枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合多烯磷脂酰胆碱治疗NAFLD疗效及对血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α的影响

刘扬河，龙登毅，贝筝，凌萌智，张艳,蔡笃雄

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是临床常见的一种疾病，是指在非酒精因素作用下发生肝细胞脂质贮积和肝脂肪变性为主要表现的临床综合征。随着人们物质生活水平的不断提高以及饮食结构的复杂多样，本病的发病率呈现逐年升高的趋势，其发病率高达17%～33%[1]。若病变进一步发展可由单纯性脂肪肝进展为脂肪性肝炎、肝纤维化以及肝硬化[2]。临床上，对于本病的治疗无论是中医还是西医均没有特效的药物。因此，寻找积极有效的医治措施是极为重要的。多烯磷脂酰胆碱具有促进肝功能恢复、调节肝脏能量平衡和促进肝组织再生等作用，并可将中性脂肪和胆固醇转化成容易代谢的分子形式，降低血脂水平[3]。枯草杆菌二联活菌能够抑制细菌生长，其可利用生物夺氧作用，制造厌氧菌生长环境，促进双歧杆菌等的生长，并可产生多种消化酶，促进机体对物质的消化和吸收[4]。我们应用枯草杆菌二联活菌联合多烯磷脂酰胆碱治疗NAFLD患者，获得了满意的临床效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2015年6月～2016年6月我科诊治的NAFLD患者78例，男性40例，女性38例；年龄30～68岁，平均年龄(45.76±4.25)岁。符合NAFLD诊断标准[5]。排除标准：（1）伴有严重的肝肾功能不全者；（2）近4周内接受过药物治疗者；（3）过敏体质者；（4）患肝豆状核变性或血色病等遗传性疾病；（5）妊娠或哺乳期妇女；（6）长期饮酒者；（7）病毒性、药物性和自身免疫性肝炎者；（8）伴有恶性肿瘤。采用随机数字表法将患者分为观察组39例和对照组39例，两组基线资料比较，无显著性统计学差异（P>0.05），具有可比性。本研究取得患者知情同意，并获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法 对入选患者进行健康教育、饮食指导，纠正不良生活习惯。给予对照组多烯磷脂酰胆碱胶囊[赛诺菲(北京)制药有限公司]456 mg口服，3次/d；观察组在对照组治疗的基础上给予枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊 (美常安,北京韩美药品有限公司）500 mg口服，3次/d。两组均治疗3 m。

1.3 观察指标 使用日本日立公司生产的生化分析仪检测血脂水平（试剂盒购自宁波瑞源生物科技有限公司）；采用ELISA法检测血清人尾肢同源蛋白2 （people end limb homologous protein 2，Pygo2，Biocompare公司）、高迁移率族蛋白 B1（high mobility group protein，HMGB1，上海西唐生物科技有限公司）、人缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α,美国 eBioscience 公司）水平；采用硫代巴比妥酸染色法测定血清丙二醛（malondialdehyde，MDA，南京建成生物研究所）；采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（superoxide disumutase，SOD，南京建成生物研究所）；常规行超声检查，脂肪肝分度标准：正常：肝脏近场回声无增强，回声略强于肾，肝脏远场回声不衰减，肝内管道结构显示清晰；轻度：肝脏近场回声略增强，回声略强于肾，肝脏远场回声略衰减；肝内管道结构显示不清；中度：肝脏近场回声弥漫性增强，回声高于肾脏，肝脏远场回声衰减；肝内管道结构显示不清；重度：肝脏近场回声弥漫性明显增强，回声明显高于肾脏，肝脏远场回声明显衰减。

1.4 统计学分析 应用SPSS 17.0统计学软件，血生化指标、Pygo2、HMGB1、HIF-1α 水平等计量资料以±s表示，采用t检验，率的比较采用x2检验，P<0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 两组治疗前后血脂水平的比较 在治疗3 m末，观察组TG、TC和LDL-C水平显著低于，而HDL-C水平显著高于对照组（P＜0.05，表 1）。

2.3 两组治疗前后氧化应激反应指标的比较 在观察结束时，观察组血清MAD水平显著低于，而SOD水平显著高于对照组（P＜0.05，表 2）。

2.4 两组治疗前后血清学指标比较 与治疗前比，两组治疗后血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平均显著降低，且观察组降低更显著（P＜0.05，表3）。

2.5 两组治疗前后肝脏B超检查结果的比较 治疗后，观察组患者脂肪肝改善情况显著好于对照组（P＜0.05，表 4）。

表1 两组血脂水平（±s）的比较

表1 两组血脂水平（±s）的比较

与对照组比，①P＜0.05

观察组对照组例数 TG（mmol/L） TC（mmol/L） LDL-C（mmol/L） HDL-C（U/L）治疗前 39 2.9±0.2 6.5±1.3 4.3±0.5 1.1±0.1治疗后 39 1.2±0.2① 4.1±0.2① 3.1±0.1① 3.9±0.3①治疗前 39 2.8±0.3 6.4±1.2 4.2±0.4 1.2±0.2治疗后 39 1.6±0.3 5.1±0.3 3.5±0.2 3.2±0.2

