顶空气相色谱法测定香菊感冒颗粒中麝香草酚和百秋李醇的含量

许 奇，张华锋，顾 倩

(苏州市药品检验检测研究中心，苏州 215104)

香菊感冒颗粒由广藿香、香薷、野菊花和青蒿组成，具有疏风解表、芳香化湿和清暑解热的作用，主治四时感冒，尤其对夏季感冒发热、头痛和胸闷无汗等更为适宜[1]。研究表明，挥发油为其主要的功效成分[1]。据报道，广藿香和香薷挥发油在心脑血管系统、中枢神经系统、呼吸系统和胃肠道等方面有治疗作用，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗病毒及促进药物吸收等作用[2-5]。香菊感冒颗粒的标准中仅有3个鉴别方法，无含量测定方法，无法对挥发油的质量进行控制。本实验通过建立顶空气相色谱法测定其挥发油[6-15]中的百秋李醇和麝香草酚的方法，该方法简便、准确，重复性好。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent 7890A气相色谱仪，Agilent 7697A顶空进样器，Openlab色谱工作站(美国Agilent公司)；XS105DC电子天平(美国梅特勒-托利多公司)。

1.2试药 环己烷(Fisher公司，色谱纯)；纯化水；百秋李醇对照品(批号100508-200902，质量分数99.1%)，麝香草酚对照品(批号110772-201206，质量分数99.9%)，均购自中国食品药品检定研究院；香菊感冒颗粒(雷允上药业(苏州)有限公司，批号：NC12003，NC12005，NC12009)；野菊花和青蒿，雷允上药业(苏州)有限公司，打粉备用。

2 方法和结果

2.1色谱条件 毛细管柱[16-19]：Agilent HP-5(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；分流比5∶1；进样口温度：250 ℃；载气：N2；流速：2 mL·min-1；程序升温：在40 ℃下保持5 min，以5 ℃·min-1的速率升至150 ℃，再以10 ℃·min-1的速率升至200 ℃，保持3 min；检测器：FID(H2：30 mL·min-1，空气：400 mL·min-1)；检测器温度：300 ℃；顶空进样器炉温：85 ℃；平衡时间：10 min；定量环温度：90 ℃；传输线温度：95 ℃；进样体积：1 mL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液 精密称取麝香草酚和百秋李醇对照品适量，用环己烷溶解制成质量浓度分别为2.977和3.141 mg·mL-1的麝香草酚和百秋李醇对照品母液。分别精密吸取上述对照品母液1.0和0.5 mL，置于同一100 mL量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液100 μL，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL顶空瓶中，密封，即得。

2.2.2供试品溶液 将香菊感冒颗粒研细，精密称取细粉2.5 g，置于20 mL顶空进样瓶中，加入纯化水10 mL和环己烷100 μL，密封，即得。

2.2.3阴性对照溶液 将野菊花和青蒿2味药材按照处方制法缩小1/8制成阴性样品。再按照2.2.2项下方法配制成阴性对照溶液。

2.3方法学考察

2.3.1系统适用性考察 取2.2项下制备的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液测定，麝香草酚与百秋李醇的保留时间分别为20.9和29.3 min。供试品溶液色谱图中存在与对照品溶液色谱图中主峰保留时间一致的色谱峰，且供试品溶液中麝香草酚和百秋李醇的色谱峰与相邻的峰分离度大于1.5。阴性样品色谱图中未出现百秋李醇色谱峰，在麝香草酚相应的保留时间处有峰。色谱图见图1。

2.3.2标准曲线 精密吸取麝香草酚对照品母液0.2，0.5，1.0，2.0和10.0 mL以及百秋李醇对照品母液0.1，0.25，0.5，1.0和5.0 mL，分别置于50 mL量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀，作为标准曲线溶液。精密吸取上述标准曲线溶液100 μL，分别置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL顶空瓶中，密封测定，以麝香草酚与百秋李醇的峰面积与其对照品溶液质量浓度(μg·mL-1)进行线性回归。得回归方程：麝香草酚y=1 063.7x+1 658 (r=0.999 5)；百秋李醇y=1 207.4x-120.35(r=0.999 6)。结果表明，麝香草酚和百秋李醇的质量浓度在11.908～595.404 和6.283～314.147 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

图1GC图

A.混合对照品；B.供试品；C.阴性对照样品；1.麝香草酚；2.百秋李醇。

Fig.1 GC chromatograms

A.mixed reference substances；B.samples；C.negative control samples；1.thymol；2.patchouli alcohol.

