白细胞CD35和CD11b表达在诊断细菌感染中的价值
2018-11-05王维维袁向亮章黎华郑培明费奇力沈立松
王维维， 郝 军， 袁向亮， 章黎华， 郑培明， 费奇力， 奚 迪， 沈立松
（1.上海交通大学医学院附属新华医院检验科，上海 200092；2.威海市中心医院检验科，山东 威海 264400）
细菌感染是常见的就诊原因，也是临床疾病常见的并发症之一。感染后期可以引起败血症、脓毒血症、器官衰竭等严重后果，甚至死亡。为早期干预治疗，指导抗菌药物的使用，细菌感染的早期快速、准确诊断尤为重要。目前，细菌培养是诊断细菌感染的金标准，但细菌培养耗时较长，而且培养结果与样本取材关系密切。诊断感染的常用实验室指标有白细胞计数、中性粒细胞计数、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）等，但这些指标的特异性和敏感性都有待提高。因此，临床亟需一种可以特异且敏感地鉴别细菌感染的标志物或方法。补体受体（complement receptor，CR）1即CD35，可以促进吞噬细胞吞噬颗粒和免疫复合物等[1-2]。CR3即CD11b，又称CD18，介导细胞黏附和调理吞噬，在炎症过程中参与吞噬细胞与内皮细胞黏附[1-2]。CD35和CD11b在静止期的中性粒细胞中仅微弱表达，发生感染后，中性粒细胞会释放大量CD35和CD11b到细胞表面[3-4]。因此，本研究采用流式细胞术快速定量检测白细胞CD35和CD11b的表达，以期能实现感染的快速诊断。
1 材料和方法
1.1 研究对象
选取2014年5月—2016年2月上海交通大学医学院附属新华医院感染疑似患者100例，另选取同期上海交通大学医学院附属新华医院健康体检者40名。采集所有对象肝素抗凝外周血4 mL，2 h内完成检测。查询感染疑似患者的血培养和临床综合诊断并进行比对，排除非感染患者，排除伴随病毒感染的患者，剩余39例（男22例，女17例，年龄14～84岁）作为细菌感染组。40名健康体检者排除血常规和免疫指标等异常者，剩余23名（男13名，女10名，年龄18～76岁）作为正常对照组。
1.2 方法
荧光抗体鼠抗人CD35-FITC、鼠抗人CD11b-PE及鼠抗人CD45-Pe-Cy5均购自美国Beckman-Coulter公司。取以上抗体各5 μL至流式专用试管内，加入外周血50 μL，避光孵育10 min，加入BD Lysing细胞裂解液（美国BD公司）1 mL，裂解红细胞10 min，采用BD canto Ⅱ流式细胞仪（美国BD公司）检测外周血白细胞（淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞）的CD35和CD11b平均荧光强度（mean fluorescence intensity，MFI）。分别计算细菌感染组和正常对照组中性粒细胞CD35 MFI /淋巴细胞CD35 MFI比值（简称CD35比值）、中性粒细胞CD11b MFI/淋巴细胞CD11b MFI比值（简称CD11b比值），并按公式[感染指数=中性粒细胞MFI2/（淋巴细胞MFI×单核细胞MFI）]计算CD35感染指数和CD11b感染指数。同时检测CD64 MFI并计算CD64比值及CD64感染指数。
1.3 统计学方法
采用GraphPad Prism 5.0进行统计分析。呈正态分布的数据以表示，组间比较采用t检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各项指标诊断细菌感染的价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 细菌感染组与正常对照组白细胞CD35、CD11b和CD64 MFI的比较
细菌感染组淋巴细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均低于正常对照组（P＜0.000 1、P＜0.01、P＜0.000 1），而中性粒细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI均高于正常对照组（P＜0.000 1、P＜0.000 1、P＜0.01）；细菌感染组单核细胞CD11b和CD64的MFI均高于正常对照组（P＜0.000 1、P＜0.001），而2个组之间单核细胞CD35 MFI差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1～表3。
表1 细菌感染组和正常对照组淋巴细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
表1 细菌感染组和正常对照组淋巴细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
