Fascin和survivin蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

潘建生，陈一杰，江涛，刘朝辉

中国人民解放军第180医院普外科，福建 泉州 362000

近年来，结直肠癌的发病率和病死率均呈上升趋势，近5年来其发病率维持在（454～584）/10万[1]。结直肠癌可能会发生远处转移及淋巴结浸润，导致患者预后较差[2-3]。生物学机制是导致结直肠癌发生的重要因素，一些生物因子可能会导致肿瘤信号通路的激活或肿瘤细胞生物学特性的改变，影响肿瘤细胞的增殖、浸润及分化过程，促进恶性肿瘤的发生。肌成束蛋白（Fascin）的表达能够通过促进肿瘤细胞的伪足形成、α-平滑肌肌动蛋白的合成等，提高肿瘤细胞的浸润及转移能力[4]；存活蛋白（survivin）的高表达能够通过抑制肿瘤细胞凋亡，从而参与肿瘤进展[5]。部分研究探讨了survivin或Fascin蛋白在结直肠癌和卵巢恶性上皮性肿瘤发生中的作用，认为Fascin和survivin蛋白高表达与肿瘤进展有关[5-6]，但缺乏有关二者与结直肠癌患者临床特征关系的分析。为进一步揭示Fascin和survivin蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义，从而为结直肠癌的诊疗提供理论基础，本研究回顾性分析了67例结直肠癌患者的临床资料，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年1月至2017年12月于中国人民解放军第180医院诊治的结直肠癌患者的临床资料，收集患者的结直肠癌组织标本及相应的癌旁组织（距肿瘤边缘＞5 cm）标本。纳入标准：①均经病理组织学确诊；②术前均未行放化疗等治疗。排除标准：①临床资料不完整者；②合并其他恶性肿瘤者。根据纳入和排除标准，本研究共纳入67例结直肠癌患者。67例患者中，男39例，女28例；年龄24～67岁，中位年龄51岁；结肠癌40例，直肠癌27例。

1.2 免疫组织化学染色法

首先石蜡切片脱蜡入水，然后应用过氧化氢封闭内源性过氧化物酶（3%H2O2，室温避光放置10 min），磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封闭处理，37℃，15 min。用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加一抗，37 ℃，2 h；滴加生物素化的二抗，37 ℃，40 min；PBS冲洗5 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素复染，加拿大树胶（或中性树胶）封片。

1.3 结果判断

survivin蛋白主要定位于细胞核，Fascin蛋白主要定位于细胞质，阳性表达呈黄色或棕黄色颗粒。在高倍镜下随机选取5个视野，根据阳性细胞比例和染色强度评分的乘积进行判断，总分≥4分为阳性表达，＜4分为阴性表达[3]。根据阳性细胞比例进行评分：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。根据染色强度进行评分：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman秩相关性分析；多因素分析采用Logistic回归分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 survivin和Fascin蛋白在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达

结直肠癌组织中survivin和Fascin蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1、图1）

表1 67例结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁组织中survivin和Fascin蛋白阳性表达率的比较[n（%）]

图1 结直肠癌组织和相应癌旁组织中survivin和Fascin蛋白的表达情况（免疫组织化学染色，×100）

2.2 survivin和Fascin蛋白阳性表达率与结直肠癌患者临床特征的关系

Dukes分期为C～D期、有淋巴结转移的结直肠癌患者的survivin蛋白阳性表达率明显高于Dukes分期为A～B期、无淋巴结转移的患者，Dukes分期为C～D期、有淋巴结转移、中低分化的结直肠癌患者的Fascin蛋白阳性表达率明显高于Dukes分期为A～B期、无淋巴结转移和高分化患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）；不同年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径的结直肠癌患者的survivin和Fascin蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

2.3 survivin与Fascin蛋白表达情况的相关性分析

经Spearman秩相关性分析，survivin与Fascin蛋白的表达呈正相关（rs=0.441，P＜0.05）。（表3）

表3 survivin与Fascin蛋白的表达情况

2.4 survivin和Fascin蛋白阳性表达影响因素的多因素分析

将单因素分析中差异有统计学意义的变量纳入Logistic多因素回归分析。结果显示，Dukes分期和淋巴结转移情况是survivin蛋白阳性表达的独立影响因素（OR=3.508、3.016，P＜0.01）；Dukes分期、淋巴结转移情况和分化程度是Fascin蛋白阳性表达的独立影响因素（OR=3.022、2.787、2.627，P＜0.01）。（表4、表5）

