hr-HPV与4种不同免疫标记物对妇科肿瘤的诊断价值

2018-08-14，，

中国妇幼健康研究 2018年8期

，，

(咸阳市中心医院妇科，陕西咸阳 712000)

宫颈腺癌的病因尚不清楚，但有学者认为宫颈腺癌的发病因素与性生活及分娩无多大关系，但与此期体内激素常发生紊乱有关，因此宫颈腺癌可能由内分泌紊乱及服用外源性激素引起[1-2]。宫颈腺癌的诊断需与子宫内膜癌进行鉴别区分：宫颈腺癌可以是原发的或转移性的，同时宫颈腺癌大多数病例显示黏液性和子宫内膜样两者分化混合的情况，与子宫内膜腺癌有许多相似之处，因此需要排除延伸到宫颈管的子宫内膜癌[3-5]。大部分宫颈腺癌是由高危人乳头瘤病毒引发的，且标记物在区别p16和激素受体方面具有一定临床价值。本文采用原位杂交(in-situ hybridization，ISH)及非生物素免疫组化(EliVisionTMplus)染色方法分别观察子宫内膜腺癌及原发性宫颈腺癌中高危人乳头状瘤病毒(hr-HPV)DNA、雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progestrone receptor，PR)、p16、波形蛋白(Vimentin)等标记物表达组型[6]。目的在于寻找能有效鉴别诊断子宫内膜腺癌和原发性宫颈腺癌的标记物表达组型。现将研究结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取咸阳市中心医院于2014年8月至2016年11月间收治的35例原发性宫颈腺癌患者，其中包括1例腺鳞癌、2例浆液性、3例肠型、3例子宫内膜样型、3例绒毛管状型、23例宫颈管型；以及32例子宫内膜腺癌患者，其中包括4例浆液性、28例子宫内膜样型。宫颈腺癌患者平均年龄为44.2岁(27～65岁)，子宫内膜腺癌患者平均年龄为54.2岁(29～80岁)。

1.2纳入与排除标准

所有病例均为咸阳市中心医院存档病例，均按照WHO 2003相关标准诊断，病理诊断前均未进行化疗及放疗[7]；经我院医学伦理委员会批准后，所有患者均知情同意并且自愿参与本次研究。排除合并有严重心、肝、肾等功能不全的患者；排除因各种原因无法配合完成本次研究的患者；排除资料缺失不全的患者。

1.3研究方法

对67患者均采用ISH方法来进行hr-HPV(16/18)DNA的检验，所用检测试剂购于福建泰普生物科学有限公司，具体操作步骤如切片处理、脱蜡、水化、杂交、信号放大及显色等过程均严格按照试剂盒说明书指导进行。采用EliVisionTMplus免疫组化染色方法对67例患者组织中4种不同免疫标记物ER、PR、p16、Vimentin的表达进行检测，此检测所用试剂盒购于福州迈新生物技术公司。检测时分别以ER、PR、p16、Vimentin组织切片为阳性对照，以PBS作为阴性对照。ER、PR阳性染色定位于细胞核，p16阳性染色定位于细胞核，vimentin阳性染色定位于细胞质[8]。

1.4评价标准

hr-HPV(16/18)DNA阴性、阳性对照分别采用阴性染色的子宫内膜腺癌组织切片和阳性染色的宫颈鳞癌组织切片[9]。若细胞核内呈现棕色沉淀或分散的点状颗粒者诊断为阳性病例[10]。4种不同免疫标记物ER、PR、p16、Vimentin的表达检测中，4种蛋白质染色判断标准分为4个等级：①-，即无阳性染色细胞或阳性染色细胞数量比例≤10%；②+，即阳性细胞比例为11%～50%；③++，即阳性细胞比例51%～90%；④+++，即阳性染色细胞比例>90%。-、+为低表达，++、+++为高表达[11]。

1.5统计学方法

2结果

2.1 hr-HPV(16/18)DNA在子宫内膜腺癌及宫颈腺癌中的检测结果

结果显示hr-HPV(16/18)DNA在子宫内膜腺癌中的检出率仅为12.50%(4/32)，显著低于其在宫颈腺癌中的检出率74.29%(26/35)，差异具有统计学意义(χ2=25.81，P<0.05)。

2.2 ER、PR、p16和Vimentin在宫颈腺癌中的表达组型

在35例宫颈腺癌患者中26例hr-HPV(16/18)DNA检测呈阳性，其ER、PR、p16和Vimentin 4种标记物的表达有2种组型，其中呈现ER(L)PR(L)p16(H)Vim(L)表达组型的有24例(92.31%)，仅有p16为高表达；呈现ER(L)PR(L)p16(L)Vim(L)的有2例(7.69%)，ER、PR、p16和Vimentin 4种标记物均为低表达。ER(L)PR(L)p16(H)Vim(L)表达组型阳性表达率明显高于ER(L)PR(L)p16(L)Vim(L)表达组型，差异具有统计学意义(χ2=21.60，P<0.05)，见表1。

表1 ER、PR、p16和Vimentin在宫颈腺癌中的表达组型[n(%)]

