清热益气中药对2型糖尿病小鼠胰岛细胞凋亡及炎症因子表达的影响

王 松，房 芳，鲁 冰，籍胤玺，付莉萍

（南阳市中心医院，河南 南阳 473009）

糖尿病是常见的一种慢性内分泌系统疾病，其发病率正在逐年增加[1]。2型糖尿病是常见的糖尿病类型，占糖尿病95%以上。2型糖尿病早期阶段主要为胰岛素抵抗，且随着糖尿病病程的延长，胰岛β细胞功能减退，导致2型糖尿病病情进一步恶化[2-3]。近年来中医药在2型糖尿病治疗中取得了良好效果[4-6]。本文研究清热益气中药对2型糖尿病小鼠胰岛细胞凋亡及炎症因子表达的影响。

1 实验材料

由武汉生物制品研究所提供的SPF级ICR小鼠60只，体质量（18±2）g，生产许可证号：SCXK（鄂）2008-0003。清热益气中药组成：黄连9 g，黄芩9 g，人参9 g，黄芪9 g，甘草6 g；格列美脲片（国药准字H20010571，山东新华制药股份有限公司）。小鼠胰岛素（INS）试剂盒（美国Sigma公司），链脲菌素（STZ）（美国Sigma公司），小鼠C-反应蛋白（CRP）试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司），小鼠白介素-6（IL-6）试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司）。美国Thermo离心机，日本日立7160型全自动生化分析仪，雅培血糖仪。

2 实验方法

2.1 清热益气中药制备 取黄连9 g，黄芩9 g，人参9 g，黄芪9 g，甘草6 g，加水300 mL浸泡30 min后煎煮40 min，将药渣去掉，再继续煎煮40 min，以60 ℃恒温条件下将其浓缩成1 mL含生药2.5 g，放置于4 ℃条件下保存。

2.2 2型糖尿病小鼠模型建立 60只小鼠昼夜交替12 h，维持室温23～25 ℃，适应性喂养1周。随机分为5组，每组12只。对照组给予普通饲料，剩余48只小鼠给予高脂高糖饲料（成分：72%普通饲料、3%蛋黄、10%猪油、15%蔗糖），观察活动状态、饮食状况，喂养第3周后，进食12 h，腹腔注射STZ，剂量为30 mg/kg一次性腹腔注射，喂养1周，于小鼠尾静脉取血，测定小鼠空腹血糖3次，取空腹血糖＞11.1 mmol/L的小鼠为2型糖尿病小鼠。

2.3 实验分组 48只小鼠造模成功41只，取其中40只用作实验。12只正常小鼠取10只用作实验。分为对照组、模型组、格列美脲组、清热益气低剂量组、清热益气高剂量组，10只/组。对照组给予等剂量生理盐水灌胃；模型组于造模后给予等剂量生理盐水灌胃；格列美脲组于造模后给予格列美脲4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清热益气低剂量组于造模后按生药4 g（/kg·d）灌胃，1次/d；清热益气高剂量组于造模后按生药12 g（/kg·d）灌胃，1次/d，每组灌胃4周，灌胃量均为5 mL/次。

2.4 小鼠空腹血糖测定 血糖测定采用尾静脉取血，应用罗氏血糖试纸读数法测定。

2.5 血清标本采集 灌胃4周后，取小鼠4只/组，眼球取血0.6 mL，以离心半径15 cm，转速3 000 r/min，离心10 min，分离血清，放置于-20 ℃下冷冻保存，待测。2.6 血清炎症因子测定 采用酶联免疫吸附法测定CRP、TNF-α和IL-6含量，严格按照试剂盒说明书标准测定。

2.7 统计学处理 以SPSS19.0软件分析，针对本研究数据中计量资料以t检验，针对本研究数据中计数资料以卡方检验。

3 结果

3.1 各组小鼠空腹血糖比较 见表1。

3.2 各组小鼠INS和ISI变化比较 见表2。

3.3 各组小鼠血清炎症因子含量比较 见表3。

表1 各组小鼠空腹血糖比较（x± s ，n = 10）

表2 各组小鼠INS和ISI变化比较（x± s ，n = 10）

表3 各组小鼠血清炎症因子含量比较（x± s ，n = 10）

4 讨论

中医学认为2型糖尿病属“消渴病”范畴，认为其基本病机为虚、痰、浊、瘀互结，其中瘀、浊、痰均属内生之毒范畴，内生之毒，郁而化热，造成热毒郁结、耗伤[7]。临床上应以清热解毒，益气生津为治疗法则。本研究采用清热益气中药，其中黄连、黄芩清热解毒，人参、黄芪益气，甘草调和诸药。本研究结果表明，清热益气中药可降低空腹血糖，降低INS而提高ISI，从而改善患者胰岛功能。

近年来研究证实，炎症因子与2型糖尿病发生、发展密切相关。CRP是一种急性时相蛋白，主要经细胞因子刺激肝脏而产生[8]。有学者研究证实新发病或已确诊2型糖尿病CRP明显升高[9]。IL-6主要由2条糖蛋白链构成的一种多肽，是重要的细胞因子之一，主要来源于内皮细胞、脂肪细胞和巨噬细胞，已被证实与机体多种病理生理过程相关[10]。研究证实，心血管疾病及2型糖尿病患者体内IL-6含量较高，且胰岛素分泌不足和胰岛素抵抗导致的高血糖均能够促进胰岛素细胞分泌大量的IL-6，进一步促进T淋巴细胞过度激活和促进B淋巴细胞分化，能够导致胰岛β细胞死亡，以及加重胰岛素抵抗[11-12]。TNF-α主要由巨噬细胞、单核细胞和脂肪细胞产生，体内TNF-α含量与脂肪组织量成正相关[13-14]。有学者研究证实TNF-α可显著降低胰岛素的敏感性[15]。本文研究结果表明，清热益气中药可降低CRP、TNF-α和IL-6含量，认为其可改善慢性炎症，提高靶器官对胰岛素的敏感性，进一步能够改善胰岛素抵抗症状。

综上所述，清热益气中药可降低2型糖尿病小鼠空腹血糖、胰岛素，增加胰岛素敏感指数，降低炎症因子CRP、TNF-α和IL-6表达。