一例Bx01O01亚型伴抗B抗体患者的血型鉴定报告

2018-10-26赵媛刘伟赵一贺宋广平李代红天津市第一中心医院输血科天津300192

实用器官移植电子杂志 2018年4期

赵媛，刘伟，赵一贺，宋广平，李代红（天津市第一中心医院输血科，天津 300192）

ABO血型系统是人类最重要的血型系统，除常见的ABO表型外，还有一类与正常ABO血型抗原结构、性能或抗原位点数有一定差异的亚型存在。亚型也有遗传基础，也具有明确的血清学特点［1］。例如：Bx亚型红细胞与单克隆抗-B呈弱凝集，甚至不凝集；与抗-AB弱凝集～2+凝集；H抗原表达近似于O型红细胞；血清中常伴有不规则抗B抗体，当抗体较强时极易误诊为O型；ABO亚型的误诊对临床输血安全、器官移植、骨髓移植、法医学鉴定、新生儿溶血病造成严重危害。1990年首次通过基因测序明确了人类ABO血型系统中A1、B、O三个主要等位基因的分子生物学基础，分子生物学逐步应用到人类血型鉴定。目前，被dbRBC NCBI血型抗原基因突变数据库收集的Bx等位基因有12个，其分子机制均为点突变［2］。本文总结1例血清学极易误诊的Bx亚型伴有较强抗B抗体标本，结合分子生物学基因分型测序分析报道如下。

1 临床资料

1.1 对象：先证者，男，39岁，汉族，大面积烧伤急诊入院进行ABO血型鉴定时，微柱凝胶法判定为O型，常温试管法发现正反定型不符。

1.2 血清学检测

1.2.1 经典试管法：严格按照《中国输血技术操作规程》［3］进行操作，结果见表1。

1.2.2 微柱凝胶法：EDTA抗凝血5 ml，3 000 r/min，5分钟充分离心排除血浆内纤维蛋白原干扰。严格按照戴安娜血型设备使用说明书及操作规程，进行ABO正反定型、不规则抗体筛查、自身抗体检测、直接抗体检测。

ABO血型结果与试管法室温立即离心结果不一致，正定型抗-A：-，抗B：-；反定型Ac：4+，Bc：2+，全自动系统判定为O型，见图1。不规则抗体筛查：Ⅰ-、Ⅱ-、Ⅲ-。自身抗体阴性，直接抗体阴性。

表1 经典试管法鉴定结果

图1 微柱凝胶法鉴定ABO正反定型结果

1.2.3 吸收放散实验：被检红细胞经3次洗涤后留压积红细胞，加入抗-B血清4℃吸收1小时，中间每10分钟震摇1次，离心取上清与标准抗-B血清对照，倍比稀释加入B型标准红细胞，证实B抗原存在。吸收后压积红细胞多次洗涤后56℃热放散10分钟，离心取放散液加入B型标准红细胞，检测到B抗原存在，结果见表2。

1.3 分子生物学检测

1.3.1 SSP基因分型：严格按照DNA提取试剂盒操作说明书操作，DNA浓度 30～50 ng/μl，DNA纯度A260/A280比率在1.6～2.0。患者ABO基因型为Bx01/O，结果见图2。

表2 吸收放散试验结果

图2 ABO血型基因分型电泳图

1.3.2 B基因第6、7外显子测序（图3）：对患者1 ～ 7外显子基因测序结果为Bx01O1杂合子，根据NCBI提供的血型抗原基因突变数据库，比对A101基因序列第6外显子存在1个碱基突变：297 A＞G；第7外显子存在7个碱基突变：526 C＞G；657 C＞T；703 G＞A；796 C＞A；803 G＞C； 871G＞A；930 G＞A。发生R 176 G、G 235 S、L 266 M、G 268 A、D 291 N氨基酸替换。

图3 第6、7外显子部分基因测序

2 讨论

ABO血型系统免疫原性最强，也是人类最早发现和认定的红细胞血型系统，对输血安全、器官移植、法医学鉴定、新生儿溶血病等意义重大，错误判断血型会造成严重后果，甚至危及患者生命。除了常规的A、B、O、AB表型外，还存在着具有同一血型抗原，但抗原位点、结构、性能等存在差异的ABO亚型系统。ABO亚型的血清学特点是与抗-A、抗-B反应很弱，甚至无反应，血清中易产生针对减弱抗原的血型抗体，给ABO血型鉴定带来困难，易发生误诊。血清学ABO正反定型是目前临床上检测ABO血型的常规方法，实验耗时少、简单易操作，全自动微柱凝胶法应用到血清学血型鉴定之后，避免了因实验室条件、操作者判断凝集强度差异等带来的误差。有报道称微柱凝胶法较经典试管法灵敏，弱抗原抗体检出率高［4-5］。但本实验发现由于微柱凝胶法的分子筛只能通过游离单个红细胞，能够检出部分肉眼不可见抗原抗体结合物造成假阳性结果，特别是反应格局与正常ABO血型一致时会发生误判。与报道因离心应切力大于弱抗原抗体结合亲和力造成假阴性结果不符，有待进一步分析研究［6］。常温经典试管法由于对弱抗原抗体检出率低于微柱凝胶法，更易发生正反定型不符的非常规反应格局，更易于提示亚型存在的可能性；当发现异常反应格局或试管法与微柱凝胶法结果判断不一致时，应考虑亚型的发现，进一步完善血清学实验，通过吸收放散、检测血型物质、抗体检测等手段进行确认。目前《中华人民共和国药典》未要求单克隆抗-B血清凝集B3、BX抗原红细胞，ABO亚型漏检发生率高，正定型加入抗-AB血清十分必要［7］。当发生本文标本正定型为O，反定型Ac、Bc一侧已达4+且凝聚强度差接近2+时，将反定型标本放入IgM抗体最适反应条件的手段不可行。

虽然大部分ABO亚型血清学反应格局已有总结，但比较笼统，同时由于大量单克隆血清代替多克隆血清在临床上广泛的使用，故以前由于单独以血清学为基础分类亚型的适当性值得探讨［8］。ABO血型系统由A、B、O 3个等位基因控制，A和B基因产生糖基转移酶（H转移酶），在此基础上A基因产生N-乙酰半乳糖转移酶（A酶）、B基因产生半乳糖转移酶（B酶），这两种酶可使H寡糖链（H抗原）上加入特异性糖，而产生特异性A或B抗原，碱基突变造成氨基酸替换导致糖基转移酶活性丧失出现亚型。至今已发现ABO等位基因达300多个，大多数ABO亚型分子基础已明确，随着血型抗原基因数据库的不断完善，运用分子生物学技术进行ABO亚型分类已经逐步显示出了特异性、准确性的优势，成为了ABO疑难血型鉴定中血清学诊断的有力验证。但是分子生物学同时存在试验要求条件高、耗时长的缺点，不适用于目前日常临床紧急状况下使用。本文病例深度大面积烧伤、贫血、休克、急性肾衰竭急诊入院，血清学发现疑难后紧急抢救给予AB型血浆2 000 ml，O型洗涤红细胞4单位，经血清学吸收放散发现B抗原存在，后续治疗改为B型血浆输注。经分子生物学鉴定患者血型为Bx01O01，由于患者存在不规则抗B抗体，仍采用配合型输血O型洗涤红细胞，患者无输血反应且无效输血现象经治疗转归良好。