2.3.3精密度 精密吸取对照品溶液100 μL，6份，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL顶空瓶中，密封测定，结果麝香草酚峰面积的RSD值为1.7%(n=6)、百秋李醇峰面积的RSD值为2.0%(n=6)。结果表明，仪器精密度良好。

2.3.4重复性 取同一批(批号CN12005)香菊感冒颗粒样品，分别制成6份供试品溶液，测定。测得麝香草酚平均含量为2.438 4 μg·g-1，RSD值为1.5%(n=6)；百秋李醇平均含量为0.499 6 μg·g-1，RSD值为1.7%(n=6)。结果表明，重复性良好。

2.3.5稳定性 另取香菊感冒颗粒样品(批号CN12005)制备供试品溶液。分别在0，2，4，6和8 h时测定，测得麝香草酚含量的RSD值为2.0%(n=5)；百秋李醇含量的RSD值为2.0%(n=5)。结果表明，溶液在8 h内稳定。

2.3.6加样回收率 精密吸取2.2.1项下制备的麝香草酚和百秋李醇对照品储备液各1 mL，置于同一100 mL量瓶中，加环己烷稀释至刻度，作为对照品加入溶液。取与重复性实验同一批号的香菊感冒颗粒细粉6份，每份1.3 g，精密称定，置于20 mL顶空瓶中，加入1.07 g的蔗糖和10 mL的纯化水，再精密吸取100 μL对照品加入溶液，置于顶空瓶中，密封，作为回收率供试品溶液，测定，按照外标法分别计算麝香草酚和百秋李醇的加样回收率。结果见表1和表2，麝香草酚的平均回收率为97.0%，RSD值为2.0%(n=6)；百秋李醇的平均回收率为99.3%，RSD值为1.5%(n=6)。

2.4样品测定 按照2.2.2项下方法，分别测定3批香菊感冒颗粒的含量。测得麝香草酚的平均含量分别为0.99，2.44和1.31 μg·g-1，百秋李醇的平均含量为0.80，2.54和1.14 μg·g-1。

表1麝香草酚回收率实验结果

Tab.1 The results of recovery test of thymol

(n=6)

表2百秋李醇回收率实验结果

Tab.2 The results of recovery test of patchouli alcohol

(n=6)

3 讨论

香菊感冒颗粒由处方中的4味药用水蒸气蒸馏法提取挥发油，药渣加水煎煮浓缩成清膏，与蔗糖按照1∶6的比例混匀，干燥，制粒，再加入挥发油及薄荷油，混匀，即得。由此可知，可以通过萃取方法得挥发油后直接进样。但通过预实验发现萃取法使得挥发油质量浓度低，导致实验的灵敏度过低、准确度低。后选用顶空进样法后，能使得测定的成分满足要求，故采用顶空进样的方法。参考文献和预实验后，确定采取程序升温能很好地满足色谱峰的分离要求。采用顶空法后考察了不同的顶空平衡温度(75，80，85和90 ℃)和不同的平衡时间(5，10，15，20，25，30，35，40和45 min)后，最终确定了2.1项下色谱条件。

查文献时未发现野菊花和青蒿挥发油中有麝香草酚和百秋李醇，故只用青蒿和野菊花制成阴性对照。但实验中发现阴性结果中却有麝香草酚，后用GC-MS法确认，4种药材中均有麝香草酚，故该阴性溶液只为确认百秋李醇。

本实验采取顶空气相色谱法测定香菊感冒颗粒中的麝香草酚和百秋李醇，前处理方法简单，且结果相对精确，可作为提高香菊感冒颗粒标准的依据。