外周血Th17细胞对脓毒症急性肾损伤的早期诊断价值

何 晗，刘新君，魏 炯

(四川省巴中市中心医院肾内科 636000)

急性肾损伤(AKI)是由多种原因引起的肾功能不全，导致毒素蓄积，近年来，其发病率和病死率均呈明显升高趋势[1]。有研究显示，脓毒症是引起AKI的重要原因，其病死率高达44%[2]。因此，对脓毒症AKI进行早期诊断，从而有效进行干预治疗，是降低其病死率的关键。有研究显示，外周血Th17细胞可作为脓毒症的早期诊断标志物，对于脓毒症的诊断具有较高的敏感度和特异度[3]。但外周血Th17细胞对脓毒症AKI的早期诊断效能如何，目前少有相关研究报道。本研究通过观察脓毒症及脓毒症AKI患者外周血Th17细胞水平，探讨外周血Th17细胞水平在脓毒症AKI早期诊断中的作用，并指导临床治疗，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2012年8月至2016年8月本院收治的300例脓毒症患者作为研究对象，其中男215例，女85例；年龄21～80岁，平均(51.2±10.3)岁。所有患者均满足2012年脓毒症国际诊断与治疗指南标准[4]。排除免疫系统疾病、终末期肾脏病、长期行血液透析及近期使用免疫抑制剂治疗的患者。脓毒症的病因主要包括：肺部感染105例，腹腔感染70例，尿路感染50例，皮肤软组织感染30例及其他45例。根据脓毒症是否并发AKI，将上述患者分为AKI组(65例)和非AKI组(235例)。AKI组患者均满足AKI诊断标准：48 h内患者体内肌酐升高水平≥26.5 μmol/L或肌酐增加≥基线水平的50%，或尿量持续6 h内<0.5 mL/(kg·h)。根据急性生理与慢性健康状况(APACHE Ⅱ)评分标准对AKI组患者按病情严重程度进行分级。另选取同期在本院体检的80例健康者作为对照组。两组研究对象在性别、年龄等方面比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；同时，AKI组与非AKI组在脓毒症病因方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。该临床研究获得本院伦理委员会批准，并严格遵守医学伦理规范执行。

1.2治疗方法 所有脓毒症患者均参照2008年脓毒症国际治疗指南标准给予脓毒症集束化治疗，包括抗感染、液体复苏、强化胰岛素、营养及呼吸支持等治疗，必要时给予小剂量糖皮质激素及连续性血液净化治疗。

1.3标本采集与检测 在取得知情同意的情况下，采集脓毒症患者治疗前后及对照组血液标本。(1)外周血Th17细胞检测：清晨空腹采集脓毒症患者及对照组外周静脉血3 mL，经肝素抗凝，1 500 r/min常温下离心15 min后，采用流式细胞仪检测Th17细胞水平，具体操作步骤参照外周血Th17细胞检测相关参考文献[5]。(2)白细胞介素(IL)-17和IL-6：采用ELISA检测各组研究对象外周血IL-17和IL-6水平，严格按试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司产品)说明书操作。(3)采集外周静脉血标本检测血常规、胱抑素C(Cys C)及其他指标。

2 结 果

2.1各组Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比较 见表1、图1。AKI组外周血Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平均明显高于非AKI组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。非AKI组外周血Th17细胞、IL-17、IL-6水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，而Cys C水平比较，两组差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 各组Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与非AKI组比较，#P<0.05

图1 不同组间外周血Th17细胞水平

2.2AKI组患者治疗前后外周血Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比较 见表2。经有效治疗后，AKI组患者外周血Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平较治疗前均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表2 AKI组患者治疗前后Th17细胞、IL-17、IL-6及Cys C水平比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.3外周血Th17细胞与IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ评分的相关性分析 对AKI组患者外周血Th17细胞与IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ评分进行相关分析结果显示，外周血Th17细胞与IL-17、IL-6、Cys C水平及APACHE Ⅱ 评分均呈明显正相关(r=0.81、0.65、0.72、0.76，P<0.01)。

