观察多西紫杉醇和维甲酸对前列腺癌细胞系PC-3的体外体内协同作用*

于 博

(莆田学院，福建 莆田 351100)

紫杉醇(PA)指的是从紫衫树皮及树叶中提取的天然抗癌新药，多西紫杉醇指的是半合成紫杉醇衍生物，其主要是利用促进细胞微管聚合，避免微管正常生理解聚，对细胞有丝分裂过程造成影响，其对于多肿瘤都具有一定的诱导凋亡及生长抑制的作用。多西紫杉醇抗肿瘤效果及毒副作用均比紫杉醇优。目前，多西紫杉醇在前列腺癌治疗中的报道比较少[1]。那么本研究针对多西紫杉醇及维甲酸对于前列腺癌细胞系PC-3的体外体内协同作用进行研究。

1 材料和方法

1.1细胞和培养条件 人前列腺PC-3细胞在10%小牛血清培养基中培养，添加链霉素和青霉素。在37 ℃温度下通过5%CO2进行常规培养，使用指数生长期5×106个细胞在24孔板中接种，培养12h之后添加不同浓度的多西紫杉醇及维甲酸，并且实现空白组、阳性组和阴性组三组。

1.2试剂和药物 多西紫杉醇与维甲酸均为赛诺菲(杭州)制药有限公司提供，噻唑蓝、碘化丙啶均为上海恒远生物科技有限公司提供。

1.3药物处理和分组 将5×106/L细胞接种到96孔板中，每组细胞进行多种浓度多西紫杉醇单一用药，不同浓度的维甲酸单一用药，不同浓度的维酸钾单一用药，不同浓度维酸钾和多西紫杉醇处理，并且创建空白组进行对照[2]。

1.4细胞增殖实验 将各个药物处理以后的细胞弃上清，对每个孔添加200 μl配置的MTT孵育，弃上清添加二甲基亚砜，混合之后在酶标仪中测定吸光度。

1.5细胞形态观察 体外培养细胞通过各组药物处理之后漂洗三次，丙酮固定八分钟，95%、80%、70%梯度乙醇脱片，光镜观察和HE染色后光镜观察细胞形态。

1.6流式细胞仪分析 通过各组药物处理24 h和48 h之后的PC-3细胞，消化分离为1×106/ml单细胞悬液，离心沉淀之后通过磷酸盐缓冲液洗涤三次，并且利用乙醇实现固定，通过流式细胞仪进行分析[3]。

1.7免疫细胞化学 利用各个药物处理之后的细胞玻片，通过超敏免疫组学化学试剂和进行检测，以免疫组学化学染色步骤实现染色，如果细胞核中具有棕黄色染色为阳性表达细胞[4]。

1.8统计学分析 本研究数据利用SPSS 20.0实现统计学处理，计量资料利用表示，通过t进行检验，使用%表示计数资料，通过χ2进行检验，P≤0.05表示数据差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1多西紫杉醇及维甲酸对PC-3的生长抑制作用 各组药物在作用24 h、48 h之后对于前列腺癌细胞系PC-2细胞的生长抑制作用结果进行表达，细胞存活率和药物的浓度存在反比关系，而且还存在剂量依赖性，最为显著的就是10-6mol/L浓度维甲酸和10-6mol/L多西紫杉醇40 h作用最为明显(抑制率为72.9%，P<0.05)，见表1。

表1 多西紫杉醇及维甲酸对PC-3的生长抑制作用

2.2形态学观察 人前列腺PC-3细胞利用不同浓度和配伍多西紫杉醇和维甲酸处理之后，其主要结果为不同程度的细胞周所、染色质凝集及边缘毛躁，并且嗜碱性提高为深蓝色，核膜消失。最为显著的为10-7mol/L多西紫杉醇和10-5mol/L浓度的维甲酸结合，详见图1，最不显著的就是10-7mol/L维甲酸单一用药。

图1 10-7mol/L多西紫杉醇和10-5mol/L维甲酸 对PC-3诱导凋亡情况

3 讨 论

目前，我国前列腺癌发病几率在不断地提高，患者常常会因为合并多种疾病不能够实现开放手术，内窥镜腔内手术无法有效根治疾病，细胞对于雄激素治疗没有效果，对于一般依赖损伤细胞蛋白质及DNA化疗药物具有一定的耐药性，所以在对前列腺癌治疗过程中，其主要目的就是诱导细胞凋亡及抑制生长繁殖[5]。多西紫杉醇能够实现细胞微管聚合，并且对微管正常解聚进行阻碍，对细胞有丝分裂进行影响，以此促进肿瘤细胞凋亡。维甲酸能够利用细胞维甲酸和蛋白相互结合转运到细胞核中，和核中的特异受体相互结合，实现细胞核中维甲酸信号的传递，每两个维甲酸核受体都会构成二聚体，和靶基因维甲酸反应元件相互结合，对基因网络活性进行调控，以此对细胞周期进行影响，实现细胞凋亡的有效促进[6]。

通过本研究表示，多西紫杉醇及维甲酸的相互作用能够有效诱导前列腺癌细胞PC-3细胞凋亡，并且还能够促进细胞毒作用，使抑制雄激素有效提高，促进肿瘤细胞凋亡消退。

综上所述，多西紫杉醇和维甲酸两者的协同作用能够有效提高对前列腺癌细胞系PC-3生长抑制及诱导凋亡的作用，值得临床推广使用。