤如下：经脱蜡，脱苯，水化后，首先用3%的过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性，高温高压修复抗原，然后使用RN181一抗(1∶600)4℃湿盒内孵育过夜，次日按Elivision试剂盒说明书进行染色，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染。PBS代替一抗。

1.4结果判定 免疫组化结果采用双盲法由两位病理医师进行评定。判定标准：每张切片在高倍镜下随机选取10个视野(×400)，随机计数100个细胞。根据染色强度(0，没有染色；1，浅黄色；2，棕色；3，深棕色)及着色比例0分(阴性着色)；1分(阳性细胞数1%～10%)；2分(阳性细胞数11%～50%)；3分(阳性细胞数51%～80%)；4分(阳性细胞数81%～100%)，两项计分相乘即为最终得分(0～12分)。得分<6分为低表达，≥6分为高表达。

1.5统计学分析 采用SPSS22.0统计软件进行χ2检验或Fisher确切概率法分析。

2 结 果

2.1免疫组织化学染色结果 RN181的表达主要位于胞质，见图1。79例乳腺癌组织中36例(46%)低表达，36例乳腺增生组织中30例(83%)高表达；二者差异显著(P=0.003)。在淋巴结转移中的表达低于未转移(P=0.000)，RN181在乳腺浸润性导管癌中的表达与年龄(P=0.918)、肿瘤直径(P=0.817)、组织学分级(P=0.150)均无明显相关性，见表1。

2.2RN181在乳腺癌不同分子分型中的表达及其关系 RN181在各分子分型中的组间表达率存在差异性(P=0.001)，luminalB型中RN181高表达低于其他3种亚型。见表2。

图1 RN181免疫组织化学染色Elivision法结果(×400)

表1 RN181的表达与临床病理指标之间的关系〔n(%)〕

表2 RN181的表达与乳腺癌分子分型的关系〔n(%)〕

与luminalA相比：1)P<0.001；与luminalB相比：2)P<0.05

3 讨 论

RN181是由人类基因LOC51255编码的含有153个氨基酸的小分子蛋白，RN家族成员与肿瘤发生密切相关〔3，4〕，具有E3泛素蛋白连接酶活性，并可与血小板整联蛋白aⅡbβ3的KVGFFKR结构域相结合〔5〕。整联蛋白相关信号通路与泛素化途径在多种肿瘤组织中发挥调控作用〔6～8〕，而RN181可能将二者结合在一起共同调控肿瘤进展。现有研究报道RN181在不同肿瘤进展过程中发挥不同作用。在直肠癌的研究中，沉默RN181蛋白可激活MAPK/ERK信号通路促进SW480细胞增殖〔9〕。RN181在肝癌组织中表达低于癌旁，通过抑制ERK/MAPK信号通路抑制肝癌细胞增殖，而干扰肝癌细胞中的RN181后可以解除增殖抑制，提示RN181具有抑制肝细胞癌生长的作用〔10，11〕。Tan等〔12〕发现RN181通过泛素-蛋白酶体途径与血红素加氧酶(HMOX)1，核糖体蛋白(RP)S27A，泛素B和金属硫蛋白(MT)2A这4种蛋白相互作用发挥肿瘤抑制作用〔12〕。RN181作为E3泛素连接酶通过抑制核因子(NF)-κB信号通路抑制弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的生长〔13〕，由此可见，RN181在肿瘤的调控中可能发挥抑癌作用，其具体分子机制尚需深入研究。本研究结果提示，RN181在浸润性导管癌中可能发挥抑癌作用，但其具体分子机制尚需进一步研究。

乳腺癌具有高度异质性〔14～17〕，Peroul等〔18〕最先提出了乳腺癌分子分型的概念，其将乳腺癌分为5种亚型：管腔A型〔luminalA：ER+和(或)PR+和HER2-〕，管腔B型〔luminalB：ER+和(或)PR+和HER2+〕，HER2+型(ER-，PR-和HER2+)，基底样型(BLBC)及其他。根据分子分型制定乳腺癌局部及全身治疗策略十分重要。一方面，乳腺癌的分子分型能充分反映其生物学行为，明确个体分子的特征，为乳腺癌患者判断预后及个体化治疗提供基础，对于luminal型患者手术治疗可提前，内分泌治疗是基础〔19〕。因此寻找luminal型的敏感、特异性指标显得尤为重要。另一方面，在2011年St.Gallen国际乳腺癌会议上在原有分子分型指标上新加入了KI67，在2013年St.Gallen国际乳腺癌会议上又将KI67的比例进行调整〔20〕。由此可见乳腺癌的分子分型在不断细化，但目前的分子分型标志物仍然具有局限性，尚不能完全满足诊治需求。本实验提示RN181在luminalB型中可能为特异性低表达，可能作为新的乳腺癌分子分型特异性标志物，具体分子机制有待进一步研究。