2.4AKI组外周血Th17细胞的ROC曲线分析 通过ROC曲线分析发现，外周血Th17细胞的曲线下面积(AUC)为0.850(95%CI：0.771～0.912)，截断值为7.4%，敏感度和特异度分别为86.1%和83.5%；IL-17的AUC为0.801(95%CI：0.715～0.895)，截断值为35.1 ng/L，敏感度和特异度分别为78.2%和79.5%；IL-6的AUC为0.759(95%CI：0.674～0.831)，截断值为23.2 ng/L，敏感度和特异度分别为70.1%和68.6%；Cys C的AUC为0.783(95%CI：0.701～0.857)，截断值为2.2 mg/L，敏感度和特异度分别为76.5%和74.8%。外周血Th17细胞AUC、敏感度及特异度均明显优于IL-17、IL-6及Cys C。

3 讨 论

脓毒症是诱发AKI的重要原因，其主要机制与内毒素、炎症因子的大量释放，导致肾损伤有关[6]。尽管对脓毒症AKI发生的早期认识和治疗已取得一定进展，但AKI患者的病死率目前仍然较高，其重要原因之一是缺乏有效的早期诊断脓毒症AKI的生物标志物，延误了最佳的治疗时间窗。传统的生化标志物如SCr、24 h尿量及尿素氮等指标虽然临床应用广泛，但容易受年龄、性别等外界因素的影响，同时其水平变化较慢，不能早期反映肾功能情况[7]。因此，探索新的早期诊断脓毒症AKI的标志物，是提高脓毒症AKI患者生存率的关键。

炎性反应在脓毒症的发生和发展过程中起着关键作用，其中淋巴细胞是刺激炎性反应及调节免疫应答的重要效应器[8]。根据细胞表面分化抗原的不同，T淋巴细胞分为CD4+和CD8+2个亚群，其中CD4主要表达于辅助T细胞，参与细胞介导的免疫应答。近年来研究发现，在转化生长因子β和IL-6的共同诱导下可分化一种新的淋巴细胞亚群Th17，其主要分泌IL-17，参与炎性反应[9]。Th17细胞可通过招募中性粒细胞，使其激活，抵抗细菌感染[10]。相关研究证实，在脓毒症及相关感染性疾病中，其外周血中Th17细胞水平明显升高，并且与疾病的严重程度密切相关，机体Th17细胞水平及其功能在极大程度上决定了其患者病情严重程度及预后情况[11-12]。本研究通过检测各组外周血Th17细胞水平，结果显示，脓毒症AKI组明显高于非AKI组和对照组，表明外周血Th17细胞水平的升高可能与脓毒症AKI的发生有关。针对AKI组患者病情给予相应治疗后，其外周血Th17细胞水平明显降低，表明外周血Th17细胞水平的变化与脓毒症AKI患者的临床治疗效果密切相关。进一步相关性分析显示，外周血Th17细胞水平与IL-17、IL-6、Cys C及APACHE Ⅱ评分呈明显正相关，即外周血Th17细胞水平与AKI患者病情严重程度密切相关。通过ROC曲线分析显示，外周血Th17细胞水平对脓毒症AKI的早期诊断价值高于IL-17、IL-6及Cys C水平，并且其敏感度和特异度均较高，可更有效地反映早期肾损害。本研究由于脓毒症AKI样本量偏少，缺乏足够说服力，同时存在部分未被纳入的AKI患者，可能导致一定的偏倚。此外，由于样本量的限制，未对纳入的脓毒症AKI患者的病情严重程度进一步分层比较各分组间指标的差异。需进一步扩大样本量，采取多中心联合的方式对外周血Th17细胞水平在早期诊断脓毒症AKI的临床价值方面做进一步研究。

综上所述，外周血Th17细胞水平对早期诊断脓毒症AKI患者具有较高的敏感度和特异度，可作为脓毒症AKI早期诊断的新型生物标志物。

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