薄层色谱一标多测方法在腰痛片中的应用

崔宇宏，王 玳

（山西省食品药品检验所，山西太原030001）

腰痛片具补肾活血、强筋止痛的功效，用于肾阳不足、瘀血阻络所致的腰痛及腰肌劳损，临床主要用于治疗急性腰损伤及肾虚、慢性腰肌劳损所致的腰痛。腰痛片收载于《中国药典》2015年版一部，处方中有杜仲叶、盐补骨脂、续断、当归、炒白术、牛膝、肉桂、乳香、赤芍、狗脊、泽泻、土鳖虫等12味药材，原标准鉴别项仅收载3个薄层鉴别［1］，分别鉴别续断、当归、赤芍，方法费时费力，并且控制药材数量较少，无法全面控制药材的质量。李瑞丽等［2］对腰痛片中当归、肉桂、赤芍进行薄层鉴别，赵江红等［3］对腰痛片中补骨脂、赤芍进行薄层鉴别，但均为一块薄层板鉴别一味药材。为了达到快速、简便、省时省力的目的，从供试品溶液的制备、展开系统及薄层板的选择多个方面考虑，将原标的鉴别合并，并增加了补骨脂、肉桂、乳香、杜仲叶的薄层鉴别。采用2块薄层板，鉴别7味药材，1个色谱系统同时鉴别当归、补骨脂、乳香、肉桂4味药材，另一个色谱系统同时鉴别了续断、杜仲叶、赤芍。实现了快速鉴别的目的，提高了效率、节约了成本。

1 试药及试剂

对照药材及对照品：当归（110719-200613）、乳香（0970-9602）、补骨脂（1056-9801）、续断（1033-200003）、肉桂（121363-200401）、杜仲叶（1068-9901）、芍药苷（121072-200806）、川续断皂苷Ⅵ（111685-200401）、桂皮醛（110710-201016）均购自中国食品药品检定研究院。

样品：腰痛片多个企业生产样品

试剂：硅胶G、硅胶GF254高效预制板（青岛海洋化工厂、merck板、烟台市化学工业研究所），其余均为分析纯。

2 实验与结果

2.1 当归、补骨脂、肉桂、乳香的薄层鉴别

采用同一供试品溶液，以当归、补骨脂、肉桂、乳香对照药材在同一块薄层板上同时鉴别4味药材。UV（365nm）下检视鉴别当归、补骨脂，喷二硝基苯肼试液后鉴别肉桂、乳香。

2.1.1 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，研细，加二氯甲烷30 mL，冰水浴超声处理30 min，滤过（滤渣备用），滤液挥干，加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材及其对照品溶液的制备 取当归、补骨脂、乳香、肉桂对照药材各0.5 g，同法制成对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照品溶液的制备 根据处方，分别取处方中各药味（除当归、补骨脂、肉桂、乳香）1/100处方量，按供试品溶液的制备方法，分别制备缺当归、缺补骨脂、缺肉桂、缺乳香的对照溶液，即得。

2.1.4 薄层层析方法 吸取上述溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（7∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与当归、补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。喷以二硝基苯肼乙醇试液，日光下检视。供试品色谱中，在与乳香、肉桂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

2.1.5 薄层层析结果 专属性：供试品色谱斑点清晰、阴性对照无干扰。重复性：对多企业、多批样品进行了薄层鉴别，重复性好。耐用性：使用merck预制板、青岛海洋预制板及烟台预制板不同品牌的预制板，在不同温湿度条件下的薄层鉴别均符合要求。结论：专属性、重复性、耐用性均符合要求（见图 1、2）。