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表2 细菌感染组和正常对照组中性粒细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
表2 细菌感染组和正常对照组中性粒细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
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表3 细菌感染组和正常对照组单核细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
表3 细菌感染组和正常对照组单核细胞CD35 MFI、CD11b MFI和CD64 MFI的比较
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2.2 细菌感染组和正常对照组白细胞CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比较
细菌感染组CD35比值、CD11b比值及CD64比值均明显高于正常对照组（P＜0.000 1）。见表4。
表4 细菌感染组和正常对照组CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比较
表4 细菌感染组和正常对照组CD35比值、CD11b比值和CD64比值的比较
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2.3 细菌感染组和正常对照组CD35感染指数、CD11b感染指数和CD64感染指数的比较
细菌感染组CD35感染指数、CD11b感染指数及CD64感染指数均明显高于正常对照组（P＜0.000 1）。见表5。
表5 细菌感染组和正常对照组CD35感染指数、CD11b感染指数和CD64感染指数的比较
表5 细菌感染组和正常对照组CD35感染指数、CD11b感染指数和CD64感染指数的比较
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2.4 CD35比值、CD11b比值和CD64比值诊断细菌感染的ROC曲线分析
ROC曲线分析显示，CD35比值、CD11b比值和CD64比值诊断细菌感染的曲线下面积（area under curve，AUC）差异无统计学意义（P＞0.05）。见表6、图1。
2.5 CD35感染指数、CD11b感染指数、CD64感染指数诊断细菌感染的ROC曲线分析
ROC曲线分析显示，CD11b感染指数诊断细菌感染的AUC大于CD64感染指数（P＜0.05），CD35感染指数与CD64感染指数之间AUC差异无统计学意义（P＞0.05）。见表7、图2。
表6 CD35比值、CD11b比值和CD64比值诊断细菌感染的ROC曲线参数
图1 CD35比值、CD11b比值和CD64比值诊断细菌感染的ROC曲线
表7 CD35感染指数、CD11b感染指数、CD64感染指数诊断细菌感染的ROC曲线参数
图2 CD35感染指数、CD11b感染指数、CD64感染指数诊断细菌感染的ROC曲线
3 讨论
补体是人和脊椎动物血清与组织中的一组不耐热、经活化后具有酶活性的蛋白质，并非单一成分，而是由30多种活性成分组成，包含补体及其调节因子和相关膜蛋白以及CR，故称为补体系统，其广泛参与了机体微生物防御反应及免疫调节等[5]。CR是指细胞表面能与补体成分或补体片段特异性结合的糖蛋白分子，按其功能可以分为3类，其中CR1（CD35）和CR3（CD116）都属于膜结合C3片段的受体[6]。CR1和CR3表达于中性粒细胞、巨噬细胞等细胞的表面，参与细胞的吞噬、黏附等[2，6-7]。
CD35和CD11b在正常情况下只弱表达于中性粒细胞表面。当机体发生感染时，在一些炎症因子和趋化因子等的影响下，CR高表达于中性粒细胞表面[8]。本研究采用流式细胞术检测白细胞CD35 MFI和CD11b MFI。结果显示，与正常对照组比较，细菌感染组CD35和CD11b在中性粒细胞和单核细胞上呈明显高表达，而在淋巴细胞呈低表达；细菌感染组CD35比值、CD11b比值、CD64比值、CD35感染指数、CD11b感染指数和CD64感染指数均明显升高。
目前，临床应用较广泛的判断细菌感染的指标是中性粒细胞CD64[9]，可作为新生儿脓毒血症的诊断指标[10]，也可以作为院内感染的快速检测指标[11]，亦可作为CRP等感染指标的补充[12]。目前，已有学者在探索CD64的即时检验（point-of-care testing，POCT）方法[13]。这也证实了CD64对细菌感染具有较高的诊断价值。本研究结果显示，CD11b感染指数诊断细菌感染的AUC大于CD64感染指数（P＜0.05），即CD11b感染指数的诊断性能优于CD64感染指数。因此，CD11b可以作为诊断细菌感染的良好指标。但由于本研究最终入选的样本量较少，因此得出的结论还需要扩大样本量进一步验证。