表2 两组血清氧化应激反应指标（±s）比较

表2 两组血清氧化应激反应指标（±s）比较

与对照组比，①P＜0.05

治疗组对照组例数 MDA（μmol/L） SOD（U/L）治疗前 39 6.9±1.3 123.4±13.5治疗后 39 4.4±0.7① 168.9±15.7①治疗前 39 6.8±1.2 123.3±13.6治疗后 39 5.4±0.8 154.4±15.3

表3 两组血清学指标（±s）比较

表3 两组血清学指标（±s）比较

与对照组比，①P＜0.05

Pygo2（μg/L） HMGB1（μg/L） HIF-1α（μg/L）治疗前 52.8±6.3 61.6±7.9 58.6±8.5治疗后 41.5±3.4① 15.7±4.6① 24.5±4.6①对照组 治疗前 52.5±6.6 61.3±7.4 58.2±8.3治疗后 48.2±3.7 26.4±5.1 32.6±4.7治疗组

3 讨论

NAFLD是指除了酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征。根据疾病严重程度可将其分为单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相关的肝硬化[7]。该病在西方国家肝病中占据首位病因，也是我国发达地区常见的一种慢性肝病，其患病率高达20%～30%[8]。研究表明，NAFLD的发生与胰岛素抵抗和遗传易感性有着非常密切的关联[9]。随着人们物质生活条件的不断改善，我国肥胖人群比例逐渐增高，导致NAFLD的发病率也不断增高。如果该病得不到及时有效的治疗，极易发展为肝硬化、肝衰竭，甚至肝癌，严重影响患者生命健康。

多烯磷脂酰胆碱胶囊可提供高剂量且容易吸收利用的高能多烯磷脂酰胆碱，其结构与内源性磷脂相一致，进入肝细胞后与肝细胞膜和细胞器膜相结合，并可分泌入胆汁，进而发挥促进肝功能恢复、调节肝脏能量平衡以及促进肝组织再生等作用，并可将中性脂肪和胆固醇转化成容易代谢的形式，降低血脂水平[3]。NAFLD的发病机制至今尚未明确，在众多致病因素中，小肠细菌过度生长、细菌移位、肠黏膜通透性改变等所致的肠源性内毒素血症在NAFLD发病中起着重要的作用[10,11]。伴随肝-肠轴的提出，肠道微生态失衡及肠粘膜屏障的损害正成为肝病研究的热点。美常安含有屎肠球菌和枯草杆菌两种活菌。屎肠球菌能较强地抑制致病菌生长，其繁殖比较迅速；枯草杆菌为过路菌，能通过生物夺氧作用，定植于肠道，并降低局部氧浓度和氧化还原电位，制成一种适合厌氧菌生长的环境，进而促进双歧杆菌等生长，且枯草杆菌还可产生多种消化酶，促进机体对营养物质的吸收，并产生多种抗菌化合物，进而抑制有害细菌的生长[4,12]。

Pygo2在肝纤维化的发生过程中起重要作用，其血清水平可评估肝纤维化程度[13,14]。HMGB1是一种高度保守的核内非组蛋白，参与细胞的多种病理生理过程。有研究指出HMGB1参与了炎症反应、细胞迁移以及肿瘤的发生、发展和侵袭过程[15,16]。在NAFLD发病过程中，由于脂肪堆积所致的肝细胞缺血缺氧也发挥了重要的作用[17,18]。HIF-1α的高表达在慢性肺病、肿瘤、酒精性肝病中都被证实，能够诱导NF-κB的表达，而NF-κB具有促进炎症反应的作用，进而参与NAFLD的发病过程[19,29]。本研究在联合用药治疗3个月后，观察组血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平明显低于对照组，说明美常安联合多烯磷脂酰胆碱可抑制NAFLD患者肝纤维化和降低机体炎症反应。观察组血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平的改善情况也明显优于对照组。治疗后，观察组血清MDA和SOD水平分别为（4.4±0.7）μmol/L 和（168.9±15.7）U/L，明显优于对照组的[（5.4±0.8）μmol/L和（154.4±15.3）U/L，P＜0.05]。两组患者治疗前B超检查均提示不同程度的肝脏饱满或增大，肝实质颗粒变细腻，回声光点增强，肝内血管走行变细或显示不清，后场回声衰减，肝肾界面显示不清晰。在治疗3个月末，上述情况均得到不同程度的改善，表现为肝实质颗粒变粗，回声光点増粗减轻，肝内血管走行显示清晰，后场回声增强，肝肾界面显示清晰，而美常安联合多烯磷脂酰胆碱治疗的NAFLD患者更明显，中重度脂肪肝患者的比例显著下降，效果确切。

总而言之，枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊联合多烯磷脂酰胆碱治疗NAFLD患者近期效果显著，可有效改善机体血脂紊乱水平，减轻氧化应激状态，并可降低血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平，使超声检查诊断的脂肪肝，尤其是中重度脂肪肝患者的比例大幅下降，具有良好的临床应用价值。但本研究观察时间较短，如何让患者长期维持治疗，何时停药及停药后观察与随访问题，停药后疗效维持问题等等，都需要在临床实践中继续观察。