图1 当归、补骨脂薄层鉴别（专属性，UV365nm下检视）

图2 乳香、肉桂薄层鉴别（专属性，喷二硝基苯肼试液）

2.2 续断、杜仲叶、白芍的薄层鉴别

将处方中续断、杜仲叶、白芍的薄层鉴别合并，以一块薄层板、一种展开系统，同时鉴别续断、杜仲叶、赤芍三种药材。

2.2.1 供试品溶液的制备 取当归、补骨脂等鉴别项下的备用滤渣，蒸干溶剂，加水饱和正丁醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇5 mL使溶解，置中性氧化铝柱（100～200目）2 g，用甲醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材及其对照品溶液的制备 取杜仲叶、续断对照药材各1 g，加水适量煎煮30 min，滤过，滤液用水饱和正丁醇30 mL提取，提取液蒸干，加甲醇5 mL使溶解同法分别制成对照药材溶液。再取芍药苷、川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 分别取处方中各味（除续断、杜仲叶、赤芍）1/100处方量，分别制备缺续断、杜仲叶、赤芍的对照溶液，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.2.4 薄层层析方法 吸取上述溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与杜仲叶、续断对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；在与川续断皂苷、芍药苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.5 薄层层析结果 ①专属性：供试品色谱斑点清晰、阴性对照无干扰。②重复性：对多企业、多批样品进行了薄层鉴别，重复性好。③耐用性：使用青岛海洋预制板、merck预制板不同品牌的预制板，在不同温湿度条件下的薄层鉴别均符合要求。④结论：专属性、重复性、耐用性均符合要求（见图3）。

图3 续断、杜仲叶、赤芍的薄层鉴别（青岛海洋板）

3 讨 论

3.1 建立薄层色谱-标多测的目的

控制中成药中药材的质量，最常用的方法是薄层色谱鉴别方法。中国药典中对于成药中的多味药材通常采用1个薄层色谱鉴别1味药材，操作繁琐，效率较低，造成了资源浪费。故根据药材所含成分的性质，采用1个供试品溶液，1种薄层色谱条件鉴别成药中多味药材的方法，可以提高检测速度，节约。

3.2 供试品溶液制备方法的确定

当归、补骨脂、乳香、肉桂主含脂溶性成分，且部分成分容易挥发，故选择毒性相对小、沸点低、容易挥干的二氯甲烷作为提取溶剂，并选择在冰水浴中超声处理。

续断、杜仲叶、赤芍含有皂苷或苷类成分，故将二氯甲烷提取后的滤渣加水饱和正丁醇超声提取后，再过中性氧化铝柱去除杂质干扰，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干用甲醇溶解后作为鉴别续断、杜仲叶、赤芍的供试品溶液。

3.3 展开剂与显色剂的选择

脂溶性成分的展开剂，先以药典鉴别当归的展开剂正己烷-乙酸乙酯（7∶1）展开，结果补骨脂的斑点Rf值过低，故调整为正己烷-乙酸乙酯（7∶2）时，各味药材的Rf值适中，斑点清晰。

水溶性成分的展开剂，采用水溶性成分比较通用的展开剂系统，二氯甲烷-甲醇-水，试用（13∶6∶2）、（13∶5∶2）、（13∶7∶2）下层液的不同比例，结果二氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下层液时，各味药材的 Rf值适中。

在UV365 nm下能够检视当归及补骨脂，斑点清晰，且阴性无干扰。喷以二硝基苯肼乙醇试液后，乳香及肉桂显橙色斑点。

针对杜仲叶、续断、赤芍中苷类成分，曾使用10%硫酸乙醇、2%香草醛硫酸溶液、2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液。结果使用2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液时，各药材斑点清晰，显色效果最佳。

3.4 结果

建立了7味药材快速、简便的检测方法，实现了薄层鉴别的一测多评，并将方法应用于不同企业生产的腰痛片中7味药材的质量考察。根据15个企业147批次样品的检测结果，企业间、企业内批间斑点的大小强弱不同，反映企业药材来源均不固定，难以保证产品质量的均一性，其中当归、补骨脂、续断、赤芍由于原标准有鉴别或含量测定，故斑点均能清晰可辨，但原标无质量控制方法的乳香、杜仲叶、肉桂的问题较大，各企业间斑点强弱存在较大差异，从极弱、弱到清晰可辨。薄层鉴别结果反映，有的企业只注重标准有要求的项目，而忽略标准未控制的药材的质量。