延胡索块茎中延胡索乙素含量分布的研究△

胡珂，何忠臻，彭华胜，詹志来

(1.安徽中医药大学 药学院 安徽省道地中药材品质提升协同创新中心，安徽 合肥 230012；2.中国中医科学院 中药资源中心 道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700)

常用中药延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang为多年生植物，以干燥块茎入药，有活血、止痛作用[1]。延胡索最早记载于唐代陈藏器的《本草拾遗》，是著名的浙八味之一[2]。根据前期调查，目前市场上延胡索商品都以粒径大小进行等级划分，而且在全国最大产区的陕西，产地加工方法简陋，易造成块茎颓废组织大量脱落，这些状况都会对正确评价药材质量产生不利的影响。本实验采用高效液相法分别测定延胡索块茎的颓废组织、表皮、韧皮部等不同部位中延胡索乙素的含量，结合前期市场调查及产地现状对其品质进行分析评价，以期为今后延胡索产地加工方法的改进及商品规格等级的制定起到参考作用。

1 材料与仪器

1.1 材料

分别于2016年11～12月延胡索休眠期采集安徽省合肥市大蜀山的野生块茎，由安徽亳州康美中药材市场、河北安国东方药城、四川荷花池中药材专业市场、广西玉林市中药材专业市场购得栽培延胡索药材商品，经胡珂教授鉴定为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的块茎。

1.2 仪器

Milli-Q Advantage A10一体式超纯水机(美国Milipore公司)；移液枪；FA2014B电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；Agilent 1260型自动进样高效液相色谱仪，美国安捷伦有限公司(Santa Clara，CA，USA)；色谱柱Agilent 5 TC-C 18(2)250×4.6 mm；WL-100型打粉机(威力制药机械厂)；旋转蒸发仪，超声机、烘箱。

1.3 试剂

超纯水(电阻率大于18.2 M·Ωcm-1)；甲醇(色谱纯)；浓氨(分析纯)；延胡索乙素(HPLC>98%)。

2 方法与结果

2.1 样品前处理

采挖合肥大蜀山自然休眠5个月的野生延胡索块茎(此时颓废组织已形成)，洗净后于烘箱中60 ℃恒温烘6 h，阴干保存一天左右。用刀片剥离出颓废组织、表皮、韧皮部、木质部及髓，分离后继续阴干，至完全干燥后分部位用捣药罐捣碎，过药典3号筛。

2.2 色谱条件

色谱柱Agilent 5 LC-TC18(2)250×4.6 mm；流动相为甲醇-水(69：31)，等度洗脱，检测波长280 nm；流速1.0 mL·min-1，进样量5 μL，柱温28 ℃。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素对照品0.53 mg置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度线定容，用移液枪精密移取1 mL母液和4 mL甲醇，混合配成1 mL含4.24 μg延胡索乙素的对照品贮备溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密称取各组样品粉末(过三号筛)约0.5 g，置锥形瓶中，加入现配好的浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，冷浸30 min后，超声30 min。摇匀，抽滤。续滤液用旋转蒸发仪蒸干，残渣加甲醇(色谱纯)溶解，转移至5 mL量瓶中，并用甲醇(色谱纯)稀释至刻度，摇匀。用5 mL一次性注射器吸取约1.5 mL样品，溶液用0.22 μm过滤针头滤过，取续滤液于2 mL的干燥洁净的进样瓶中，编号即得。

2.4 线性关系考察

精密吸取延胡索乙素对照品溶液5、7、10、15、17、20 μL在上述色谱条件下进样，测得峰面积值，以峰面积值和进样量进行回归处理，以峰面积(Y)为纵坐标，以对照品的进样量(X，μL)为横坐标，纵到标准为曲线得回归方程Y=3.209X+0.136 1，r=0.999 9，呈良好的线性关系。结果见图1。

图1 延胡索乙素标准曲线

2.5 精密度实验

精密吸取延胡索乙素对照品溶液10 μL，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面面积值，延胡索乙素的峰面积的RSD(n=6)=0.887 9%，结果见表1。

表1 延胡索标准品精密度实验结果统计表(n=6)

2.6 稳定性试验

分别取延胡索同一份供试品溶液，按照2.3条件下的方法进行提取，采用上述2.2色谱条件，在9、12、15、18、21、24、3、6 h进样5 μL测定，延胡索乙素的峰面积的RSD(n=8)=0.715 6%，结果见表2。

2.7 重复性实验

取同一批延胡索药材样品5份，按2.3条件下的方法进行提取，依照2.2色谱条件进样5 μL，其延胡索乙素的峰面积的RSD(n=5)=1.652 1%，结果见表3。

表2 延胡索样品稳定性实验结果统计表(n=8)

表3 延胡索样品重复性实验结果统计表(n=5)

