硝矾洗剂的制备工艺研究

皮凤娟，黄 娟，张庆莲，张世波，赵 领，刘 浩

(1.泸州市中医医院，泸州 646000；2.西南医科大学药学院，泸州 646000)

硝矾洗剂是泸州市中医医院(以下简称我院)的临床协定方，是我院肛肠科根据临床经验用药组方而成。该制剂处方由大黄、黄柏和苍术等组成，具有清热解毒、消肿止痛和收湿止痒的作用[1-2]，临床主治痔疮，已使用多年，疗效显著、不良反应小、安全可靠。但其中药成分复杂、药效各异，对本复方的整体提取不能只参照文献中单味药材的提取方法。为进一步开发本复方制剂，本文立足于中药复方的整体性，在保留传统中药汤剂特点的基础上，以君药大黄中的总蒽醌含量和干浸膏得率为指标，通过正交实验法对其制备工艺进行研究，为进一步开发院内制剂奠定基础。

1 仪器与试药

1.1仪器 戴安高效液相色谱仪，包括四元泵、紫外检测器和自动进样器等(美国戴安公司)；FA2004型电子天平(上海安亭电子仪器厂)。

1.2试药 大黄酸对照品，大黄素对照品，大黄素甲醚对照品，芦荟大黄素对照品以及大黄酚对照品(批号分别为110757-200206，110756-200110，110758-201013，110795-201007和110796-201017)，均购自中国食品药品检定研究院；大黄(批号150623)、黄柏(批号15060102)、苍术(批号150325)和白矾(批号150612)药材，均由泸州天植中药饮片有限公司提供；冰片(批号130309)，由四川青神康华制药有限公司提供；芒硝(批号D1312034)，由四川新荷花中药饮片股份有限公司提供；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1单因素实验

2.1.1提取时间考察 按照处方量的1/3准确称取药材(大黄，黄柏和苍术)各4份，固定提取次数为3次，加水倍量为10倍，依次提取0.25，0.5，1和2 h，综合评分分别为60.10，80.36，95.54和99.09。结果表明，提取2 h的分数最高，但提取1 h的总蒽醌含量比2 h高，且提取2 h耗能多，故选择提取时间为1 h[3-5]。

2.1.2提取次数考察 按照处方量的1/3准确称取药材(大黄，黄柏和苍术)各3份，固定提取时间为1 h，加水倍量为10倍，依次提取1，2和3次，综合评分分别为54.63，84.86和99.96。从综合评分来看，提取3次的分数最高且与其他2个相差较大，故选择提取次数为3次。

2.1.3加水倍数考察 按照处方量的1/3准确称取药材(大黄，黄柏和苍术)各3份，固定提取时间为1 h，提取次数为3次，依次加水10，15和20倍量，综合评分分别为87.89，92.87和100.00。结果表明，当加水倍量为20倍时，综合评分最高，故选择加水倍量为20倍。

2.2正交实验 根据单因素实验结果，考虑到剂型为洗剂，故最终选定加水倍量、提取时间和提取次数作为正交实验的考察因素，将总蒽醌含量和干浸膏得率作为考察指标进行综合评定，应用L9(34)正交实验表进行实验，重复3次实验以减少偶然误差[6]。因素与水平见表1。按照L9(34)正交实验设计要求，按照处方量的1/3准确称取药材(大黄，黄柏和苍术)，共27份，编为1～27号(每次实验重复3次)。每份55 g(其中大黄25 g，黄柏15 g，苍术15 g)，分别置于圆底烧瓶中，加入纯化水，按照表1因素进行提取，提取液过滤，冷却，定容即得。

2.3干浸膏得率的测定 精密移取2.2项下制备的提取液50～100 mL，置于已干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干，再置于105 ℃烘箱中干燥至恒质量，计算干浸膏得率，结果见表2。

表1水提工艺因素与水平

Tab.1 Factors and levels of the water extracting technology

水平因素A,加水量/倍B,提取次数/次C,提取时间/minD,空白118140-220260-322380-

注：-表示空白列，用于计算偶然误差。

2.4提取液中5种蒽醌的含量测定

2.4.1色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：1 mL·L-1磷酸∶甲醇(15∶85)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：254 nm；柱温：30 ℃[7-9]。色谱图见图1。

图1HPLC图

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.芦荟大黄素；2.大黄酸；3.大黄素；4.大黄酚；5.大黄素甲醚。

Fig.1 HPLC chromatograms

A.reference sample；B.sample；C.negative sample；1.aloe-emodin；2.rhein；3.emodin；4.chrysophanol；5.physcion.

