难治性癫痫患儿血清谷氨酸脱羧酶抗体、神经节苷脂抗体水平变化

幸黔鲁，白国辉

(1遵义医学院附属医院，贵州遵义 563000；2贵州省普通高校口腔疾病研究重点实验室)

癫痫是指可持续存在的能够在未来引起癫痫发作的一类脑部疾患，并可引发神经生物学和认知改变，以及心理学及社会功能的变化[1]。难治性癫痫(RE)是癫痫的一种类型，2010年国际抗癫痫联盟将RE的定义制定为选择2种正确且耐受性强的抗癫痫药物经过足够疗程和剂量加以治疗依旧无法控制发作的一类癫痫[2]。小儿RE是临床常见的一种疾病类型，此病发作频率较高，发作类型较为复杂，且病因较多，发病机制仍然不甚明晰，但临床大都倾向于认为RE可能与神经免疫机制有关。谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)首次发现于1型糖尿病患者机体，被认为与小脑共济失调和边缘性脑炎等遭受免疫攻击的神经类疾病发病机制密切相关[3]。神经节苷脂抗体(GM1-A)是一种鞘磷脂，在神经系统中分布广泛，其在神经细胞的发育过程中能够参与细胞分化和分型以及生长等过程，对于维持神经细胞的常规生理功能具有重要的意义[4]。本研究观察了RE患儿血清GADA、GM1-A水平变化，旨在探讨RE患儿发病与GADA、GM1-A的关系，为以后的靶向治疗寻找新的靶点。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年9月～2017年9月遵义医学院附属医院收治的RE患儿60例(观察组)，男28例，女32例；年龄1～14(7.49±3.27)岁；病程1～6(4.21±1.33)a；发病年龄1～2(1.07±0.48)岁。癫痫患儿40例(对照组)，男17例，女23例；年龄1～15(8.21±3.48)岁；病程1～8(4.46±1.57)a；发病年龄1～4(3.32±0.66)岁。纳入标准：①患儿均符合国际抗癫痫联盟关于癫痫的有关诊断标准[5]；②经头颅CT或MRI确诊；③年龄≤16岁；④患儿的家长对于此次研究已经知情同意，并已签署了同意书。排除标准：①其他种类的颅内占位型病变或迟发型脑病者；②医源性因素导致的RE者；③有免疫系统类疾病或感染性疾病者；④有血液疾病者；⑤有恶性肿瘤者。本研究已得到医院伦理委员会评审通过且患者知情同意。

1.2 血清GADA、GM1-A检测 取患儿晨起空腹静脉血4 mL，以3 000 r/min离心15 min，取血清并分为2份，每份0.5 mL，然后放入-80 ℃的冰箱中保存待测。采用ELISA法检测血清GADA、GM1-A，检测450 nm波长下样品的吸光度值，操作需严格遵照说明书中描述的步骤逐步实施。获得吸光度值后，建立二维坐标系，将X轴作为标准品浓度，将Y轴作为标准品所对应吸光度值，将样品的吸光度值分别代入方程式，算出样品浓度，而后乘以稀释倍数，即可得样品实际浓度。GADA：Y=2.880 8X2+4.392 9X-1.759 9，GM1-A：Y=378.08X2+0.147 4。

2 结果

2.1 两组血清GADA、GM1-A水平比较 血清GADA、GM1-A水平见表1。

表1 两组血清GADA、GM1-A水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 血清GADA、GM1-A对RE患儿的诊断价值 结果见表2。由表2可知，AUC为0.842，截断值为0.95 mmol/L，GADA诊断RE患儿的灵敏度和特异度均超过80%；AUC为0.760，截断值为4.35 ng/mL，GM1-A诊断RE患儿的灵敏度和特异度均超过70%。

表2 血清GADA、GM1-A对RE患儿的诊断价值

3 讨论

癫痫是发生于神经系统的一种常见疾病，在人群中的发病率是0.6%～1.1%，对人类生存健康造成了较大的危害[6～8]。关于癫痫的治疗，药物疗法是首选方案，但据统计60%左右的患者常规服用抗癫痫类药物仍然无法避免癫痫的发作，致使部分患者甚至自行停用药物[9～11]。RE是指通过抗癫痫类药物进行规范治疗后不可终止癫痫的发作，亦或是已被临床证实属于难治的癫痫以及癫痫综合征。我国每年的新发癫痫病例中，大约有1/4的比例属于RE，加之RE存在慢性、顽固性以及药物抵抗性和药物的不敏感性等特点，对其进行早期诊断显得十分必要[12～14]。而对于RE患儿的治疗，由于幼儿机体排毒能力较弱，可能存在较强的药物毒性反应，这就需要更及时的充分掌握患儿实际病情，寻找敏感而有效的血清生物学指标进行监测对于患儿的治疗及预后具有十分重要的意义。

本研究显示，观察组血清GADA、GM1-A水平高于对照组，分析原因可能与GADA、GM1-A在RE患儿脑部的作用机制有关。谷氨酸脱羧酶作为人体中γ-氨基丁酸所合成的一种限速酶，其主要存在于神经系统中，并能够催化L-谷氨酸成γ-氨基丁酸[15～17]。而在神经系统中大约含有40%的突触属于γ-氨基丁酸能突触，其作为脑部的一种抑制型神经递质，当机体中GADA高表达后，会抑制γ-氨基丁酸有关受体功能，导致神经系统的兴奋性变大，最终诱发癫痫发作，而在RE患儿中，此种过程更加明显[18～20]。神经节苷酯作为可与唾液酸基相结合的一种鞘磷脂，也是周围神经系统和脊髓中神经细胞膜以及轴突膜的一个组成部分，当各类因素致使神经节苷脂的抗原物质发生暴露之后，可随之激活机体的免疫系统，进而使得机体中的淋巴系统形成GM1-A，而GM1-A可将GM1作为攻击抗原，并在补体和免疫反应的作用下损伤机体的神经细胞，最终引发RE。因此，RE患儿的发病与GM1-A、GADA水平的升高具有十分紧密的关联。文献[21～23]报道也指出，GM1-A和GADA水平的升高可能会导致机体的脑部神经调节作用产生一定程度的异常，并通过脑网络及脑区间功能的变化而逐渐诱发RE。

本研究还显示，血清GADA诊断RE患儿的灵敏度为80.28%、特异度为80.30%，血清GM1-A诊断RE患儿的灵敏度为73.31%、特异度为71.12%。证实GADA和GM1-A对于RE患儿的诊断价值较好，临床上可将二者用于RE患儿的诊治评估过程中[24,25]。

总之，RE患儿血清GADA、GM1-A水平升高，其发病可能与两指标水平升高有关。目前，临床上已有针对RE疾病的明确诊断标准，因此可尝试额外增加针对GM1-A、GADA水平的监测，从而更加全面地研判患儿的病情及预后，并有助于更加科学而准确地对患儿实施治疗。