吴茱萸碱降低2型糖尿病大鼠血糖水平

董坤伦，陶 雷，杨 洁，尚军洁

(南阳市第二人民医院 内分泌科，河南 南阳 473000)

近年来糖尿病发病率逐渐上升且发病年龄呈年轻化的趋势，推测到2025年全世界糖尿病患者将达到3亿[1]。90%的糖尿病患者是2型糖尿病。吴茱萸碱(evodiamine, Evo)具有多种药理活性，如降血脂、降血糖、抗感染和抗肿瘤等[2]。关于Evo治疗糖尿病的报道很多，但其机制研究尚缺乏。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物：清洁级SD大鼠50只，雌性(郑州大学实验动物中心，合格证号：SCXK 20150003)。

1.1.2 实验试剂：吴茱萸碱(阿拉丁试剂有限公司)；葡糖氧化酶试剂盒(西安舟鼎国化学试剂有限公司)；胰岛素放免试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)；NF-κB与TLR4抗体(Santa Cruz公司)；其余试剂为国产试剂纯。

1.2 实验方法

1.2.1 大鼠分组及处理：将大鼠分为对照组、2型糖尿病大鼠模型组[3]和吴茱萸碱低、中及高剂量干预组，分别用吴茱萸碱10、20和40 mg/kg灌胃，1次/d，连续给药4周。

1.2.2 生化指标的检测：用试剂盒每周1次检测空腹血糖与血清胰岛素水平。

1.2.3 糖耐量的测定(OGTT)：末次给药后，各组大鼠禁食3 h，鼠尾采血测定血糖值；大鼠口服葡萄糖(2.0 g/kg)，测定30、60与120 min的血糖值，绘制糖耐量曲线，观察吴茱萸碱对糖尿病大鼠糖耐量水平的影响。

1.2.4 HE染色观察肝脏组织：常规切片观察。

1.2.5 免疫印迹法：末次给药后，分离肝脏，剪碎，冰上匀浆，加入裂解液30 min，4 ℃12 000×g离心5 min，取上清液，提取总蛋白并测定蛋白浓度，每道加入50 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，电转至PVDF膜上，用含10%脱脂奶粉的PBS缓冲液封闭1 h，加入相应一抗，4 ℃孵育过夜，再加入相应二抗，室温孵育1 h，化学发光法显色，成像扫描分析系统保存图像。

2 结果

2.1 吴茱萸碱对糖尿病大鼠血糖与血清胰岛素水平的影响：与正常对照组相比，模型组大鼠的血糖水平显著升高，血清胰岛素水平显著下降(P<0.05)，Evo干预使血糖水平明显回落，血清胰岛素水平明显回升(表1)。

表1 吴茱萸碱对糖尿病大鼠血糖与血清 胰岛素水平的影响

*P<0.05 compared with control；#P<0.05 compared with diabetes group.

2.2 吴茱萸碱对糖尿病大鼠糖耐量水平的影响：与正常对照组相比，糖耐量曲线下面积显著增加(P<0.05)；与模型组相比，Evo干预使血糖随剂量增大而糖耐量曲线下面积逐渐减小(P<0.05)(图1，2)。

2.3 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏病理学形态的影响：模型组大鼠的肝脏组织出现明显炎性细胞浸润，组织间有空隙；Evo给药4周后，大鼠肝脏组织的炎性细胞浸润程度随处理药物增大而减少，组织间隙减少(图3)。

2.4 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏中NF-κB蛋白表达的影响：与正常对照组相比，模型组大鼠肝脏的NF-κB蛋白表达显著上升；Evo干预4周后，NF-κB蛋白表达随剂量增大而逐渐回降(图4)。

图1 吴茱萸碱对糖耐量曲线的影响Fig 1 Effect of Evo on the glucose tolerance curve

*P<0.05 compared with control； #P<0.05 compared with DIA图2 吴茱萸碱对糖耐量曲线下面积的影响Fig 2 Effect on the area under the glucose tolerance

图3 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏病理学形态的影响Fig 3 Effect on the pathological morphology of liver by Evo

2.5 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏中TLR- 4蛋白表达的影响：与正常对照组相比，模型组大鼠肝脏的TLR- 4蛋白表达显著上升； Evo干预4周后，大鼠肝脏中TLR- 4蛋白表达随剂量增大而逐渐下降(图5)。

3 讨论

实验发现，吴茱萸碱能够显著降低2型糖尿病大鼠空腹血糖值，而且能够降低糖耐量水平，提示吴茱萸碱可能控制2型糖尿病大鼠空腹与餐后血糖水平。对大鼠胰腺的病理组织观察，发现吴茱萸碱对糖尿病大鼠胰腺具有保护作用，抑制胰岛细胞的减少，推测吴茱萸碱可能具有保护2型糖尿病大鼠胰腺的作用。

TLR4在肝损伤中具有重要的作用，启动NF-κB信号通路，诱导靶基因的转录，诱导多种炎性反应和细胞因子分泌。实验结果发现，吴茱萸碱能够降低2型糖尿病大鼠肝脏中NF-κB与TLR4的蛋白表达，推测吴茱萸碱可能通过抑制NF-κB与TLR4的表达，从而抑制炎性反应的加重，减轻肝脏损伤，同时减少胰岛细胞的萎缩。

*P<0.05 compared with control； #P<0.05 compared with DIA图4 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏中NF-κB 蛋白表达的影响Fig 4 Expression of NF-κB in the liver of diabetic rats after treated by Evo(n=6)

*P<0.05 compared with control； #P<0.05 compared with DIA图5 吴茱萸碱对糖尿病大鼠肝脏中TLR- 4 蛋白表达的影响Fig 5 Expression of TLR- 4 in the liver of diabetic rats after treated by n=6)