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聚乙二醇沉淀联合化学发光法检测高泌乳素血症的临床意义

2018-11-14王利健陈俊傅真

浙江医学 2018年20期
关键词:泌乳素分子量符合率

王利健 陈俊 傅真

高泌乳素血症(HP)是指由内外环境因素引起的人体血清泌乳素升高,女性表现为闭经、溢乳或不孕[1]。巨泌乳素是泌乳素和泌乳素抗体结合形成的复杂免疫复合物,分子量较大,不能通过人体的血管壁,所以无法与细胞进行结合,因此无生物学作用,但是巨泌乳素在人体内大量堆积时会导致泌乳素产生假性增高,导致误诊、误治[2-4]。从泌乳素蛋白质的特性可知,巨泌乳素血症(MP)是HP的特殊存在形式。由于聚乙二醇(PEG)可以选择性地沉淀大分子量的泌乳素,从而有效区别泌乳素活性,因此笔者采用PEG沉淀联合化学发光法检测HP,以提高临床对HP的诊断。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2016年2至7月义乌市中心医院因不孕、有溢乳、月经不调等症状就诊且血清泌乳素浓度>29.93ng/ml患者共158例,均为女性,年龄 20~45(30.07±9.23)岁。根据文献报道[1],PEG沉淀后泌乳素测定回收率=(PEG沉淀后泌乳素×2/PEG沉淀前泌乳素)×100%,按PEG沉淀后泌乳素测定回收率进行分组,其中巨泌乳素组59例(回收率<40%),标本中含有的泌乳素主要为巨泌乳素,判定为巨泌乳素血症;混合泌乳素组20例(回收率在40%~60%),标本中所含泌乳素既有泌乳素单体,又有巨泌乳素的存在;单体泌乳素组79例(回收率>60%),标本中主要含有小分子泌乳素,判定为真性高泌乳素血症。

1.2 仪器与试剂 美国雅培i2000化学发光仪,试剂盒由雅培公司提供,其中泌乳素的批号为62039U100。

1.3 方法

1.3.1 检测方法 采用化学发光法,女性泌乳素参考范围为1.20~29.93ng/ml。严格按照仪器全自动SOP程序操作,泌乳素高、中、低水平质控均处于在控范围,仪器运行良好。

1.3.2 25%PEG准备 25%PEG(分子量为6 000)水溶液,用作巨泌乳素的沉淀剂。平时分装贮存于2~8℃冰箱,有效期3个月。用前置室温,达到室温后使用。

1.3.3 操作步骤 所有患者均于清晨空腹抽取静脉血5ml,分离血清并进行检测。在雅培i2000仪器上检测泌乳素,经筛检为HP的标本再行PEG沉淀处理:500μl血清加等量 500μl的25%PEG溶液,充分混匀后室温放置30min,以3 500r/min离心5min,然后取上清液于雅培i2000分析仪上测泌乳素浓度。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件,正态分布的计量资料以表示,3组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 年龄因素对组别的影响 巨泌乳素组平均年龄为(32.86±7.53)岁,混合泌乳素组为(29.15±8.08)岁,单体泌乳素组为(29.18±10.42)岁,3组间比较差异有统计学意义(F=3.120,P=0.047);巨泌乳素组和混合泌乳素组的年龄比较差异无统计学意义(P=0.267),巨泌乳素组和单体泌乳素组的年龄比较差异有统计学意义(P=0.046),混合泌乳素组和单体泌乳素组的年龄比较差异无统计学意义(P=0.948)。

2.2 3组患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比较3组间沉淀前泌乳素水平差异无统计学意义(F=1.706,P=0.185),沉淀后,3组间差异有统计学意义(F=9.523,P=0.000)。进一步比较发现,沉淀前3组间两两比较泌乳素水平均无统计学差异(均P>0.05);沉淀后混合泌乳素组和巨泌乳素组、单体泌乳素组比较差异均无统计学意义(P=0.792、0.068),但巨泌乳素组和单体泌乳素组比较差异有统计学意义(P=0.000),见表1。

