广西产多花黄精不同炮制工艺研究

广西中医药大学药学院，广西 南宁 530000

黄精为合百科植物滇黄精(PoιygonatumkingianumCoLL.et HemsL.)、黄精(PolygonatumsibiricumRed.)或多花黄精(PolygonatumcyrtonemaHua.)的干燥根茎。黄精属于药食两用中药材，其化学成分主要为低聚糖、单糖和多糖，多种氨基酸、多种甾体皂苷和人体必需微量元素、生物碱等[1]。黄精历代入药生制兼用，但传统以黄精生用“刺人咽喉”，故多炮制后入药[2]。黄精炮制渊源已久，历代以来黄精炮制方法有：九蒸九曝法、蔓荆子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸晒法、熟地制等[3]。目前对黄精的研究大多数为黄精及滇黄精，炮制方法为酒制法，而主产在广西的多花黄精的研究还处于空白，据笔者调查，广西民间百姓多用黑豆炮制法炮制生黄精，而黑豆制法也分为黑豆汁制、黑豆、蜜、酒制，黑豆、生姜、蜜制等。笔者主要研究广西产多花黄精的酒制、黑豆制、清蒸、蔓荆子制、熟地制等不同炮制工艺，旨在为广西产多花黄精炮制工艺提供理论参考，为今后黄精黑豆制法规范化研究提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-L5紫外可见分光光度计(上海仪电分析仪器有限公司)，KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DFT-200C万能高速粉碎机(温岭市林大机械有限公司)，HH-S6数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)，SHB-B95型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。

1.2 材料 人参皂苷Rb1(批号：wkq16060402，四川省维克奇生物科技有限公司)，无水葡萄糖(批号wkq16082202，四川省维克奇生物科技有限公司)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的炮制与制备

2.1.1 生黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，切厚片，晒干[4]。

2.1.2 九蒸九曝法制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净。①拌黄酒：与适量(约10 %用量)黄酒与净黄精拌匀，并闷润至酒吸尽。②第1次蒸制、晒干：要求第1次“蒸至黄精中央发虚为度”(蒸制过程中注意收集黄精汁)，取出“晒至外皮微干”，然后将黄精拌入黄精汁和适量黄酒，并“闷润至辅料吸尽”。③反复蒸制、晒干：按第1次蒸制、晒干方法；再蒸，晒至外皮微干，再拌入黄精汁，适量黄精，如此反复，蒸制晒8次。第2次至第8次制需要使用黄酒的70 %用量。④第9次蒸制、晒干：最后将剩余(20 %用量)黄酒及黄精汁一起拌入，“蒸至外表棕黑色，有光泽，中心深褐色，质柔软，味甜为度”；最后晒至八成干，然后切成片状[5-6]。

2.1.3 黑豆制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加米泔水泡透心，淘净，取黑豆100 g熬取浓汁，与黄精共入锅中，加水与药平；煮沸后，用微火煮至微干，取出，筛去黑豆，晒至半干，又入蒸锅蒸至上气，取出日晒夜露，隔天又蒸至上气，再晒再露，每次蒸前，加入前次的蒸出液于盛装器皿中与黄精一起蒸，反复5次，晒干[7]。

2.1.4 黑豆、蜜、酒制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，浸泡2 d，每日换水1次，取出。取黑豆50 g水煮，取汁，与黄精合煎12 h，取出，晒至半干，再加熟蜜25 g及白酒25 g，共兑化拌匀后，蒸24 h，蒸至黑色，无麻味，晒干，即可[7]。

2.1.5 黑豆、生姜、蜜制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加水泡透后，再加水煮沸，去水，加生姜250 g，黑豆50 g煮2 h，晒半干，加蜂蜜75 g与水拌匀，蒸至黑亮为度，取出，晒干[7]。

2.1.6 熟地制黄精 取黄精500 g,除去杂质，洗净，切厚片，蒸至略带黑色，晒半干，露一夜。如此反复3次，至第4次与熟地膏120 g拌匀，润一夜，次日蒸至里面黑透，再晒、露一次，晒干[7]。

2.1.7 酒制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加酒拌匀，置蒸笼内，密闭，隔水加热蒸至黑透，取出，稍晾，晒干[7]。