2.8 加样回收率实验

取同批延胡索药材粉末6份0.5 g，精密称定，按照上述提取方法及色谱条件进行延胡索乙素含量测定，另外加标准品0.20 mg，测得其延胡索乙素总含量，平均回收率为96.91%，RSD(n=6)=1.561%，结果见表4。

表4 延胡索样品加样回收结果统计表

2.9 样品含量测定

2.9.1 11月份延胡索块茎不同部位延胡索乙素测定

11月份采挖合肥大蜀山野生延胡索洗净后于烘箱中60 ℃恒温烘6 h，阴干保存1d左右。用刀片将延胡索剥离为3部分：颓废组织及表皮、韧皮部、木质部及髓，分离后继续阴干。至完全干燥后分部位用捣药罐捣碎，过药典3号筛。按照2.3条件下对剥离的不同部位进行提取，在2.2色谱条件下进样。结果见表5。

表5 11月份延胡索不同部位延胡索乙素含量测定结果统计表

2.9.2 12月份不同块茎延胡索乙素测定

根据11月份测定结果，于12月份采挖合肥大蜀山野生延胡索洗净后于烘箱中60 ℃恒温烘6 h，阴干保存一天左右。手工剥离延胡索的颓废组织及表皮两部分。烘干至完全干燥后分部位用捣药罐捣碎，过药典3号筛。按照2.3条件下对剥离的不同部位进行提取，在2.2色谱条件下进样。结果见表6。

表6 12月份延胡索不同部位延胡索乙素含量测定结果统计表

2.9.3 不同产地规格样品中延胡索乙素测定

抽取市场中部分商户的样品，两两一组进行对照，将同一商户的货源地视为相同，测定各样品中的延胡索乙素含量，结果见表7。

表7 不同产地规格样品延胡索乙素液相结果统计表

3 讨论

3.1 延胡索块茎中延胡索乙素的分布

根据实验结果，在延胡索块茎中的各个部位均含有延胡索乙素，在相同质量的前提下，木质部及髓中含量最高，颓废组织及表皮中次之，而占延胡索块茎主要体积的韧皮部中含量最少，其中颓废组织较表皮又略高一些。合肥大蜀山的野生品延胡索乙素含量普遍高于各产地不同等级的栽培品(商品延胡索)，而在这些不同规格等级的商品延胡索中，延胡索乙素的含量与等级没有必然的相关性，因此也可说明延胡索乙素在延胡索块茎各部位均有分布，非在等级高的选货(体积大)，即韧皮部多的块茎中分布多。

3.2 根据产地现状对延胡索加工方式的建议

目前浙江与陕西为延胡索两大主产区，其中陕西产量最大，但陕西产区由于条件限制，对延胡索的初加工方法简陋，多以简易大锅水煮，煮后自然晒干的方式。在水煮过程中皮壳(即颓废组织及表皮)大量脱落，脱落的皮壳均用风机吹去。本实验的结果表明，延胡索颓废组织及表皮中尚含有大量的延胡索乙素，此种加工方式可造成入药部分的大量浪费，且有文献报道水煮方法虽利于大规模生产，但会造成延胡索乙素的大量流失[3]。因此建议陕西产区应设立统一加工点，采用浙江产区直接烘干的方式，以达到提升药材质量的目的。

3.3 对延胡索商品规格划分的建议

目前市场中延胡索药材规格等级主要分为统货与选货，以过筛的方式进行划分，二者的价格在市场上也有区别。本实验的结果表明，如以有效成分延胡索乙素的含量来衡量药材质量并按质论价，此种划分方法缺乏一定的合理性。曾有研究表明，剥离切块的延胡索中生物碱与粒径大小成负相关[4]；也有文献阐明，在粒径大小10～20 mm的延胡索块茎中，延胡索乙素含量无显著性差异[5]，其结论与本实验市场样品的测定结果相同，因此延胡索等级划分方式及划分依据有待商榷。

4 结论

延胡索块茎的颓废组织中延胡索乙素含量较高，因此采收加工中脱落的皮壳仍有很高的药用价值，对于这一资源应当合理利用。野生延胡索资源虽有分布，但由于自然生长环境的限制，人工采挖效率低下，没有产量，因此栽培延胡索仍然是商品的主要来源。据调查，当前国内栽培延胡索多由浙江引种，陕西已成为最大产区，但现有的产地加工方式会造成原药材质量下降，应借鉴浙江产地加工模式进行改良。1984年由原国家医药管理局和卫生部联合发布的《七十六种药材商品规格标准》，规定延胡索规格等级为一等：每50克45粒以内；二等：每50克45粒以外[6]。目前市场上商品延胡索仍按照此标准，以粒径大小作为等级划分及确定价格的主要依据，这一划分方式需要进一步修正。