表1 3组患者血清PEG沉淀前后泌乳素水平的比较(ng/ml)

2.3 巨泌乳素的分布特点 以2倍泌乳素高限(59.86ng/ml)为界,分析158例患者巨泌乳素的分布特点发现,>2倍泌乳素高限者47例,其中巨泌乳素21例,占44.68%。<2倍泌乳素高限者111例,其中巨泌乳素38例,占34.23%。若按回收率<40%为限,>2倍泌乳素高限21例为巨泌乳素,临床诊断符合率达100%;<2倍泌乳素高限38例为巨泌乳素,临床诊断明确巨泌乳素26例,符合率达68.42%以上,总体符合率达79.66%。

3 讨论

泌乳素在人血清中有3种存在形式:(1)有生物和免疫活性泌乳素单体,分子量为23kD;(2)缺乏生物活性泌乳素二倍体,分子量约50~60kD;(3)无或不发挥任何生物活性,亦即巨泌乳素,分子量150~170kD。巨泌乳素是在血管内形成的,主要是与血液中IgG形成大分子复合物。在体内无活性,这是由于复合物的分子量大,无法通过毛细管内皮与靶受体起作用。再加上它在体内的半衰期较长,易于在血管内中累积,并且被体外免疫分析系统视作泌乳素检出,从而造成泌乳素浓度的假性增高[5]。本实验结果表明,158例HP患者血清中,巨泌乳素59例(37.34%),混合泌乳素 20例(12.66%),单体泌乳素79例(50.00%),这更进一步证实了巨泌乳素是造成HP的基础原因。

目前鉴别巨泌乳素引起的HP的主要方法有:凝胶色谱法、PEG法、蛋白A琼脂糖凝胶吸附法、羊抗人IgG琼脂糖吸附法等。其中凝胶色谱法是检测巨泌乳素的金标准,但因其重复性差,操作复杂,价格昂贵,从而不适合临床大范围开展。其中,以PEG法操作简单、价格低廉、无需昂贵的辅助仪器、可作为临床常规筛查方法在医院内推广使用。

泌乳素的正确检测关系到临床正确诊断、合理用药及预后的评价。近几年来,泌乳素免疫检测技术及颅脑CT和MRI诊断技术的进步,对HP的诊断水平有了大幅度的提高了。如今,如何排除巨泌乳素的干扰,提高泌乳素检测的准确性已成为临床和检验今后关注的一个要点。MP血液中泌乳素分子以分子量150~170kD的巨泌乳素为主,PEG可以选择性地沉淀大分子量的泌乳素,从而可以有效区别巨泌乳素、单体泌乳素和混合泌乳素。目前,临床和检验仍过分信赖泌乳素商品化试剂而未开展巨泌乳素的筛查,致使巨泌乳素引起的HP误诊时有发生。总之,对于泌乳素增高的标本应用PEG沉淀法筛查巨泌乳素,这样可提高诊断水平和检验质量,对于避免误诊和误治,并对由此引起的医疗纠纷有一定意义。本项研究中,巨泌乳素组和单体泌乳素组的年龄有统计学差异(P<0.05),患巨泌乳素女性平均年龄偏大。>2倍泌乳素高限者47例,其中巨泌乳素21例,占44.68%。<2倍泌乳素高限者111例,其中巨泌乳素38例,占34.23%。若按回收率<40%为限,>2倍泌乳素高限21例为巨泌乳素,临床诊断符合率达100%;<2倍泌乳素高限38例为巨泌乳素,临床诊断明确巨泌乳素26例,符合率达68.42%以上,总体符合率达79.66%。对<2倍泌乳素高限为巨泌乳素的病例,如果和临床诊断不符合,建议用凝胶色谱金标准方法进一步验证。

总之,采用25%PEG沉淀分离法检测泌乳素升高,对可疑患者进行必要的排查,对指导临床很有必要,特别对有些患者查出有高泌乳素血症,但临床用药效果不佳,而又经过颅脑CT及MRI查体无明显异常的人群。

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