β-纤维蛋白原455G/A基因多态性与中国汉族人群脑白质病变的关系研究

伏 兵， 李 敏， 董万利

脑白质病变(white matter lesions，WML)常常在老年人头部MRI检测到，与卒中和痴呆密切有关[1，2]。WML的危险因素、机制尚未明确，研究表明止血因子在WML的发生发展中起着重要作用，高水平的纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)会降低纤溶活性，降低血液流动，导致血栓形成[3]，FIB水平升高增加卒中的风险[4]，FIB与缺血性脑卒中复发密切相关[5]。β-纤维蛋白原基因(β-fibrinogen gene，FGB)是FIB分子合成的关键限速步骤，是影响血浆FIB水平的重要因素。研究显示[6～8]，FGB-455G/A多态性与脑血管病的关系密切，可能是缺血性脑血管病的危险因素，与中国人群脑梗死发病风险增加相关。目前FIB和WML之间的关系尚未阐明，FGB-455G/A基因多态性与中国汉族人群的WML关系未见相关研究。本研究探讨FGB-455G/A不同基因型的血浆FIB水平，并阐明FIB和FGB-455G/A基因多态性与中国汉族人群WML的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2014年10月～2016年3月于连云港市第二人民医院神经内科住院患者269例，其中男149例，女120例，平均年龄为(63.89±9.58)岁，均为汉族人群且无血缘关系，所有研究对象均签署知情同意书，均行头部MRI检查。入组标准：(1)年龄45～80岁；(2)符合缺血性脑白质病变的诊断标准[9]；(3)同意行头部MRI检查。排除标准：(1)急性卒中者；(2)既往脑卒中者；(3)其他病因如免疫、缺氧、中毒、遗传等所致者；(4)服用叶酸及B族维生素者；(5)认知功能障碍者；(6)心肺肝肾等功能障碍者；(7)不能完成头部MRI检查者。根据头部MRI结果分组：(1)WML组：共收集177例，其中男98例，女79例，平均年龄(66.16±9.12)岁。改良Scheltens评分≥1分。(2)对照组：头部MRI证实无脑白质病变(改良Scheltens评分0分)为对照组。为同期在我科住院患者，共收集92例，其中男51例，女41例，平均年龄(59.54±8.95)岁。

1.2 一般资料 记录研究对象 年龄、性别、吸烟史(每天吸烟≥1支，持续1 y以上)、高血压(有明确高血压病史或至少两次测量血压>140/90 mmHg)、糖尿病(有糖尿病病史或出院时诊断糖尿病)、冠心病史(包括心绞痛和心肌梗死)等临床资料。

1.3 实验室检查 所有患者均常规禁食8～12 h后，清晨抽取空腹血标本，送至我院检验科进行检测，包括血常规、FIB、肝功能、肾功能、空腹血糖、TC、TG、HDL-C、LDL-C等指标。

1.4 头部MRI评分 采用改良Scheltens量表[10]对WML组患者行头部MRI评分，德国SIEMNS ESSENZA 1.5T MRI，常规行T1、T2及FLAIR序列。由两名不清楚患者临床信息且经验丰富的影像科医师独立判读患者的MRI影像。

1.5 基因组DNA提取 抽取所有入组研究对象肘静脉血4 ml(用于提取基因组DNA)，置于EDTA 抗凝管中，编号后放置于-80 ℃冰箱。使用Axygen公司的试剂盒提取基因组DNA，按照说明书操作。

2 结 果

2.1 脑白质病变组血浆FIB水平与改良Scheltens量表评分的关系 根据血浆FIB水平，分析WML组患者不同FIB水平的改良Scheltens量表评分，结果显示，WML改良Scheltens量表评分与FIB水平呈正相关，差异有统计学意义(P=0.006)(见表1)。

2.2 FGB-455G/A各基因型间血浆FIB水平比较 FGB-455G/A位点以GG、GA、AA基因分组，比较各组血浆FIB水平：AA组血浆FIB水平最高，其次GA组，组最低，组间差异有统计学意义(P<0.01)(见表2)。

2.3 两组FGB-455G/A基因频率和等位基因分布比较 经χ2检验，FGB-455G/A基因型频率分布两组间差异无统计学意义(χ2=0.093，P=0.955)；WML组的A等位基因频率与对照组比较，差异无统计学意义(χ2=0.047，P=0.828)(见表3)。

表1 不同FIB水平改良Scheltens量表评分比较

表2 FGB-455G/A各基因型间血浆FIB水平比较

表3 两组FGB-455G/A多态性分布比较[n(%)]

