结核感染T细胞斑点试验及结核抗体检测对肺外结核病的诊断价值*

谢刚强，唐 甦，李 洁,甘昭平

1.陕西省安康市中医医院呼吸科(安康 725000),2.陕西省结核病防治院(西安710000)

主题词 结核, 肺/诊断 @结核感染T细胞斑点试验 @结核抗体

结核病主要是结核分歧杆菌引发的一类慢性传染病，其可累及患者全身的各个系统和器官，对患者的健康产生严重危害。近几年来发现，我国肺外结核患者的比例有增加趋势，这就对早期诊断肺外结核提出了更高的要求[1]。当前结核病的诊断依旧主要依靠细菌学检测结果判定，但此种诊断方式的涂片敏感性较差，且平均检出率甚至只有30%左右，较难区分是否是死菌、活菌还是非结核分歧杆菌。有报道指出[2]，结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)及结核抗体实验也可对肺外结核进行诊断，但两者之间何种方式更具应用价值，临床报道较少。鉴于此，本文通过比较分析T-SPOT.TB实验以及结核抗体实验这两种诊断方式针对肺外结核的临床诊断价值，旨在为临床诊断治疗提供数据支持。

资料和方法

1 一般资料 选择从2014年3月到2016年3月在医院就诊的疑似肺外结核病患者50例纳入本次研究。男28例，女22例；年龄21～62岁，平均(33.67±1.83)岁。所有患者均在入院之后接受痰抗酸杆菌的涂片检查1～3次和PPD实验，以及胸部X线和CT检查，并给予血结核抗体的胶体金法以及实验室检查，确诊非结核患者7例，年龄21～60岁，平均(32.96±1.99)岁。肺外结核患者43例，年龄22～62岁，平均(33.02±2.01)岁。其中结核型脑膜炎10例，结核型腹膜炎23例，结核型胸膜炎10例。本次研究已获得患者的签字知情同意，并报送医院的伦理委员会审批通过。

2 研究方法 分别对所有患者进行结核抗体实验以及T-SPOT.TB实验检查。①结核抗体实验：测定血清标本内38kD-IgG。利用产自上海奥普生物医药公司的结核分歧杆菌的抗体胶体金法试剂盒进行操作。通过斑点免疫胶体金有关渗滤法对结核分歧杆菌的特异型膜蛋白抗原实施分离纯化，操作时需点样固定于硝酸纤维膜中，此膜上的抗原可捕获抗体，而被捕获的IgG抗体能够通过葡萄球菌A蛋白的胶体金缀合物产生标记呈色反应，按照是否出现红色斑点即可判断出结核分歧杆菌的抗体。②T-SPOT.TB实验检查：测定外周血抗凝全血内的由抗原刺激而活化的有关效应T细胞，通过T-SPOT.TB试剂盒实施操作。利用肝素抗凝管为患者采集5ml的外周静脉血，经密度梯度离心法将外周血中的单个核细胞进行分离，为已经包被抗体的相应微量板中4个孔依次加进进阳性对照的植物血凝素和阴性对照的细胞培养液，以及A抗原早期分泌型靶抗原-6和B抗原的滤液培养蛋白-10。再为每个孔加进单个核细胞，共同放置在培养箱内给予温孵育约16～20 h。经PBS脱洗，加进由碱性磷酸酶所标记的相关抗干扰素抗体行2 h孵育，经PBS洗脱和显色，终止。最后人工对斑点数进行计数，阴性对照斑点数是0～5个，而抗原A/B斑点数超过阴性对照的斑点数6个记作阴性。阴性对照斑点数超过6个，而抗原A/B斑点数超过2倍的阴性对照斑点数记作阳性。

3 观察指标 分析T-SPOT.TB实验与结核抗体实验的检测结果，对比T-SPOT.TB实验与结核抗体实验对于肺外结核病的检测价值。

4 统计学方法 通过SPSS20.0统计软件分析，数据的比较采用确切概率法进行评价，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 T-SPOT.TB实验的检测结果分析 T-SPOT.TB实验的检测结果显示，阳性患者42例，占84.00%；阴性8例，占16.00%，见表1。