表4 survivin蛋白阳性表达影响因素的多因素Logistic回归分析

表5 Fascin蛋白阳性表达影响因素的多因素Logistic回归分析

3 讨论

结直肠癌的早期诊断水平较低，整体生存预后较差，其早期诊断方式主要包括血清学检查和超声检查，虽然能够在疾病的诊断过程中发挥重要的参考价值，但局限性较为明显。而在治疗方面，手术治疗、免疫靶向治疗和静脉化疗虽然能够改善结直肠癌患者的临床症状，抑制病情进展，但长期的临床随访研究显示，结直肠癌患者综合性治疗后的5年生存率仍不足35%，严重并发症的发生率可达8%以上[7-8]。通过对相关免疫组化指标的研究，能够为临床上结直肠癌的诊断和治疗提供新的作用靶点及理论参考。

survivin蛋白主要存在于未成熟的胚胎组织中，在成年人恶性肿瘤细胞的发生过程中，survivin蛋白可以通过对细胞周期依赖性蛋白激酶的调控作用，影响细胞周期，提高G1/S细胞比例。研究显示，survivin蛋白能够抑制肿瘤细胞的程序性凋亡，促进肿瘤细胞的持续性增殖[9-10]。Fascin蛋白能够参与肿瘤细胞骨架结构、肌动蛋白或伪足的形成，提高肿瘤细胞变形及突破基底膜的能力，导致肿瘤细胞的转移风险增加。有研究显示，Fascin蛋白能够提高肿瘤细胞对淋巴管内皮细胞和血管内皮细胞的黏附能力，促进恶性肿瘤的进展[11-12]。

本研究结果显示，survivin和Fascin蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01），提示survivin和Fascin蛋白均可能影响结直肠癌的病情进展。survivin和Fascin蛋白高表达主要通过以下机制促进病情进展[13]：①survivin蛋白高表达可抑制肿瘤凋亡抑制因子α的表达水平，抑制肿瘤细胞凋亡，打破肿瘤细胞增殖与凋亡的平衡状态；②Fascin蛋白可以对肿瘤细胞的α-肌动蛋白和细胞骨架结构产生影响，提高肿瘤细胞的浸润能力，促进肿瘤细胞对邻近正常结直肠上皮组织的侵袭。徐万宇和徐德[14]认为，survivin蛋白高表达能够促进直肠癌患者临床转归的恶化，导致肿瘤细胞病理分级升高，影响直肠癌患者放化疗等综合性治疗的敏感性。免疫组化染色结果显示，survivin和Fascin蛋白分别表达于结直肠癌细胞的细胞核及细胞质中，特别是在异型性较高的肿瘤细胞周边，survivin和Fascin蛋白的染色程度更深。本研究结果显示，survivin蛋白表达与结直肠癌患者的Dukes分期和淋巴结转移情况有关，这主要是由于survivin蛋白能够促进肿瘤细胞对深肌层的浸润，提高肿瘤细胞对淋巴管内皮细胞的黏附能力；Fascin蛋白表达不仅与结直肠患者的Dukes分期和淋巴结转移情况有关，同时也与分化程度密切相关，这主要是由于Fascin蛋白能够导致结直肠癌细胞分化成熟调控障碍。部分研究者分析了survivin蛋白表达与肿瘤患者的临床特征后，并不认为survivin的高表达能够影响淋巴结转移[13]，存在相关差异考虑与肿瘤患者的基础性疾病、指标检测的敏感度差异有关。本研究还发现，survivin与Fascin蛋白的表达呈正相关，提示二者在促进结直肠癌患者病情进展的过程中可能发挥了一定的协同作用。此外，本研究结果显示，Dukes分期和淋巴结转移情况是survivin蛋白阳性表达的独立影响因素（P＜0.01），Dukes分期、淋巴结转移情况和分化程度是Fascin蛋白阳性表达的独立影响因素（P＜0.01）。提示survivin和Fascin蛋白的表达与结直肠癌患者的临床特征具有一定的关系，这主要与survivin和Fascin蛋白能够影响结直肠癌细胞的生物学特征有关。

综上所述，survivin和Fascin蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率较高，且其阳性表达与患者的临床特征有关，后续研究可以进一步探讨survivin和Fascin蛋白表达与结直肠癌患者生存预后的关系。