2.1.8 清蒸黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，蒸6 h，晒八成干，加蒸出液浸润，再蒸6 h，至内心成黑色，晒半干，再加蒸出液拌匀，晒至六成干，在闷润均匀。蒸格上垫编织袋，蒸一夜，闷一夜(12 h)，次日取出剖视，以内外发黑为度，切片，晒干[7]。

2.1.9 蔓荆子制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，置适宜的容器内，加入蔓荆子汁及适量水拌匀，浸润过夜，置蒸制容器内蒸24 h，取出，晒干[7]。

2.2 浸出物的含量测定 取粉碎过筛后的黄精样品4 g，精密称定，按2015版《中国药典》四部附录通则2201项下热浸法[8]，用稀乙醇、蒸馏水作溶剂，测定醇溶性浸出物、水溶性浸出物，结果见表1。

表1 多花黄精不同炮制品糖类成分含量测定结果 (n=3)

注：括号内为归一化处理。

2.3 供试品溶液的制备 取黄精样品各200 g，60℃干燥至恒重，粉碎，过80目筛，备用。取黄精样品粉末各1.00 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇100 mL，水浴回流提取1 h，趁热过滤，滤渣用80 %乙醇洗3次，每次10 mL，取滤液，挥尽乙醇，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀后用于小分子总糖和还原糖含量测定[1]。将药渣与滤纸置圆底烧瓶中，加蒸馏水100 mL，水浴加热回流提取1 h，趁热过滤，滤渣用水洗3次，将滤液转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，用于总多糖的含量测定[1]。

2.4 还原糖的含量测定

2.4.1 葡萄糖对照溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品55.0 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得[1]。

2.4.2 DNS溶液的配制 取0.650 g 3,5-二硝基水杨酸，精密称定，加水50 mL溶解，转移至100 mL棕色容量瓶中，加入32.5 mL的2 mol/mL的NaOH溶液，再加入4.5 g丙三醇，加水至刻度，摇匀，即得[9]。

2.4.3 还原糖标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至4 mL，再各加入5 mL DNS溶液，摇匀后置沸水浴中加热6 min，冰浴冷却至室温，加水至刻度，以空白管为对照，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在540 nm处测定吸光度[9-10]。以吸光度(A)为纵坐标，浓度(μg/mL)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0067X+0.0353(r=0.9997),表明无水葡萄糖对照品溶液在22～132 μg/mL范围内具有良好的线性关系，用于DNS法测定还原糖含量。

2.4.4 样品的测定 精密量取“2.3”项下方法制备的供试品溶液各1.0 mL稀释到50 mL，精密量取4 mL，分别置10 mL具塞试管中，按照“2.4.3”项下方法自“再加入5 mL DNS溶液”起操作，测定吸光度，计算还原糖含量。结果见表2。

2.5 多糖、总糖的含量测定

2.5.1 苯酚溶液的制备 取2.5 g苯酚，精密称定，加水溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中[10]。

2.5.2 多糖、总糖标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，然后分别精密量取上述稀释后的葡萄糖对照品溶液各1 mL，置10 mL具塞试管中，加水至2mL，摇匀，再加1 mL的5%苯酚溶液和7 mL浓硫酸溶液，混匀，静置5 min,水浴加热20 min，并与冷却至室温，以空白管为对照，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在490 nm处测定吸光度[9-10]。以吸光度(A)为纵坐标，浓度(μg/mL)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0696X-0.0223(r=0.9998), 表明无水葡萄糖对照品溶液在2.2～13.2 μg/mL范围内具有良好的线性关系，用于苯酚-硫酸法测定多糖、总糖含量。

2.5.3 样品的测定 精密量取2.3项下方法制备的供试品溶液各0.5 mL，置10 mL具塞试管中，按照“2.5.2”项下方法自“加水至2 mL”起操作，测定吸光度，计算多糖含量，结果见表1。

精密量取2.3项下方法制备的供试品溶液各1.0 mL稀释到50 mL，精密量取1 mL，置10 mL具塞试管中，按照“2.5.2”项下方法自“加水至2 mL”起操作，测定吸光度，计算小分子总糖含量，结果见表2。

表2 多花黄精不同炮制品糖类成分含量测定结果 (n=3)

