尼极藏茶对诱导睡眠的影响

郭肖 公保索安 增太措 吾坚旦增 吉毛才让 罗多文色 李先加 多杰 李啟恩

(青海大学 1藏医药研究中心，青海 西宁 810016；2藏医学院；3藏药新药开发国家重点实验室)

失眠主要由心理、药物、疾病及环境等因素引起，其典型特征表现为入睡困难、睡眠不深和睡眠时间不足，严重失眠者不仅会表现出以上典型特征，而且甚至会导致彻夜不眠。失眠虽不能直接威胁生命，但可导致抑郁、焦虑及机体多功能受损，诱发糖尿病等代谢性疾病、免疫性疾病、心血管疾病和神经性疾病等多种慢性和重大疾病，并影响疾病预后。失眠治疗以减少患者痛苦、改善生活质量、降低机体功能受损和减少抑郁、焦虑、糖尿病和心血管病风险为目标〔1～6〕。

失眠在藏医学中称为“尼业”，是藏医学“三因”中的“隆”因过盛和功能紊乱而导致，反过来，失眠作为藏医学饮食、起居、时令和心理等“四大病因”之一的起居因素的重要内容，会进一步加重“隆”因的病变，引发“隆”病，而“隆”病的发生会诱发包括心血管系统疾病和精神性疾病在内的各类疾病〔7〕。因此，藏医学在失眠的临床治疗中特别注重对“隆”的调理和正常睡眠时间的要求。尼极藏茶以藏医治疗“隆”病和改善睡眠的药性理论出发，选用藏民族民间有食用习惯的药食同源植物窄叶鲜卑花和宽叶荨麻为原料药材进行炮制加工和配伍而成，具有良好的改善睡眠和调和“隆”病的作用〔7～10〕。本研究旨在通过动物实验验证尼极藏茶改善睡眠的功效。

1 资料与方法

1.1材料

1.1.1尼极藏茶的制备 100目尼极藏茶(窄叶鲜卑花和宽叶荨麻1∶1，炒制)100 g，料液比1∶10，浸泡2 h，热回流130℃提取3次，3 h/次，抽滤，合并滤液，浓缩干燥，计算得率(9.241±1.842)%。

1.1.2实验动物 SPF级KM小鼠，雄性，9周龄，体重(45±2)g。购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，合格证号：SCXK(京)2016-0002，饲养条件为温度(21±1)℃，相对湿度(60±5)%，适应性生长1 w，实验期间小鼠自由进食和饮水。

1.1.3其他实验材料 戊巴比妥钠和巴比妥钠均为分析纯，购于上海化学试剂公司。地西泮片(1.25 mg/片)，济宁市安康制药有限责任公司。

1.2实验方法

1.2.1一般观察 每天观察小鼠的毛色状况、行为表现及精神状况，分析有无异常，并在各项实验前后称重，观察体重变化情况。

1.2.2不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠发生率和睡眠时间的影响 雄性KM小鼠60只，随机分为6组，每组10只。分别按25、30、35、40、50、60 mg/kg的梯度剂量给小鼠腹腔注射戊巴比妥钠溶液，然后测定不同剂量下戊巴比妥钠对小鼠睡眠发生率和睡眠时间的影响。

1.2.3不同剂量尼极藏茶对小鼠直接睡眠的影响 50只KM小鼠，按体重随机分为5组，每组10只，分别为生理盐水组(等体积生理盐水)，地西泮组(地西泮片10 mg/kg，1.25 mg/片)，尼极藏茶低、中、高剂量组(200 mg/kg、450 mg/kg、1 000 mg/kg)。灌胃不同药物溶液，1次/d，0.1 ml/20 g，连续给药66 d。实验期间记录每日小鼠摄食量，且每2 d称量体重 1 次，摄食饮水自由，观察给药后小鼠是否出现睡眠现象，小鼠是否进入睡眠以翻正反射消失为依据指标，如超过1 min不能翻正则认为翻正反射消失，确认小鼠进入睡眠。翻正反射恢复则认为动物觉醒，从翻正反射消失到最终恢复这段时间被认为是小鼠的睡眠时间，记录各组入睡小鼠的数量及睡眠时间长短。睡眠潜伏期计算方法是入睡时间减去注射时间，睡眠时间的计算方法是睡眠结束时间减去入睡时间。

1.2.4不同剂量尼极藏茶对戊巴比妥钠阈上剂量小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响 参照1.2.3分组及给药末次给药1 h后腹腔注射54 mg/kg戊巴比妥钠，并记录戊巴比妥钠注射时间、小鼠入睡时间、小鼠睡眠结束时间，以观察尼极藏茶和戊巴比妥钠联和用药对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的作用。

1.2.5不同剂量尼极藏茶对戊巴比妥钠阈下剂量小鼠睡眠率的影响 参照1.2.3分组及给药末次给药1 h后腹腔注射32 mg/kg戊巴比妥钠，记录各组入睡动物数，观察尼极藏茶对戊巴比妥钠阈下剂量小鼠睡眠发生率的影响(睡眠发生率=入睡动物数/受试动物数×100%)。

