广东省惠州地区363例地中海贫血产前基因诊断及随访情况分析

贺海林 钟泽艳 陈剑虹 官志扬 杨坤祥 钟国兴 徐志邦

广东省惠州市第一妇幼保健院(516007)

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)分为α-地贫和β-地贫两种[1]。根据临床症状的严重程度不同可以分为静止型地贫、轻型地贫、中间型及重型地贫。静止型和轻型地贫无需特殊治疗，中、重型地贫除了输血外，国内外尚无有效的治疗方法，重点在于预防[2]。为探讨预防重症地贫的有效手段及其效果，分析本院2015年1月—2016年12月诊断为携带同型地贫基因夫妇363例产前基因诊断及随访结果，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2015年1月—2016年12月在本院产前诊断中心诊断363对携带同型地贫基因夫妇，363对中同为α地贫基因携带者236对；同为β地贫基因携带者56对；其中一方为α、β地贫基因双重杂合子，另一方为携带有与之同型的α、β地贫基因或α、β双重杂合子夫妇71对。经知情同意后行产前地贫基因诊断。

1.2 检测方法

1.2.1标本采集根据孕周选择标本采集方式，共获得绒毛标本1例、羊水标本359例、脐带血标本3例。标本用于DNA的初次提取及细胞培养后的二次平行实验。DNA提取方法按地贫基因诊断试剂盒(广东凯普生物科技股份有限公司)说明书进行。

1.2.2 α珠蛋白基因检测采用Gap-PCR方法诊断中国人常见的东南亚型(SEA)基因缺失、泰国型(THAI)基因缺失、-α3.7基因缺失和-α4.2基因缺失等4种缺失型α-地贫基因，采用反向斑点杂交法(PCR-RDB)检测常见的α-珠蛋白基因αCSα、αQSα和αWSα3种点突变型地贫基因，检测方法按试剂盒(深圳益生堂生物技术有限公司)操作说明书进行。

1.2.3 β珠蛋白基因检测采用PCR结合反向斑点杂交法(PCR-RDB)，检测中国人常见的β-地贫基因17种基因突变类型，检测方法按试剂盒(深圳益生堂生物技术有限公司)操作说明书进行。

1.2.4 α、β地贫基因检测广东凯普生物科技股份有限公司α、β地贫基因检测试剂盒利用导流杂交的原理，可通过PCR扩增及快速导流杂交芯片一次检测上述检测范围内除泰国型(THAI)基因缺失外的常见α、β地贫基因型。

1.3 随访

363例孕妇均在产前诊断后1年电话随访，了解中重型地贫者胎儿结局、非中重型地贫胎儿出生后表型和发育情况。

2 结果

2.1 同型地贫基因携带夫妇产前基因诊断

363对同型地贫基因携带夫妇产前基因诊断结果见表1。

表1 363对携带同型地贫基因夫妇

2.2 同为α-地贫基因携带者夫妇胎儿基因分型

236对同为α-地贫基因携带夫妇产前诊断地贫基因谱及见表2。由非缺失型α-地贫基因αQSα和αCSα所致的HbH病(3例)临床表型通常较重，故与50例巴氏水肿胎(49例SEA纯合子及1例THAI/SEA复合杂合子)共计为53例中重型α-地贫。

2.3 同为β-地贫基因携带者夫妇胎儿基因分型

56对同型β-地贫基因携带夫妇产前诊断地贫基因谱及见表3。

2.4 至少一方为α、β双重杂合子的同型地贫基因携带者夫妇胎儿基因分型

71对至少一方为α、β双重杂合子地贫基因携带夫妇中，产前诊断正常36例(50.7%)、α或β地贫杂合子15例(21.1%)、巴氏水肿胎4例(0.1%)、α、β地贫双重杂合子13例(18.3%)、β-地贫复合杂合子3例(0.04%)。

表2 α-地贫基因携带孕妇产前胎儿基因型

表3 β-地贫基因携带孕妇产前胎儿基因型

*无突变

2.5 重型α-地贫及妊娠胎儿结局

中重型α-地贫共计57例，即3例非缺失型HbH病及54例巴氏水肿胎，均自愿选择引产；14例中重型β-地贫胎儿中13例选择引产，1例选择继续妊娠而出生1例重型β-地贫胎儿。产后随访均与产前诊断结果相符。

3 讨论

地贫是我国南方最常见和危害最大的遗传病之一，重型α-地贫胎儿多在妊娠末期胎死腹中或分娩后死亡；重型β-地贫患儿一般在出生后3～6个月出现症状，需输血维持生命，多在童年期夭折，目前尚缺少有效治疗方法。因此，对夫妇双方为同型地贫基因携带者的孕妇，在妊娠早期或中期进行产前诊断，避免重症地贫儿出生，是最积极有效的预防措施[3]。以降低重症地贫患儿出生率为目标的人群监控计划已在一些欧美高发区(如意大利、希腊、塞浦路斯等国家)取得了成功的经验[4]。惠州市于2014年开始陆续在全市范围内开展了地中海贫血防控项目，以及应用监测信息管理系统对纳入管理的目标人群实行免费地贫基因检测。通过对婚检、孕检地贫筛查，大大提高了同型地贫基因携带夫妇的检出率，为产前诊断提供了良好基础。

本资料同为α-地贫基因携带者的夫妇检出Bart’s水肿胎儿检出率(21.2%)较之本地区类似研究检出率(11.69%[5])高。可能与地贫防控项目实施后，高危人群定向转诊到本院有关。本院实验室通过采取STR检测及羊水细胞培养双通道、多平台相互映证等措施，确保地贫产前诊断的准确无误[6]。有1对夫妇获知重型β-地贫胎儿的产前诊断结果后选择继续妊娠，并产下1例重型β-地贫患儿。对另1例孕有重型β-地贫胎儿的夫妇，通过充分告知和实际病例宣教，使其自主选择引产，避免了重症β-地贫儿的出生。说明跟踪随访工作是地贫防控的重要内容，跟踪随访工作是否到位，直接关系到地贫高危夫妇是否相信产前诊断结果，采纳遗传咨询建议[7]。地贫防控工作是一项系统工程，医务人员应在正确、快速诊断的基础上，主动及时地与重型地贫夫妇沟通，并依据确诊结果采取有效方式进行随访宣教，才能最大限度的避免重症地贫儿的出生，将地贫防控工作落到实处。而防止地贫患儿发生的关键是在于加大对育龄人群的筛查力度及宣传，这也更突显出对同型地贫夫妇宣教随访工作及适时培训的重要性[8-9]。尤其是在当前“全面两孩”政策下，高龄孕妇通常受孕不易，在得知重型地贫胎儿的产前诊断结果后，往往难以接受，心存侥幸。因此，如何加强产前诊断后遗传咨询及心理干预，提高实际干预效果，也是值得深入研究的重要课题[10]。总之，在地贫遗传知识尚待普及、尤其是重型β-地贫危害尚未充分认知的环境下，地贫防控工作任重而道远。