食品微生物检验菌落总数测定方法的效果观察

马国善

（辽宁省辽阳县卫生计生监督局，辽宁 辽阳 111200）

近年来，食品安全问题层出不穷，国家相关部门开始加大对食品安全的监管力度，食品微生物检验是保证食品安全工作的重要内容之一[1]。以往对于食品中细菌总数的检验常使用测试纸片法和计数琼脂倾注皿培养计数法，但在实际应用中，易出现细菌菌落混淆的情况，不利于检测菌落总数，其检测结果会出现一定的偏差。本次研究分别采用平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法对110份样品进行检测，现报道分析如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料：2016年1月至2017年1月，选取疾控中心接收的食品样品110份进行研究，110份食品样品均来自于疾控中心接收到的食品样品，分别采用平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法3种方法进行检测。平板菌落计数法采用北京陆桥计数有限责任公司的平板计数琼脂培养基进行检验；菌落总数测定采用美国3M公司生产的细菌总数测试片进行检验；TTC培养基法由北京陆桥计数有限责任公司提供，TTC琼脂按照体积比100∶1的比例在琼脂中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，浓度为0.005%。

1.2 方法

1.2.1 平板菌落计数法：采用国家标准方法GB4789.2-2010 进行检测，无菌状态下取25 g食品样品放入装有225 mL生理盐水的锥形瓶中，轻轻摇晃使其混匀，采用无菌吸管抽取1∶10样品匀液1 mL慢慢注入到装有9 mL生理盐水的试管内，轻轻摇晃使其混匀，并按照上述方法取1∶1000和1∶10000的样品匀液。采用吸管吸取适宜稀释度的样品匀液分别注入到2个无菌平皿中，同时取1 mL空白稀释液作为空白对照，然后将温度为46℃的计数琼脂培养基15 mL注入到平皿中，轻轻摇晃使其混匀，待琼脂凝固后，将平皿翻转，放入到恒温（36±1） ℃中进行（48±2）h的培养。

1.2.2 菌落综述测定方法：将测试片放于水平台面上，去除附着的薄膜，采用与平板菌落计数法相同的方法制作不同稀释度的样品液放置于测试片中央位置，食品样品各取1 mL，然后将盖膜盖好，待培养基凝固后，压紧纸片，使样品均匀分布在测试片上，每个稀释度样品均进行2片接种，放置于恒温（36±1） ℃中进行（48±2）h的培养。

1.2.3 TTC培养基法：将1 mL浓度为0.5%的TTC溶液放入到100 mL琼脂培养基中，制备TTC琼脂培养基浓度为0.005%，接种与培养方法与菌落总数测定方法相同。

1.3 统计学分析：数据资料用SPSS19.5进行统计分析，计量资料用（±s）表示，用t检验；计数资料用（%）表示，用χ2检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结 果

平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法3种检验方法测定出的不合格率分别为9.09%、8.18%、10.00%，3种结果对比无明显差异（P＞0.05）。见表1。

表1 对比3种不同检测方法的不合格率

3 讨 论

食品安全一直是我国民生关注的重点，近来年，食品安全问题频繁出现，严重威胁了人们的饮食健康。食品在加工、运输、储存中会接触到各种微生物，导致食品变质，是威胁人们健康的重要因素之一。相关部门指出，将采用平板计数琼脂代替营养琼脂，同时对可能存在受损生物细胞存在的食品进行抽样检测，以此来保证食品安全[2]。

目前对食品中微生物菌落总数检测中，常使用平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法3种检验方法，3种方法在本次研究中，其结果没有太大差异，从应用价值上来说，3种检验方法都可推广使用。本次研究中，平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法3种检验方法测定出的不合格率分别为9.09%、8.18%、10.00%，数据对比无统计学意义（P＜0.05）。在实际操作中，TTC培养基法菌落、平板菌落计数法、菌落总数测定方法都具有较高的检出率。由于部分细菌体积小，生长在琼脂内部，很难用肉眼观察到，所以在计数中，往往不准确。大多数菌类都含有脱氢酶，TTC可以检测脱氢酶脱下的氢，出现颜色由白变红的现象，起到对细菌染色的目的，以便检验人员进行仔细观察并计数[3]。另外，为了进一步提高检测结果的准确性，可从以下几个方面入手：①提高检验人员操作水平，规范检验操作，保证检验工作的有效性。②严格控制检验室内环境，注重培养皿温度与湿度，定期对检验仪器进行校对，保证检验工作的准确性。③严格把控检验样品剂量与质量，将配置好的样品匀液妥善保存，放置于通风、干燥的环境中，对于需要冷藏的样品，控制其温度。④对于所有检验样品，注明其使用的有效时间，超出使用期限的样品不得参与检验。

综上所述，平板菌落计数法、菌落总数测定法、TTC培养基法3种检验方法均具有较高的准确性和可行性，可根据环境要求选择合适的检验方法。