恬梦复合植物固体饮料对小鼠睡眠的改善作用

冯旭，何颖，陈松，陈大贵，彭伟彪，王婷，张建

随着经济的迅猛发展，人们的工作以及生活节奏加快， 越来越多的人出现了失眠的症状，关于失眠的流行病学调查显示，有15%～35% 的成年人存在入睡困难、睡眠时长短等问题［1］。海军官兵的睡眠问题更为严重，调查表明，舰艇航行1 个月后，潜艇官兵的匹兹堡睡眠质量指数总分（Pittsburgh sleep quality index，PSQI）、睡眠效率、睡眠质量和入睡时间分值均显著升高［2］。长期的睡眠障碍，可以引起一系列机体功能的损害，导致作业功效下降。所以开发改善睡眠的药物或功能食品，对提升潜艇官兵作业功效具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 ICR（institute of cancer research）小鼠180 只（雄性，4～6 周，卡文斯实验动物有限公司），体重范围：17～21 g，实验动物许可证号：scxk（苏）2016−0010。

1.1.2 药品与试剂 恬梦复合植物固体饮料（5 g/袋，主要成分为酸枣仁粉、芦笋粉、γ-氨基丁酸、茶叶茶氨酸、红枣粉、低聚异麦芽糖等）、枣仁安神胶囊（贵州同济堂制药有限公司，0.45 g×20 粒）、戊巴比妥钠和巴比妥钠。戊巴比妥钠和巴比妥钠均为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 动物适应饲养7 d，称重，将180 只小鼠随机分为3 个实验组，每个实验组60 只分别进行实验1.2.4、1.2.5、1.2.6。以成人每日剂量5 g 恬梦复合植物固体饮料折合成动物实验的中剂量组，分别将每个实验组中的小鼠随机分为低、中、高剂量组（0.5、1.0、2.0 g/kg，0.2 ml/10 g 体积的恬梦复合植物固体饮料灌胃）、阳性药组（0.45 g/kg，枣仁安神胶囊配制成2.25 g/100 ml 的混悬液，0.2 ml/10 g 体积灌胃）和空白对照组（相同体积蒸馏水灌胃），每组12 只，所有小鼠每天灌胃1 次，共30 d。各组小鼠体重、周龄等经统计学检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。参照《保健食品检验和评价技术规范实施手册》进行改善睡眠功效评价［3］。

1.2.2 药物对小鼠体重的影响 选择一个实验组动物60 只，给药前及给药后每10 d 称量各小鼠体重，观察实验药物对小鼠体重的影响。

1.2.3 药物对小鼠直接催眠作用 计算小鼠灌胃后30 min内，出现睡眠的小鼠数量。观察各实验药物对小鼠有无直接催眠的作用（直接催眠判定标准：小鼠处于背卧位时，在60 s内未翻正）［3］。

1.2.4 延长小鼠因戊巴比妥钠作用睡眠时长实验［3］使用合适剂量戊巴比妥钠催眠后，给予预定剂量的实验药物，观察其是否具有延长睡眠时长的效果。睡眠时长增加，则说明实验药物对戊巴比妥钠引发的睡眠具有协同作用。预实验确定40 mg/kg 的戊巴比妥钠能使动物全部入睡，且睡眠时间≤60 min。连续灌胃30 d，在最后一次给药30 min 后，各组小鼠通过腹腔注射给予预定剂量戊巴比妥钠（40 mg/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失且维持60 s 以上作为小鼠入睡标准，观察各实验药物对戊巴比妥钠引起的睡眠时长影响。

1.2.5 小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验［3］观察实验药物是否与戊巴比妥钠具有协同作用。预实验结果确定能使80%～90%小鼠不入睡的戊巴比妥钠阈下剂量为25 mg/kg。连续灌胃30 d，最后一次给药30 min 后，各组小鼠通过腹腔注射给予预定剂量戊巴比妥钠（25 g/kg，0.2 ml/10 g）［3］，翻正反射消失作为小鼠入睡指标，观察各实验药物对戊巴比妥钠阈下剂量引起的小鼠睡眠时长影响。

1.2.6 小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期实验［3］使用合适剂量的巴比妥钠催眠小鼠，观察实验药物是否能够缩短小鼠的入睡潜伏期（自给药至翻正反射消失）。预实验结果确定280 mg/kg的巴比妥钠能使动物全部入睡，而睡眠时间≤60 min。连续灌胃30 d，在最后一次给药30 min 后，各组小鼠通过腹腔注射给予预定剂量巴比妥钠（280 g/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失作为小鼠入睡指标，观察实验药物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

1.3 统计学处理

使用SPSS 24.0 统计软件进行方差分析和多重比较，计量资料采用±s表示。计数资料用百分比（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各实验药物对小鼠体重的影响