注：总糖=多糖+小分子总糖，非还原性低聚糖=小分子总糖-还原糖

2.6 总皂苷含量测定

2.6.1 标准曲线的制备 取人参皂苷Rb1对照品11.3 mg，精密称定，加甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中。取人参皂苷Rb1对照品溶液40、80、120、160、200 μL，置10 mL具塞试管中，挥尽溶剂，加0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液(新鲜配制)，冰浴时加0.8 mL高氯酸，混匀，60℃水浴加热15 min，再冰浴2 min，加5 mL冰醋酸，混匀，静置5 min，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在550 nm处测定吸光度[9]。以吸光度(A)为纵坐标，人参皂苷Rb1的质量(μg)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0039X+0.0305(r=0.9997),结果表明人参皂苷对照品溶液在45.2～226 μg范围内具有良好的线性关系。

2.6.2 样品的测定 取黄精样品粉末各1.00 g，精密称定，加14倍量水饱和正丁醇，40℃超声提取50 min，过滤，滤渣再提取1次，合并两次滤液，置25 mL容量瓶中，加水饱和正丁醇至刻度，摇匀[11]。取上述供试品溶液各100 μL，按照“2.6.1”项下方法自“置10 mL具塞试管中”起操作，测定吸光度，计算总皂苷含量。结果见表1。

2.7 数据处理及综合评分 以多花黄精不同炮制品的浸出物、还原糖、多糖、小分子总糖、总皂苷含量为指标，采用综合评分法评定。评分时以各指标的实验最大值作为参照，将数据进行归一化处理，再根据各指标的炮制工艺特性和成分重要性，给予糖类成分含量加权系数为0.4，总皂苷含量加权系数为0.3，浸出物加权系数为0.3，以行归一化处理后的数值加权求和，即得综合评分，其关系式为：(还原糖含量/还原糖含量最大值+多糖含量/多糖含量最大值+小分子总糖含量/小分子总糖含量最大值)/3×40+(总皂苷含量/总皂苷含量最大值)×30+(醇溶性浸出物含量/醇溶性浸出物含量最大值+水溶性浸出物含量/水溶性浸出物含量最大值)/2×30[1],结果见表1。

3 讨论

糖类是多花黄精中含量最高的成分，历代以来黄精炮制方法有九蒸九曝法、蔓荆子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸晒法、熟地制等，研究不同炮制工艺对广西产多花黄精成分含量的影响，优选出最佳炮制工艺，为广西产多花黄精制法规范化研究提供参考依据。且在2015版《中国药典》中对黄精药材及饮片检查项皆有要求“含黄精多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于4.0%”[4]。不同炮制品与生品对照，多糖含量均有所增加，还原糖含量除熟地制多花黄精有所降低外，其它炮制品还原糖含量均有所增加；而不同炮制品的总糖、小分子总糖、非还原性低聚糖含量均比生品低。不同炮制工艺炮制的多花黄精之间的含量有所不同，其质量也存在一定差异，其功效是否也存在一定的差异，有待于进一步的深入研究。甾体皂苷是多花黄精的主要活性成分之一，初步研究表明，不同炮制工艺炮制的多花黄精之间的总皂苷含量差异不大，但与生品总皂苷含量对比，均比生品总皂苷含量高，其中以蔓荆子制多花黄精含总皂苷量最高。

采用多指标综合评价，蔓荆子制多花黄精得分最高为87.47，其它炮制品依次为：清蒸(86.67)>九蒸九曝法(83.08)>酒制(81.31)>黑豆、蜜、酒制(77.07)>黑豆、姜、蜜制(72.36)>熟地制(70.55)>生品(66.16)>黑豆制(64.35)。根据多花黄精有效成分及综合评分考察，蔓荆子制法为广西产多花黄精的最佳炮制工艺，其次为清蒸、九蒸九曝法，酒制。

广西产多花黄精经不同炮制工艺炮制后，其水溶性浸出物、醇溶性浸出、糖类、总皂苷等成分含量均与生品有所差异，其中以水溶性浸出物、醇溶性浸出物及非还原型低聚糖尤甚；且黑豆制多花黄精取自《现代中药炮制手册》记载，但其结果与生品比较，差异尤甚，故有待于对多花黄精炮制工艺做进一步的深入研究。

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