表1 T-SPOT.TB实验的检测结果分析(例)

2 结核抗体实验的检测结果分析 结核抗体实验的检测结果显示，阳性患者40例，占80.00%，阴性患者10例，占20.00%，见表2。

表2 结核抗体实验的检测结果分析(例)

3 T-SPOT.TB实验与结核抗体实验对于肺外结核病的检测价值对比 T-SPOT.TB实验对于肺外结合病的诊断灵敏度为88.37%，特异度为42.86%，准确度为82.00%，均分别明显高于结核抗体实验的81.40%、28.57%、78.00%，见表3。

表3 T-SPOT.TB实验与结核抗体实验对于 肺外结核病的检测价值对比[%(例/n)]

讨 论

结核病作为可长期危害人类身体健康的一类慢性型传染病，患者在遭受结核分歧杆菌的感染之后会影响其机体的细胞免疫及体液免疫功能。当前针对结核病的临床诊断主要依靠患者的胸部X线以及痰细菌学检测，然而尽管细菌学检测可作为结核病的一个金标准，但操作较为繁琐，常需多次反复地送检，较难在早期时即得到确诊[3]。加之肺外结核通常起病隐匿，且临床症状并不典型，较易引起疾病误诊，寻找更具诊断价值的临床诊断方式对于早期确诊肺外结核病患者而言意义重大。

本文通过分析T-SPOT.TB实验以及结核抗体实验这两种诊断方式针对肺外结核的临床诊断价值，结果发现，T-SPOT.TB实验对于肺外结合病的诊断灵敏度为88.37%，特异度为42.86%，准确度为82.00%，均分别明显高于结核抗体实验的81.40%、28.57%、78.00%，这提示T-SPOT.TB实验较结核抗体实验对于肺外结核的诊断价值相对更高。分析原因，笔者认为这可能是因为T-SPOT.TB与结核抗体依次反映了患者机体对于结核产生的体液免疫及细胞免疫情况。结核患者的不同病情或相同患者的疾病阶段存在差异时，其自身含有的体液免疫以及细胞免疫平衡被打破，如处于活动性结核的时期常会致使免疫功能降低，抗体滴度上升，而在恢复期和稳定期时患者的细胞免疫功能上升，抗体滴度降低[4-5]。而T-SPOT.TB实验能在结核感染早期亦或是既往存在感染的患者体内检出效应T细胞，不仅敏感度较高，同时还还具有检测时间短的优点，通常在24 h即可得到检测结果。T-SPOT.TB实验主要是通过ELISA技术包含的基本原理自单细胞水平测定细胞因子的细胞免疫学手段，其通常利用ESAT-6及CFP-10两种优化结核分歧杆菌具有的特异抗原混合多肽对机体中T淋巴细胞产生刺激后形成的IFN-γ以诊断结核感染的存在情况[6-8]。结核抗体则常于结核病中晚期时产生，在发病早期进行检测可能会存在结果的假阴性症状。其检测原理是通过纯化的结核分歧杆菌的胞壁蛋白38kD抗原测定血清内对应的IgG抗体[9-13]。其中38kD蛋白抗原属于脂蛋白的一种，可定位于质膜中，能够刺激B细胞形成相应的抗体。

需要说明的是，肺外结核患者机体中T细胞淋巴因子常具有复杂的分型，且细胞环境还可能对细胞因子反应产生影响，部分经T-SPOT.TB实验检查结果发现的改变也可能是因为患者的体内环境发生变化而导致。国外有报道指出[14-15]，伴随抗结核治疗过程的进行，利用T-SPOT.TB实验检测的阳性率呈现出迅速下降的趋势，甚至可能直接转为阴性。因此，临床诊断时可尝试将T-SPOT.TB实验与结核抗体实验联合进行诊断，这将更有利于提升诊断的正确率。

综上所述，T-SPOT.TB实验与结核抗体实验相比，在诊断肺外结核患者的价值上具有更好的作用，但为进一步提升诊断准确率，应考虑将T-SPOT.TB实验与结核抗体实验联合进行诊断，值得临床重视。