表2水提工艺正交实验结果

Tab.2 Orthogonal test results of water extraction process

实验号 ABCD干浸膏收率/%总蒽醌含量/mg·g-1综合评分1111116.594.1247.872122228.358.9894.623133331.968.6897.214212320.005.1058.615223130.778.9697.556231228.397.9387.817313220.555.8564.258321325.607.5681.869332131.039.1098.81K1239.70170.73217.54244.23K2243.97274.03252.04246.67K3244.92283.83259.01237.69R1.7437.7013.822.99

注：权重系数由大黄总蒽醌含量×60%、干浸膏收率×40%来进行综合评分。

2.4.2混合对照品溶液的制备 精密称取对照品适量，加甲醇制成1 mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度分别为20.72，24.52，21.56，22.80和11.12 μg·mL-1的溶液[10-11]。

2.4.3供试品溶液的制备 精密称取2.3项下制备的干浸膏0.25 g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，精密称定，回流60 min后再次称定，若质量减少，则用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液5 mL，置于具塞锥形瓶中，水浴蒸干，加入220 mL·L-1盐酸溶液10 mL，超声处理2 min，再加入10 mL氯仿，摇匀后回流60 min，取出，放冷。分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10 mL，合并氯仿液，挥干，残渣加甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，过滤，即得[12-14]。

2.4.4阴性样品溶液的制备 精密称取缺大黄的阴性干浸膏0.25 g，按照2.4.3项下方法进行制备。

2.4.5线性范围考察 在2.4.1项色谱条件下，分别取混合对照品溶液1，2，4，8，10，16和20 μL，测定不同进样量下总蒽醌的峰面积，以进样量为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y)进行线性回归，得回归方程：y=7.249 5x+0.429 9(r=0.999 9)，结果表明，当总蒽醌进样量在72～1 440 μg范围时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.6精密度实验 精密吸取2.4.3项下制备的供试品溶液适量，连续进样6次，进行测定，结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD值分别为0.29%，0.30%，0.32%，0.33%和0.35%，表明该方法精密度良好。

2.4.7稳定性实验 精密量取2.4.2项下制备的混合对照品溶液，在0，2，4，6和8 h分别进样10 μL，记录芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的峰面积，计算其RSD值分别为0.46%，0.57%，0.70%，1.06%和1.49%，结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚均在8 h内稳定。

2.4.8重复性实验 取同一批样品6份，按照2.4.3项下方法制备供试品溶液，按照2.4.1项下色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算含量。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的RSD值均小于2.0%，表明该方法重复性良好。

2.4.9加样回收率实验 精密量取同一批样品5 mL，6份，分别置于具塞锥形瓶中，每份均精密加入质量浓度分别为0.100 2，0.105 0，0.104 6，0.115 8和0.052 8 mg·mL-1的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚对照品储备液9，8，3.5，7 和6 mL。按照2.4.3项下方法制备供试品溶液，依照2.4.1项下色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算回收率，结果RSD值均小于3%，表明加样回收率好。见表3。

表3回收率实验结果

Tab.3 The results of recovery tests

编号供试品含量/mg加入对照品量/mg测得量/mg回收率/%平均值/%RSD/%13.493 53.235 36.619 296.6199.451.6823.493 53.235 36.749 0100.6233.493 53.235 36.681 498.5343.493 53.235 36.742 1100.4153.493 53.235 36.764 2101.0963.493 53.235 36.710 499.43

2.4.10样品的含量测定 分别精密吸取2.4.2项下制备的混合对照品溶液和2.4.3项下制备的供试品溶液各10 μL，进样测定，计算样品中大黄总蒽醌的含量，结果见表4。

2.5方差分析结果 由表4可知，各因素对实验结果的重要性为B>C>A。方差分析结果表明，加水量A对总蒽醌含量和干浸膏得率影响不显著(P>0.05)，提取次数B和提取时间C对总蒽醌含量和干浸膏得率影响均具有显著性(P<0.01)。故最佳工艺条件为A1B3C2，即加18倍量水，煎煮3次，每次1 h。

表4正交实验方差分析

Tab.4 Mean standard deviation analysis of the orthogonal experiment

因素离差平方和SS自由度f均方MSF显著性A5.1722.583.23B2 617.6421 308.821 638.30**C328.652164.32205.69**D (误差e)14.38180.80

注：F0.01(2.18)=5.85；F0.05(2，18)=3.49，**P<0.01表示差异具有统计学意义。

2.6验证实验 由于正交实验中9号实验综合评分最高且含量最高，故做1次验证实验[15-17]。考虑到大生产浓缩液耗能较多，且加水量无显著性影响，再做4个验证实验，每个实验平行3次:加水量15倍，提取3次，每次1 h和加水量10倍，提取3次，每次1 h。从验证结果来看，加水量22倍(9号实验)含量较高，18倍，15倍和10倍的含量差别不大，但3次提取22倍量水比10倍量水多，浓缩时耗能较大，且多出的含量有限，从大生产节约能耗考虑，最终选择的最佳工艺条件为：加水量10倍，提取3次，每次1 h。

3 讨论

大黄为本制剂的君药，故大黄总蒽醌为本洗剂的主要药理活性成分[17-19]，结合相关研究资料，蒽醌既能溶于沸水也可溶于有机试剂，但考虑到本制剂为洗剂，故采用水煎煮提取，这样既保留了传统中药物质作用基础，同时也避免了有机试剂的污染。

本实验将单因素实验法与正交实验法相结合，通过单因素实验确定正交实验的方案，对影响制剂质量的主要因素包括加水量、煎煮时间和煎煮次数等进行了系统考察，以干浸膏得率和大黄总蒽醌含量的综合评分作为考察指标，优选最佳提取工艺。从正交实验结果可知，煎煮时间和煎煮次数是主要影响因素，加水量影响不显著。在验证实验中，结合工业化大生产，从降低生产成本、提高生产效率方面考虑，最终将提取工艺确定为：加水量为10倍量，煎煮时间为1 h，煎煮次数为3次。