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原子吸收分光光度法测定牛黄解毒丸中雄黄的含量

2018-10-09贡庆欣

中国中医药现代远程教育 2018年18期
关键词:原子化牛黄药典

贡庆欣

(吉林省通化市食品药品检验所化学室,吉林 通化 134000)

牛黄解毒丸为清热解毒类常用中药,被列入国家基本药物目录,现收载于《中华人民共和国药典》2015年版一部[1]。该方始见于元代 (1278年)《咽喉脉证通论》,由人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草8味药组成,临床上主要用于火热内盛、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮、目赤肿痛[1]。牛黄解毒丸历经数百年发展,因其用途广泛、疗效确切,成为深受患者青睐的清热解毒名方,并发展出牛黄解毒片等新剂型,得到越来越多的应用[2]。

雄黄收载于2015年版《中国药典》一部,其主要成分是二硫化二砷 (AS2S2),是国务院在《医疗用毒性药品管理办法》中规定的28种毒性中药之一[1,3]。雄黄入药始载于《神农本草经》 (称黄食石),在我国临床应用已有两千多年的历史,是中医内治外用的常用药之一,也是很多复方中药的重要组成,许多常用中药制剂都含有雄黄,如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸、局方至宝散等[1,3-4]。由于雄黄含砷,临床屡有报道大量或长时间服用含雄黄或外用雄黄的制剂造成急、慢性中毒,因此雄黄及其复方的安全性问题受到了国内外医学界的质疑,影响了含雄黄中成药的国际声誉[3]。近年来含雄黄中成药多次被曝出重金属(主要是砷)超标等问题,其安全性受到越来越多的关注[5-9]。牛黄解毒丸作为最常用的含雄黄中成药,2015年版《中国药典》一部对其雄黄仅规定了显微鉴别和三氧化二砷检查,没有含量方面的规定,无法对雄黄质量进行有效控制[1]。为完善药品质量标准,保证临床用药安全有效,本实验采用原子吸收分光光度法对雄黄中的砷进行了定量分析,介绍如下。

1 试剂与试药

Agilent 200 SeriesAA型原子吸收分光光度计及工作站 (美国Agilent公司);CEM MARS高通量密闭微波消解仪 (美国CEM公司);砷空心阴极灯 (北京有色金属研究总院),砷 (As)单元素标准溶液 (1000 μg/mL,编号GBW08611,批号17123,中国计量科学研究院);AL104电子天平;盐酸和硝酸均为优级纯,水为超纯水;牛黄解毒丸15批,均为市售样品,来自12家药品生产企业。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 对照品贮备溶液的制备 精密量取砷单元素标准溶液适量,加水制成每 1 mL含砷100 μg的溶液,即得。

2.1.2 标准曲线溶液的制备 精密量取砷对照品贮备溶液适量,加10%混合酸 [硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL 含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液,作为砷标准曲线溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品10丸,剪碎,混匀,精密称取0.2 g,置聚四氟乙烯微波消解罐中,加入硝酸4 mL、盐酸1 mL,在微波消解仪中消解,消解条件:功率1600 W,5 min内由室温升至120℃,在120℃保持5 min,在5 min内由120℃升温至160℃,在160℃保持5 min,然后5 min内由160℃升温至180℃,在180℃保持20 min,最后25 min内由180℃降温至30℃。消解液放冷,转移至50 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取5 mL,置50 mL量瓶中,加10%混合酸[硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液稀释至刻度,摇匀,即得。同法制备试剂空白溶液。

2.1.4 测定法 精密吸取标准曲线溶液、供试品溶液和试剂空白溶液,照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器,标准曲线法)[10],在 193.7 nm波长处测定,计算,即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 阴性干扰试验 按处方工艺制备不含雄黄的牛黄解毒丸阴性样品,取6份,按2.1实验方法测定砷的含量,结果6份样品均未检出砷。说明样品中除雄黄外的其他7味药材对砷的含量测定没有干扰,该方法专属性良好。

2.2.2 线性关系考察 精密量取砷对照品贮备溶液适量,加 10%混合酸 [硝酸-盐酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液,照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器,标准曲线法)[10],在193.7 nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标 (Y,mL),以浓度为横坐标 (X,μg/mL),得回归方程Y=5.295×10-3x+7.996×10-3,r=0.999 5。结果表明砷的浓度在0~20 μg/mL与吸光度之间线性关系良好。

2.2.3 重复性试验 称取同一批号牛黄解毒丸 (批号15090832),剪碎,混匀,取约0.2 g,精密称定,共6份,按2.1项下方法测定砷的含量,结果平均含量为21.06 mg/g, RSD为1.26%,表明方法的重复性良好。

2.2.4 稳定性试验 称取同一批号牛黄解毒丸 (批号15090832),剪碎,混匀,取约0.2 g,精密称定,共6份,分别放置0、2、4、8、12、24 h,按2.1项下方法测定砷的含量,结果RSD为1.35%,表明在24 h内的稳定性良好。

2.2.5 加样回收试验 精密称取已知砷含量的牛黄解毒丸 (批号15090832,As含量21.10 mg/g)6份,每份约0.1 g,精密加入砷单元素标准溶液 (1000 μg/mL)2 mL,混匀,按2.1实验方法测定回收率,结果见表1。结果表明,该方法的准确性良好。

表1 回收率测定结果 (n=6)

2.3 样品中砷的测定 精密称取15批不同批号的牛黄解毒丸样品,每批随机取3份,每份约0.2 g,按2.1方法测定砷的含量。结果见表2。

表2 牛黄解毒丸中砷含量测定结果 (n=3)

3 讨论

目前测定砷含量的方法主要有容量法[11-12]、原子吸收分光光度法 (AAS)[13-14]、电感耦合等离子体原子发射光谱法 (ICP-AES)[15]、电感耦合等离子体质谱法 (ICPMS)[16-17]等。与AAS法相比,容量法存在操作繁琐、灵敏度低、取样量大、有时消化不完全等缺点;ICP-AES法和ICP-MS由于灵敏度太高,当样品中砷含量较高时,容易导致仪器被污染。AAS法灵敏度高、专属性强,适合应用于中成药中雄黄的含量测定。

由于本品处方中雄黄含量较高,用石墨炉原子化器容易导致石墨炉被污染,用氢化物发生原子化器操作比较繁琐,选择火焰原子化器操作相对简便,能够满足实验要求。

实验中选择不同的消解试剂进行比较,即硝酸、硝酸-盐酸 (4∶1)、硝酸-盐酸 (3∶2)、硝酸-过氧化氢 (4∶1),结果选择硝酸-盐酸 (4∶1)消解效果最好。同时还对微波消解的不同升温条件进行了比较,结果在正文中的升温条件下消解最完全。

采用本文方法对15批牛黄解毒丸中雄黄的砷含量进行了测定,15批供试品中砷含量为8.32~21.10 mg/g,按每丸重3 g计算,每丸砷含量在24.96~63.30 mg,不同厂家、批次的样品含量差异较大,最高与最低相差超过1倍。分析原因可能是(1)有的企业对所采购的雄黄药材未进行含量检测,或未按 《中国药典》规定对雄黄进行水飞炮制,可能采用不合格雄黄生产; (2)由于《药典》对牛黄解毒丸中的雄黄未规定含量测定,有的企业在生产过程中有意减少雄黄的投料量,未按照处方规定加入足量的雄黄。

由于牛黄解毒丸处方中只有雄黄中含砷,可以通过测定砷的含量控制制剂中雄黄的含量。

建议 《中国药典》 增加牛黄解毒丸中雄黄的含量测定,以有效控制生产投料,保证药品质量。

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