3 讨 论

WML在老年人群的头CT/MRI检查中常见，随着认识的深入，已经证实WML 与认知功能障碍、卒中等疾病密切相关，具有重要的临床意义。目前WML的发病机制仍未阐明，可能与内皮细胞功能障碍、BBB破坏及慢性脑灌注不足等相关[11～13]。

FIB是分子量为340 KDa的血浆糖蛋白，血栓形成的前体物质，其含量与血浆黏度密切相关[14]。FIB参与血栓形成、动脉粥样硬化等过程，是重要的凝血因子。高FIB水平导致血液黏度增高，引起脑小血管的血流动力学异常[15]，腔隙性梗死患者FIB水平明显升高[16]。研究发现，FIB与卒中患者的WML呈独立正相关[17]，与WML的进展显著相关[18]，证据支持FIB在WML中起到关键作用。

在脑小血管病患者中血浆FIB水平与WML呈显著相关性[19]。Wada等[20]纳入667例社区老年人群，通过横断面研究发现FIB是WML的独立危险因素，且与WML的严重程度密切相关。本研究结果显示FIB水平与WML的程度呈正相关，与上述研究结果相一致。一些研究报道结果相反，血浆FIB水平与WML无显著相关[21，22]，Hainsworth等[23]采用血浆免疫组化标记的FIB定量血脑屏障功能障碍，研究发现FIB与脑白质异常无显著相关性，但WML时，高FIB水平与痴呆的风险增加密切相关(OR=2.26；95%CI，1.25～4.08，P=0.007)。

近年来，证据表明遗传因素与WML的发病及进展密切相关。WML不同人群中具有高度遗传性[24]。明确WML的遗传因素有利于早期发现，做到早期诊断、个体化治疗及预防。既往WML遗传学研究[25，26]多集中于肾素-血管紧张素系统的多态性，有研究显示其与WML存在一定的相关性。Hofer等[27]分析来自10个队列的7773例研究对象，结果表明，一些遗传因素(包括ACE、MTHFR、AGT、TRIM、NOTCH3和APOE4)与中老年WML的进展无显著关联。

FIB由2组完全对称的分子构成，每组分子由α、β和γ 3条多肽链组成，β链是FIB 3条链中的核心链，当β链过表达时，FIB水平显著增加[28]。FIB的β链由FGB独立基因编码，FGB基因包含8个外显子，编码461个氨基酸残基的β链。血浆FIB水平的变化主要有FGB调控决定，目前研究主要集中分析FGB基因多态性。FGB-455G/A基因多态性中发现最早、研究最多的位点。由于其对脑血管病的积极意义，至今仍是国内外研究的热点。

既往研究[29，30]证实FGB-455 A等位基因与血浆FIB水平升高正相关，本研究结果与之相一致，AA基因型血浆FIB水平显著高于GG型，可能通过调控FIB水平参与了WML的发病及进展。许多研究探讨了FGB-455G/A基因多态性与缺血性脑卒中风险的关系。一项FGB-455G/A基因多态性与缺血性脑卒中的风险关联的大样本荟萃分析，共纳入8719各研究对象，结果表明，FGB-455G/A多态性与亚洲人群缺血性卒中风险显著相关，是亚洲成年人缺血性卒中的危险因素，FGB-455G/A基因多态性可能是一个敏感的缺血性脑卒中的预测因子[31]。这些研究结果支持FGB-455G/A基因多态性与中国人群缺血性脑卒中密切相关。

FGB-455G/A基因多态性与WML的关系未见研究报道，与脑小血管病的关系鲜有报道。多因素Logistic回归分析发现FGB-455A等位基因与多发腔隙性梗死显著相关[32]。在韩国CSVD人群中，研究发现FGB-455G/A基因多态性无显著差异性，FGB-455G/A基因多态性与FIB水平升高显著相关[33]。FGB-455G/A基因多态性与中国汉族人群WML的发病及机制尚未见研究报道，本研究结果表明FGB-455G/A基因多态性与中国汉族人群WML无显著相关性。有关FGB-455G/A基因多态性和WML之间的关系及机制还需进一步探讨。本研究的样本量较小，以后的研究需要大样本研究来阐明这种关系，围绕 WML的相关生物学标志物及基因多态性等方面开展。研究两者间的关系及机制有助于筛查WML的高危人群，为WML早期诊断、个体化治疗和预防决策提供思路和依据。