注：宫颈腺癌中ER、PR、Vim的低表达“L”均指“-”，即阴性表达。

2.3 ER、PR、p16和Vimentin在子宫内膜腺癌中的表达组型

32例子宫内膜腺癌患者的检测结果显示28例hr-HPV(16/18)DNA检测阴性，其ER、PR、p16和Vimentin 4种标记物的表达有4种组型，其中呈现ER(H)PR(H)p16(L)Vim(H)表达组型的有22例(78.57%)，仅有p16为低表达；呈现ER(H)PR(L)p16(H)Vim(H)的有1例(3.57%)，PR、p16均为低表达；呈现ER(L)PR(L)p16(L)Vim(H)的有3例(10.71%)，仅有Vimentin为高表达；呈现ER(L)PR(L)p16(L)Vim(L)的有2例(7.14%)，ER、PR、p16和Vimentin 4种标记物均为低表达。ER(H)PR(H)p16(L)Vim(H)表达组型阳性表达率明显高于其他3组表达组型(χ2值分别为32.54、26.09、29.17，均P<0.05)，见表2。

表2 ER、PR、p16和Vimentin在子宫内膜腺癌中的表达组型[n(%)]

注：①子宫内膜腺癌中ER、PR、Vim的低表达“L”指“-”即阴性表达，少数为“+”即弱阳性；②*表示该阴性表达组型与其余三组比较； #表示该阳性表达组型与其余两组比较。

3讨论

3.1妇科肿瘤的临床诊断概况

临床诊断妇科肿瘤过程中，由于宫颈腺癌和子宫内膜腺癌在组织和形态学上的重叠较多，想要准确判断腺癌的原发部位并不容易。若是患者宫颈和子宫内膜同时发病或组织形态学癌前病变不明显时，在常规切片中判断腺癌的原发部位更是困难。子宫内膜腺癌和宫颈腺癌是两种生物学行为不同的子宫恶性肿瘤，在治疗上采取的手段方法也各异，要想病情得到有效的恢复，必须配合正确的治疗手段。为了避免病理诊断不明确导致治疗方案的选择不当，选择有效鉴别子宫内膜腺癌和宫颈腺癌的病理诊断指标很有必要。

3.2 hr-HPVDNA检测在宫颈腺癌和子宫内膜腺癌上的诊断价值

有研究结果表明，绝大多数宫颈腺癌属于hr-HPV相关性肿瘤，而子宫内膜腺癌在病因上则与高危人乳头状瘤病毒的感染没有太大关系。王勤等[12]研究发现78.3%的宫颈腺癌病例检出hr-HPV DNA，而仅仅有9.2%子宫内膜腺癌病例能检出hr-HPV DNA。虽然检测方法的不同会导致宫颈腺癌病例中hr-HPV(16/18)DNA检出率波动较大(29%～93%)，但平均hr-HPV(16/18)DNA检出率为69.3%[13]。本研究结果也表明35例宫颈腺癌患者的检测结果中，有26例(74.28%)hr-HPV(16/18)DNA检测呈阳性，而32例子宫内膜腺癌患者的检测结果中，仅有4例(12.5%)hr-HPV(16/18)DNA检测呈阳性。由此可见，宫颈腺癌患者的hr-HPV DNA检出率远远高于子宫内膜腺癌患者的hr-HPV DNA检出率。以上研究结果均表明在诊断宫颈腺癌和子宫内膜腺癌上，hr-HPV(16/18)DNA检测是有效的辅助诊断手段。

3.3 p16蛋白等指标在宫颈腺癌和子宫内膜腺癌上的诊断价值

相关文献表明，p16蛋白在女性生殖道上皮的阳性表达提示hr-HPV(16/18)DNA存在的标志之一[14]。因为正常的Rb因子会抑制p16蛋白的转录，然而宫颈腺癌患者体内HPV E7蛋白的作用导致Rb因子失活，进而引起p16蛋白在组织内产生并堆积[15]。本研究结果显示在hr-HPV DNA阳性的26例宫颈腺癌病例中，24例为p16高表达病例，比例达92.31%；而在28例hr-HPV DNA 阴性的子宫内膜腺瘤癌病例中，仅有1例为p16高表达病例，比例仅为3.57%。因此，在宫颈腺瘤和子宫内膜腺瘤的鉴别诊断中，p16蛋白标志物与hr-HPV DNA及其他标志物的联合诊断对于准确判断病情具有重要意义。与此同时，p16蛋白在免疫型上的强表达是提示子宫内膜腺癌的一个重要指标。本研究结果表明，28例hr-HPV DNA阴性的子宫内膜腺瘤癌病例中，ER(H)PR(H)p16(L)Vim(H)有22例，占78.57%。相反，35例宫颈腺癌病例中，ER、PR和Vimentin均为低表达。因此，在宫颈腺瘤和子宫内膜腺瘤的鉴别诊断中，ER、PR和Vimentin均为准确判断病情的重要指标。可以总结出宫颈腺癌和子宫内膜腺癌典型的免疫特征组合，与此同时，将hr-HPV DNA检测与4种标志物(p16/Vimentin/ER/PR)表达组型的结果结合联系起来，结果发现宫颈腺癌绝大多数病例hr-HPV DNA检测阳性，伴随ER(L)PR(L)p16(H)Vim(L)免疫表达模式；子宫内膜腺癌绝大多数病例hr-HPV DNA检测阴性，伴随ER(H)PR(H)p16(L)Vim(H)免疫表达模式。