1.2.6不同剂量尼极藏茶对巴比妥钠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响 参照1.2.3分组及给药末次给药后30 min，给每组小鼠按250 mg/kg腹腔注射巴比妥钠，并记录注射催眠剂量巴比妥钠后各组小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间。

1.3统计学处理 采用SPSS19.0软件进行方差分析和χ2检验。

2 结 果

2.1受试物对小鼠体重的影响 各组实验中，每个剂量组小鼠的毛色、行为及精神状况均无异常。各组灌胃前体重、摄食量比较无显著差异(P>0.05)。 见表1。

表1 各组灌胃前后体重、体重摄食量比较

2.2不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠发生率和睡眠时间的影响 戊巴比妥钠最佳剂量(阈剂量)的确定以实验小鼠100%进入睡眠，且入睡时间不超过90 min为标准，本实验确定的阈剂量为50 mg/kg。戊巴比妥钠的最大阈下剂量为80%～90%小鼠翻正反射不消失的镇静剂量，本实验最终确定的最大阈下剂量为32 mg/kg。见表2。

表2 不同剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠发生率和睡眠时间的影响

2.3尼极藏茶对小鼠直接睡眠的影响 3个剂量的藏茶连续灌胃66 d，各组翻正反射仍未消失，表示尼极藏茶对受试小鼠无直接睡眠作用。

2.4尼极藏茶协同阈剂量戊巴比妥钠对睡眠潜伏期和睡眠时间的影响 与生理盐水组比较，地西泮组睡眠潜伏期明显缩短，睡眠时间明显延长(P<0.05,P<0.01)；藏茶各剂量组睡眠潜伏期缩短不明显(P>0.05)，但其中、高剂量组睡眠时间显著延长(P<0.05,P<0.01)。与地西泮组比较，尼极藏茶高剂量组表现出相同的延长睡眠时间的作用。见表3。

表3 尼极藏茶协同阈剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响

2.5尼极藏茶对戊巴比妥钠阈下剂量诱导小鼠催眠作用的影响 与对照组(0%)比较，尼极藏茶低、中、高剂量组睡眠发生率提高(20%、40%、40%)；与地西泮组(80%)比较，尼极藏茶对戊巴比妥钠阈下剂量诱导小鼠催眠发生率较低，即尼极藏茶对阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生有促进作用。

2.6尼极藏茶对巴比妥钠诱导小鼠睡眠作用的影响 与生理盐水组相比，地西泮组、尼极藏茶各剂量组睡眠潜伏期均明显缩短，且睡眠时间显著延长(P<0.05)。与地西泮组相比，尼极藏茶高剂量组对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间无显著差异(P>0.05)。见表4。

表4 尼极藏茶对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响

3 讨 论

失眠不仅是一种疾病，而且是引发藏医学被认为可诱发一切疾病的“隆”病的重要因素〔7〕。随着社会的发展和生活节奏的加快及随之而来的生活压力日趋增大、社会老龄化现象不断加剧和社会关系日趋冷淡等社会现实问题，导致越来越多的人患有失眠症〔3，4，11〕，轻则导致人们生活质量下降、身心疲惫、记忆力减退和脾气暴躁等症状，重则出现机体免疫和代谢功能紊乱，甚至会诱发心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病等慢性重大疾病〔3～5，11〕。

藏医学一向关注睡眠方法和质量，在藏医经典《四部医典》之起居章中明确记载：常人每晚必须保证足够的睡眠，如果因熬夜而缺了睡眠，次日早晨须在空腹状态下补足睡眠，补睡时间为正常晚间睡眠时间的一半为宜，尤其是对醉酒者、身体虚弱者、受到精神和心理创伤者、过度劳累者、说话过多者和老龄群体等必须确保足够的睡眠，否则会使机体功能受到严重损害，诱发藏医“隆”病及上述各类疾病〔7〕。尼极藏茶是在藏医理论指导下，以调和“隆”因和改善睡眠为目的而组方和开发的藏茶，虽然临床应用已证明具有良好的改善睡眠功能，但缺乏实验数据。鉴于此，本研究拟通过戊巴比妥钠睡眠时间实验和戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验来验证尼极藏茶改善睡眠的功能〔12〕。通过观察受试药物对巴比妥类药物诱导睡眠的影响，是观察药物催眠作用的经典方法〔2，13～16〕。戊巴比妥钠和巴比妥钠为目前常用的中枢镇静药物，本实验结果表明受试药尼极藏茶无直接睡眠作用，尼极藏茶与戊巴比妥钠和巴比妥钠均有协同的催眠作用。根据《保健食品检验与评价技术规范》规定，延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、阈下剂量催眠实验及巴比妥钠睡眠实验中，只要有两个实验结果呈现阳性，就可以判定受试物具有改善睡眠的功效〔12〕，本实验结果符合《保健食品检验与评价技术规范》中受试物具有改善睡眠的效果的规定，说明尼极藏茶具有理想的改善睡眠作用。