各实验药物对小鼠体重无明显影响（P＞0.05），且各组动物状态良好。见表1。

表1 实验药物对小鼠体重的影响（g，± s，每组n=12）

表1 实验药物对小鼠体重的影响（g，± s，每组n=12）

注：与空白对照组比较P 均＞0.05

组别低剂量组中剂量组高剂量组阳性药组空白对照组给药30 d 36.3±1.0 36.0±1.5 35.2±1.6 36.6±1.1 36.3±1.3给药前19.2±1.2 19.2±0.8 19.7±1.5 19.8±0.9 19.6±0.9给药10 d 31.2±1.7 30.9±1.5 30.7±1.9 31.8±1.3 30.1±1.6给药20 d 34.1±1.7 33.5±1.7 34.0±1.5 33.7±1.1 33.1±1.3

2.2 直接睡眠作用

各组动物灌胃给药30 min 后，所有小鼠均未入睡，说明实验药物对小鼠并无直接催眠作用，符合《保健食品检验和评价技术规范实施手册》中改善睡眠保健食品的要求，可进行后面3 项实验［3］。

2.3 延长小鼠因戊巴比妥钠作用睡眠时长实验

不间断给药30 d 后，中剂量（1 g/kg）、高剂量（2 g/kg）组和阳性药物组的动物睡眠时长比空白对照组显著增加（P＜0.05），表明足量的实验药物能够延长因戊巴比妥钠引起的小鼠睡眠时长。见表2。

表2 实验药物对延长戊巴比妥钠睡眠时长的影响（s，± s）

表2 实验药物对延长戊巴比妥钠睡眠时长的影响（s，± s）

注：与空白对照组比较aP＜0.05，bP＜0.01

组别低剂量组中剂量组高剂量组阳性药组空白对照组睡眠时间1 815.2±291.0 2 249.8±352.3b 2 049.5±105.2a 2 270.4±484.6b 1 522.1±637.7小鼠数12 12 12 12 12戊巴比妥钠（mg/kg）40 40 40 40 40

2.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验

实验药物各剂量对小鼠入睡率的影响比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 实验药物对戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响［只（%）］

2.5 巴比妥钠睡眠潜伏期实验

中剂量（1 g/kg）和高剂量（2 g/kg）的实验药物对小鼠睡眠潜伏期有明显缩短作用（P＜0.05），阳性药物组对小鼠睡眠潜伏期也有着相同的效果（P＜0.01），结果表明实验药物能够缩短巴比妥钠催眠下的小鼠睡眠潜伏期。见表4。

表4 实验药物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响（s，± s）

表4 实验药物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响（s，± s）

注：与空白对照组比较aP＜0.05,bP＜0.01

组别低剂量组中剂量组高剂量组阳性药组空白对照组睡眠时间748.5±253.2 696.7±216.1a 739.8±130.5a 645.9±220.3b 873.6±167.6小鼠数12 12 12 12 12巴比妥钠（g/kg）280 280 280 280 280

4 讨论

恬梦复合植物固体饮料含有酸枣仁粉、芦笋粉、γ-氨基丁酸和茶叶茶氨酸等成分，酸枣仁是我国传统中药，是具有明显改善睡眠作用的药食两用药物，酸枣仁中的黄酮类中成分对小鼠具有明显的镇静催眠作用，多糖成分则明显降低了小鼠的自主活动性［4−5］。芦笋粉对存在睡眠障碍的人群有良好的改善作用，不仅增加有效睡眠时长，还可以缩短惊醒后的再入睡时长，其可能的机制是调节HPA 轴或5-羟色胺分泌相关［6−7］。γ-氨基丁酸和茶氨酸为新资源食品，γ-氨基丁酸是一种存在于人体和自然界的非蛋白质氨基酸，在中枢神经系统中有着抑制性神经递质的作用，在睡眠觉醒中也起着重要作用［8］。焦躁、不安、疲劳、忧郁、失眠等不适症状会伴随着γ-氨基丁酸的缺失出现于人体［9−10］，研究表明，γ-氨基丁酸可以延长睡眠时间、增加阈下剂量入睡动物数量［11］。茶氨酸是茶叶中的一种游离氨基酸，具有镇静安神、抗疲劳、提高记忆力等功效，也具有显著改善睡眠的功效［12］。以上多种成分，改善睡眠的机制不尽相同，通过合理复配，可以更好地达到改善睡眠的功效。

研究表明恬梦复合植物固体饮料灌胃给予30 d，对小鼠体重无影响。恬梦复合植物固体饮料低、中、高剂量均无直接促进小鼠睡眠的作用。在延长因戊巴比妥钠引起的睡眠时间实验中，中剂量和高剂量组的实验药物可以显著增加小鼠的睡眠时长，表明实验药物对戊巴比妥钠阈下剂量催眠具有协同作用。在巴比妥钠睡眠潜伏期实验中，中剂量和高剂量的实验药物显著地缩短小鼠睡眠潜伏期。根据《保健食品检验与评价技术规范》的要求［3］，上述3 项实验中，延长戊巴比妥钠睡眠时间实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验结果阳性，可判定恬梦复合植物固体饮料具有改善睡眠功能的作用。